治伤活血胶囊质量标准研究及中国慢性乙肝患者生活质量指数

PAGEPAGE1治伤活血胶囊质量标准研究关键词：治伤活血胶囊；当归；三七；冰片；丹参；骨碎补；TLC；HPLC摘要：目的：建立治伤活血胶囊（当归；三七；冰片；丹参；骨碎补）的质量标准。方法：以冰片；丹参酮IIA为对照品，以当归；三七为对照药材进行薄层色谱鉴别，以阿魏酸为对照品，采用高效液相色谱方法进行含量测定。结果：阿魏酸平均回收率为99.8%，RSD为1.6%，薄层图谱斑点清晰，阴性对照无干扰。结论：结果准确，方法重复性好。治伤活血胶囊由当归、三七、乳香（制）、冰片、土鳖虫、自然铜（煅）、丹参、骨碎补八味药经提取加工制成。具补血活血，调经止痛，润肠通便之功效，用于血虚萎黄，眩晕心悸，月经不调，经闭痛经，虚寒腹痛，肠燥便秘，风湿痹痛，跌打损伤，痈疽疮疡等症。为有效控制药品的质量，本文采用TLC法对当归；三七；冰片；丹参进行了定性鉴别，并采用了HPLC法对该方中当归主成分阿魏酸进行了定量控制。1、仪器与试药AgilentG1311AQuatPump，G1314AVWD，G1379ADEGASSER，AT-330柱温箱，Thermo-C18（250mm×4.6mm，5um）色谱柱，硅胶G薄层板（自制）。冰片对照品（中国药品生物制品检定所提供，编号为110743—200504）。三七对照药材为阳性对照（中国药品生物制品检定所，批号：120941—200807），丹参酮IIA对照品为阳性对照（中国药品生物制品检定所，批号：110766—200417），当归对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：120927—200512）阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号：0773-9910）塞多利斯全自动电子天平，SG2200H超声波清洗器；色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯。2、定性研究2.1为方中冰片的薄层色谱鉴别。取本品内容物1g，加石油醚（30-60℃）15ml，超声处理2-3分钟，滤过，滤液低温浓缩至约1ml，作为供试品溶液。另取冰片对照品，加石油醚（30-60℃）制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。取缺冰片的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30-60℃）—醋酸乙酯（19：2）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105摄氏度烘数分钟。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照液色谱无干扰（图1）。图1冰片的TLC图1、冰片对照品2、3、4、供试品溶液5、缺冰片阴性对照溶液2．2当归的鉴别取本品内容物6g，加乙醚40ml，超声处理10分钟，滤过，残渣备用，滤液挥去乙醚，残渣加乙醇2ml使溶解，滤过，滤液作为供试品溶液。另取当归对照药材1g，同法制成对照药材溶液。取缺当归的阴性样品液按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正己烷—乙酸乙酯（9：1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的主斑点。阴性对照液色谱无干扰（图2）。图2当归的TLC图1、当归对照药材2、3、4、供试品溶液5、缺当归阴性对照溶液2.3三七的鉴别取【鉴别】（2.2）项下乙醚提取后的残渣，挥尽乙醚，加甲醇30ml，超声处理15分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水10ml使溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次15ml，合并正丁醇液，用水洗涤2次，每次10ml，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取三七对照药材1g，加甲醇30ml同法制成对照药材溶液。