电泳技术的临床应用完整版课件

现代电泳技术的临床应用Sebia厦门市第二医院王友祥现代电泳技术的临床应用Sebia厦门市第二医院王友祥1使用范围和检测原理电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分离样品中各种分子带电性质以及分子本身大小,形状等性质的差异,使带电分子产生不同的迁移速度,从而对样品进行分离,鉴定或提纯的技术.在生化检测中,主要用于分离各类蛋白分子.使用范围和检测原理电泳技术就是利用在电场的作用下,由于待分2发展历程1809年俄国科学家列伊斯首先发现电泳现象1937年瑞典科学家Tiselius建立了界面电泳技术,并首次证明了血清是由白蛋白及α,β,γ球蛋白组成的因此获得1948年诺贝尔化学奖.1950年后,区带电泳从发展到成熟.1980年以来,毛细管电泳逐渐受到重视发展历程1809年俄国科学家列伊斯首先发现电泳现象3常用的电泳技术滤纸电泳醋酸纤维素薄膜电泳凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳:琼脂糖凝胶适用于蛋白质和核酸的电泳支持介质,成本低,结果易保存.聚丙烯酰胺凝胶电泳:最常用的定性分析蛋白质的电泳方法,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量,一般用于科研.毛细管电泳:经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物常用的电泳技术滤纸电泳4电泳技术的医学应用蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段,可全面精确,描绘出患者蛋白质的全貌.对疾病的早期诊断,疗效观察及预后判断具有非常重要的临床价值.电泳技术的医学应用蛋白质电泳分析是实验室必备的检测手段,可5蛋白的电泳检测根据使用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到不同类型的蛋白:

血清蛋白 脂蛋白(运送脂类)

各种酶类 血红蛋白蛋白的电泳检测根据使用的染料或者是底物的不同，我们可以检测到6电泳技术在临检中的应用急,慢性炎症造血系统疾病:多发性骨髓瘤,巨免疫球蛋白血症肾脏疾病肝脏疾病中枢神经系统疾病:多发性硬化症遗传性疾病:地中海贫血代谢性疾病:糖尿病心血管疾病:心梗,动脉粥样硬化恶性肿瘤电泳技术在临检中的应用急,慢性炎症遗传性疾病:地中海贫血7正确解释电泳结果

为临床对疾病的判断提供可靠参考正确解释电泳结果

为临床对疾病的判断提供可靠参考8电泳技术的临床应用完整版课件9gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,

a1抗胰蛋白酶:结合珠蛋白,

a2

巨球蛋白,

a脂蛋白,

铜蓝蛋白:转铁蛋白,血液结合素,C3补体,b脂蛋白:免疫球蛋白血清蛋白电泳gba2白蛋白a1:a1酸性糖蛋白,a1抗胰蛋白酶:结10蛋白染色血清蛋白电泳后会呈现出5或者6条带.染色后,每个条带呈现出的不同程度的染色对应着各自的蛋白浓度.如何检测染色程度:

需要使用光密度仪.蛋白染色血清蛋白电泳后会呈现出5或者6条带.11正常的电泳图谱正常的电泳图谱12

出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱出现单克隆免疫球蛋白的电泳图谱13蛋白电泳检测的不同步骤制备胶片,加样,启动电源,开始电泳,染色,脱色,结果检测蛋白电泳检测的不同步骤制备胶片,14血清蛋白电泳的目的是什么?检测异常:

含量的变化:条带中蛋白含量的增加或减少 性质的变化:异常条带的出现血清蛋白电泳的目的是什么?检测异常:15临床意义将电泳作为常规检测之一,基于蛋白含量的变化,有助于我们对以下疾病的筛查:

炎症 营养不良 肺气肿

临床意义将电泳作为常规检测之一,基于蛋白含量的变化,有助16临床意义对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:

骨髓瘤 巨球蛋白血症(Waldenstrom) 细菌和病毒感染 在这些情况下,必须要做其他辅助测试,比如说免疫固定,使用不同类型的抗血清对异常蛋白进行检测.(对于后期治疗有很重要的指导意义)