取缺三七的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各2ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇—醋酸乙酯—水（4：1：5）的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘数分钟。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，日光下显相同的主斑点；紫外光灯（365nm）下显相同颜色的荧光主斑点。阴性对照液色谱无干扰（图3）。日光下荧光下图3三七的TLC图1、三七对照药材2、3、4、供试品溶液5、缺三七阴性对照溶液2.4丹参的鉴别取本品内容物6g，加醋酸乙酯20ml，置水浴上加热回流30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1ml使溶解，作为供试品。另取丹参酮11A对照品，加乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。取缺丹参的阴性样品按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法（附录VIB）试验，吸取上述三种溶液各10ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯—醋酸乙酯（19：1）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的暗红色斑点。阴性对照液色谱无干扰（图4）。图4丹参的TLC图1、丹参酮IIA对照品2、3、4、供试品溶液5、缺丹参阴性对照溶液3、定量研究3.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；乙腈—甲醇—1%醋酸溶液（1:1:5）为流动相；检测波长为313nm。理论板数按阿魏酸峰计算应不低于2000。3.2溶液的配制对照品溶液的制备取阿魏酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加甲醇制成每1ml含20ug的溶液，即得。供试品溶液的制备取本品内容物约2.3g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加0.5%碳酸钠溶液20ml，超声处理（功率150W，频率20kHz）30分钟，提取液移至离心管中，离心（转速为每分钟3000转）10分钟，取上清液，置分液漏斗中，沉淀再用0.5%的碳酸钠溶液洗涤3次，每次10ml，洗液并入同一分液漏斗中，用2%氯化钠溶液饱和的乙醚洗涤3次，每次20ml，弃去乙醚液，水溶液用盐酸调节ph值至1－2，再用2%氯化钠溶液饱和的乙醚振摇提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），必要时离心消除乳化层，合并乙醚提取液，回收乙醚至干，残渣用甲醇溶解，转移至25ml棕色量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得（避光操作）。测定时用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取20μl进样。阴性对照溶液的制备按处方取不含当归的其它药材制成阴性对照样品，按供试品溶液制备方法制备，以上三种溶液按上述色谱条件进样，测定。结果阴性对照在阿魏酸峰相应的保留时间处无干扰。见图6。图6-1阿魏酸对照品溶液及治伤活血胶囊供试品溶液HPLC图谱阿魏酸对照品溶液HPLC图谱治伤活血胶囊供试品溶液HPLC图谱缺当归的阴性样品溶液HPLC图谱3.3线性关系考察精密称取阿魏酸对照品10.6mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶液使溶解，并稀释至刻度。摇匀（212ug/ml），再分别精密吸取对照品母液适量，用甲醇溶液稀释成不同浓度的对照品溶液：10.6ug/ml、21.2ug/ml、42.4ug/ml、63.6ug/ml、84.8ug/ml。分别精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各20ul，按正文中色谱条件分析，测定峰面积。以峰面积积分值为纵坐标，进样阿魏酸的量为横坐标绘制标准曲线（见阿魏酸对照品溶液标准曲线图），计算得回归方程：Y=5087215X+228190,R=0.9990。表明阿魏酸在0.212ug～1.696ug范围内具有良好线性关系。具体数据及标准曲线见下表。线性关系考察结果阿魏酸浓度（ug/ml）10.621.242.463.684.8阿魏酸的量（ug）0.2120.4240.8481.2721.696峰面积1434435.22356330.64452793.86494167.48797145以峰面积积分值为纵坐标，阿魏酸的量为横坐标绘制标准曲线（见阿魏酸对照品溶液标准曲线图）：阿魏酸对照品溶液标准曲线图计算得回归方程：Y=5087215X+228190，R=0.9990。表明阿魏酸在0.212ug～1.696ug范围内具有良好线性关系。3.4稳定性试验取本品内容物约2.3g，研细，精密称定，按【含量测定】项下的方法制备供试品溶液，进样，测定，然后分别于第2小时、4小时、6小时、8小时分别进样，测定，对其稳定性进行考察。结果见下表。稳定性试验结果放置时间（h）峰面积RSD%024682210050.62209450.42202809.42149963.12173精密度试验精密吸取阿魏酸对照品溶液（21.2μg/ml）20μl，重复进样5次，测定峰面积，（结果见表4），阿魏酸峰面积积分值的相对标准偏差小于2%，表明此法精密度良好。表4精密度试验结果实验次数峰面积RSD%1234522225432220548.621505922207429.12166469.61.53.6重复性试验分别取同一批治伤活血胶囊样品5份，按正文中含量测定项下方法试验，测定阿魏酸的含量，结果见表5。样品中阿魏酸含量的相对标准偏差为1.27%，表明此法重复性良好。表5重复性试验结果试验号阿魏酸含量（ug/g）平均含量（ug/g）RSD（%）1212.92218.43216.8216.341.274219.45214.23.7加样回收率试验采用加样回收法。取同一批已知含量的治伤活血胶囊精密称取样品约1g各5份，分别定量加入阿魏酸对照品适量，按正文中含量测定项下方法测定阿魏酸的含量。结果见表6，平均回收率为99.8%，相对标准偏差1.6%，表明此法回收率良好。实测阿魏酸量-取样相当阿魏酸量回收率=×100%加入阿魏酸对照品量表6回收率试验结果取样量（g）样品中阿魏酸量（ug）加入阿魏酸量（ug）实测阿魏酸量（ug）回收率（%）平均回收率（%）RSD（%）1.24721.24931.24981.24071.2400269.8270.3270.4268.4268.3285285285285285553.3561.8539.7552.8550.899.5102.398.199.84、讨论治伤活血胶囊主要由当归等八味药组成，本次实验对冰片的研究时，曾比较了超声处理提取方法，对比了环已烷—氯仿——醋酸乙酯（9：1：2）展开剂，比较了紫外光灯下（365nm）检视方法，结果以本文的方法较好。实验对三七的研究时，为了更能控制产品的质量，采用三七对照药材为阳性对照，曾比较了：Ⅰ氯仿—醋酸乙酯—甲醇—水（10：4：1：5）；Ⅱ甲苯-甲酸乙酯-甲酸（6:6:0.1）；Ⅲ异辛烷—苯—氯仿—醋酸乙酯—甲酸（6:3:1.5:2:0.1）；Ⅳ正丁醇—醋酸乙酯—水（4：1：5）的上层溶液等多种展开剂，结果以展开剂Ⅳ展开后的斑点圆整，分离效果好。综上，本品由八味药材组成，对五味药材分别进行了定性、定量的分析，能有效地控制本品的质量。参考文献1、《中国药典》2005年版一部2、《中华本草》上海科学技术出版社3、《天然药物成分定量分析》中国医药科技出版社4、苗明三等.现代实用中药质量控制技术5、6、“中国慢性乙肝患者生活质量指数”发布会新闻资料目录新闻稿背景资料一：“中国慢性乙肝患者生活质量指数”调查数据背景资料二：演讲嘉宾介绍

<新闻稿>“中国慢性乙肝患者生活质量指数”在京发布主、客观四大因素是影响患者生活质量的关键（2009年5月13日，北京）在第二个世界肝炎日即将到来之际，“中国慢性乙肝患者生活质量指数”今天在京公布。指数显示，目前中国慢性乙肝患者的生活质量为64.1分（满分100分），总体生活质量仍待进一步提高。专家指出，主、客观四大关键因素——即治疗状况、社会“作为系统评估慢性乙肝患者生活质量的指数，该指数旨在建立起一个追踪和评估慢性乙肝患者生活质量的科学平台，为衡量慢性乙肝患者的生活质量提供标准和依据，同时，有助于了解影响慢性乙肝患者生活质量的主要因素，以便今后有的放矢，帮助更多患者提高生活质量，实现‘轻松生活’。”指数发起方中国肝炎防治基金会秘书长杨希忠表示。该指数以国际上广泛应用的、用来评估患者生活质量的MOSSF-36生存质量量表为基础，结合了中国慢性乙肝患者的特点，从总体健康状况、躯体功能、肌体疼痛、社会功能、活力、心理卫生、治疗效果、社会支持、治疗依从性和经济状况十个方面来评估慢性乙肝患者的生活质量。慢性乙肝一直是中国重要的公共卫生问题之一，目前我国计有慢性乙肝患者2,000万人，乙肝表面抗原携带者9,300万人。随着社会经济的发展，庞大的慢性乙肝患者人群的生活质量越来越受到社会各界的关注。“中国慢性乙肝患者生活质量指数”项目正是在此背景下应运而生，来自8个城市的600名乙肝患者参与了此次调研。客观因素决定慢性乙肝患者的生活质量客观因素之一：治疗状况启示：长期控制病情是前提，听从医生指导、坚持抗病毒、不耐药是保障[“中国慢性乙肝患者生活质量指数”数据]数据显示，在疾病控制状况方面，病情得到有效控制，尤其是得到长期有效控制的患者，其平均生活质量指数为66.5，高于总体平均指数；而病情未好转的患者、病情加重的患者，其平均生活质量指数分别仅为60.7和53.4，大大低于总体平均指数。在听从医生指导方面，根据医生指导暂停或更换治疗的患者，其平均生活质量指数为64.7，高于总体平均值；而自行停止或更换治疗的患者，其平均生活质量指数仅为61.8，低于总体平均值。坚持进行抗病毒治疗的患者，其平均生活质量指数高于未坚持抗病毒治疗的患者，前者的平均值为64.2，而后者仅为63.2。同样，未出现耐药患者的平均生活质量指数为65，高于出现耐药患者的平均生活质量指数62.4。[专家解读]中国工程院院士、北京大学医学部教授庄辉对慢性乙肝患者而言，由于现有医学条件尚不能彻底清除乙肝病毒，因此长期控制病情，是享有正常生活质量、回归正常工作学习的前提条件。要长期稳定控制病情，就要在医生指导下进行科学的抗病毒治疗，使用核苷类药物的患者，初选药物时，应采取预防耐药策略，即首选强效、低耐药的抗病毒药物，尽量避免耐药的发生。此外，患者需要提高治疗的依从性，无论是更换治疗方案还是停药都应遵循医嘱。客观因素之二：社会经济因素启示：法规环境有所改善，社会支持仍需加强[“中国慢性乙肝患者生活质量指数”数据]全职患者的平均生活质量指数为65.1，高于平均值；而失业患者的生活质量指数仅为60.6，大大低于平均值。患者的生活质量指数与家庭收入相关，收入较高的群体其生活质量指数也较高。在社会支持部分，超过半数（53%）的患者认为“保护乙肝患者的权益和法规得到了有效执行”，只有15%的患者持不同意见，其余患者表示不能确定或没有相关经历。在社会关系方面，近半数（49%）的患者表示“知道我患有乙肝，朋友、同事没有因此疏远我”；但仍有42%的患者认为，很难向老板和其它人解释自己的健康问题。[专家解读]中国工程院院士、北京大学医学部教授庄辉社会对慢性乙肝患者的关爱、理解和支持，是改善患者生活质量的重要因素。此次指数显示的结果令人看到了希望，说明保护乙肝群体权益的努力，以及多年来的乙肝科普教育见到了一定成效。乙肝歧视的减少，将有助于改善乙肝群体的就业环境，从而提高他们的生活质量。经济因素一直是广大患者非常关心的话题，医保如能覆盖更多的抗病毒药物，将有助于减轻患者的经济负担，改善患者的治疗状况，从而提高他们的生活质量。主观因素直接影响客观因素主观因素之一：治疗观念启示：初治观念广泛认同，耐药认知有待提高[“中国慢性乙肝患者生活质量指数”数据]所有正在或曾经采用核苷类药物治疗的患者中，99%的患者认为“初治药物选择一定要慎重”，94%的患者认为“初治时的药物选择也应考虑整体治疗费用”，87%的患者认为“初治时要尽量选择抗病毒能力强、耐药率低的药物”，85%的患者认为“初治时的药物选择可能会影响长期疗效”。正在或曾经采用核苷类药物治疗的患者中，生活质量指数高于平均值的患者，对耐药原因的认知虽略好于总体，但对“病人依从性不好，服用药物不规律”、“使用的药物抗病毒能力较弱”、“使用耐药发生率高的药物”等主要耐药原因的认识均未过半。[专家解读]复旦大学附属华山医院感染科终身教授翁心华治疗观念会影响乙肝患者对治疗方案的选择和治疗依从性，从而影响患者的生活质量。很多患者由于担心耐药问题，不敢使用核苷类药物进行抗病毒治疗，本调研结果也说明，患者对耐药的认识还有待提高。事实上，影响耐药主要有两大因素：抗病毒药物抑制病毒复制的能力，以及药物抵御耐药的基因屏障高低。核苷初治的患者，选择抑制病毒复制能力强且具有高基因屏障的药物，可最大限度地预防耐药的发生。主观因素之二：心理因素启示：提高生活质量，从改变态度开始[“中国慢性乙肝患者生活质量指数”数据]在所有受访者中，60%的患者表示，在过去4周，曾因为情绪原因（比如压抑或焦虑）而减少了工作或其它活动的时间。同时，绝大多数患者也充分认识到了态度的重要性，95%的人表示将在未来12个月，通过“积极乐观的治疗心态”来改善疾病状况。[专家解读]复旦大学附属华山医院感染科终身教授翁心华慢性乙肝的治疗是个长期过程，急于求成往往会增加心理压力。事实上，乐观的心态往往是取得良好治疗效果的重要因素，而且是通过自身努力可以把握的因素。良好的心态，有助于患者树立理性的治疗目标，从而科学选择治疗方案，控制病情，提高生活质量。中国肝炎防治基金会副理事长王钊女士表示，“主观、客观因素综合影响乙肝患者的生活质量。主观因素是患者可以积极把握的，并将直接影响客观因素，而客观因素决定患者生活质量。就慢性乙肝患者来讲，在主观因素方面，患者要科学地认识疾病，重视初治，着眼长远，保持乐观积极的心态；而在客观因素方面，患者在通过持久控制病情提高生活质量的同时，全社会都应给予乙肝患者更大的理解与支持。我们期待着更多的乙肝患者能够实现轻松生活。”注：本次“中国慢性乙肝患者生活质量指数”的调研及数据统计分析由全球最大的专项市场研究公司TNS进行。-结束-

关于世界肝炎日2009年5月19日（星期四）是第二个世界肝炎日，也是世界肝炎联盟于2008年所发起的行动的延续。作为一项完全以患者为主导的行动，2009年的世界肝炎日旨在提高公众对乙肝和丙肝的认知度，并将对这些疾病的政治支持提升至与艾滋病、结核病和疟疾病相当的水平。世界肝炎日宣传活动的长期目标是不断促进乙肝和丙肝患者或乙肝、丙肝感染高危人群的健康。2009年世界肝炎日宣传活动的主题是“媒体垂询：陶锡萍百时美施贵宝（中国）投资有限公司电话8360Email:stella.tao@朱琦易为公关电话6702Email:effie.zhu@

<背景资料一>“中国慢性乙肝患者生活质量指数”主要调研数据与关键发现指数构成总总体指数总体健康状况治疗效果躯体功能肌体疼痛社会功能活力心理卫生社会支持治疗依从性经济状况参照《健康调查简表(SF36)》的标准问卷结合中国慢性乙肝患者现状

长期控制病情是提高患者生活质量的前提高的高的生活质量指数值64.166.566.465.460.754.3病情得到长期控制的患者，其平均生活质量指数最高；而病情未好转的患者、病情加重的患者，其平均生活质量指数均大幅低于总体平均指数。良好治疗依从性有助于提高患者生活质量高的高的生活质量指数值64.164.761.8遵循医生指导的患者，其生活质量指数高于未遵医嘱的患者。

坚持抗病毒治疗有助于提高患者生活质量高的高的生活质量64.164.263.2指数值坚持抗病毒治疗的患者，其生活质量指数高于未坚持抗病毒的患者。无耐药发生的患者生活质量更高高的高的生活质量64.165.062.4指数值无耐药发生的患者，其生活质量指数高于出现耐药的患者。

职业的影响64.064.062.460.6高的生活质量指数值全职患者的平均生活质量指数大大高于失业患者。社会支持66.066.060.064.1指数值高的生活质量没有被朋友、同事疏远的患者的平均生活质量指数较高。

<背景资料二>演讲嘉宾介绍王钊中国肝炎防治基金会常务副理事长