临床意义对异常条带的筛查,有助于我们检测下列疾病:17电泳结果的临床应用及常见电泳结果分析电泳检测电泳结果的临床应用及常见电泳结果分析电泳检测18什么情况下必须进行电泳检测?A/G比例变化血液沉降速度发生异常变化出现恶性疾病征兆在免疫球蛋白定量检测中发现某一种免疫球蛋白出现大量异常增加什么情况下必须进行电泳检测?A/G比例变化19电泳区带分析电泳区带分析20

双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带可能是由以下原因造成:遗传性双白蛋暂时性的双白蛋白血症可能是由于药物刺激导致的急性胰腺炎导致的双白蛋白血症:大量的胰酶的出现可以导致白蛋白降解白蛋白区带双白蛋白,或者一条宽峰,或者在白蛋白条带出现附属条带可能是21双白蛋白血症

双白蛋白血症22双白蛋白血症双白蛋白血症23电泳技术的临床应用完整版课件24在下列情况下白蛋白会出现下降:

-

肾病综合症,蛋白流失,胃肠病:检查尿蛋白

-淋巴细胞增生综合征

-营养不良

-肝脏功能不全

-慢性炎症

-严重烧伤

-血液稀释在下列情况下白蛋白会出现下降:25在下列情况中白蛋白会出现增加: -脱水症状

-血液浓缩

-白蛋白注射在下列情况中白蛋白会出现增加:26Alpha1globulins(α1球蛋白区带)将会在下列情况下出现下降:

-蛋白流失

-肝功能不全

-先天性抗胰蛋白酶缺乏症出现两个条带:

-抗胰蛋白酶的不同基因型出现增加:

-炎症症状Alpha1globulins(α1球蛋白区带)将会在下27A1AT不同的基因型A1AT不同的基因型28A1AT等电聚焦电泳A1AT等电聚焦电泳29急性炎症电泳图谱急性炎症电泳图谱30Alpha2globulins(α2球蛋白区带)下列情况中出现下降:

-肝功能不全 -血管内溶血Alpha2globulins(α2球蛋白区带)31

出现两个条带: -溶血标本(结合珠蛋白-血红蛋白复合体)

-结合珠蛋白不同基因型 -出现单克隆免疫球蛋白(带有大量负电荷)

*Alpha2条带在电泳图谱中,是一个很特殊的条带.因为这一条带中含有五种蛋白:HDL,Haptoglobin,Alpha2Macroglobulin,CeruloplasminandGcglobulin.由于结合珠蛋白有不同的基因表现型,增加了这一条带的复杂程度.结合珠蛋白非常靠近Alpha1条带;出现溶血时结合珠蛋白的迁移率会发生改变.同时,由于HDL的含量或者是存放过久的标本,HDL的迁移速度可能会更快.出现两个条带:32溶血的标本溶血的标本33出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白出现在a2区域的单克隆免疫球蛋白34下列情况下Alpha2区域会出现增加现象:

-炎症症状 -肾病综合征 -出现游离轻链

下列情况下Alpha2区域会出现增加现象:35肾病综合征肾病综合征36电泳技术的临床应用完整版课件37电泳技术的临床应用完整版课件38Betaglobulins(β球蛋白区带)在下列情况下会出现下降:

-肝功能不全

-C3长期缺乏或者C3代谢过快

(alsoinagingsample,C3denaturation,splittedinupto 4fractions:1betweena2andb, 1onb1,

1

onb2 and1ong)

Betaglobulins(β球蛋白区带)39在下列情况下会出现两个条带:

-长期存放的标本或者是高胆固醇的标本,LDL有不同的迁移率;从而导致LDL电泳是偏移Beta位置

在下列情况下会出现两个条带:40

Beta球蛋白在下列情况下会出现增加现象:

-胆管阻塞

-肾病综合征

-肝硬化

-缺铁性贫血

-血球蛋白异常

-高脂蛋白血症

-大量溶血

Beta球蛋白在下列情况下会出现增加现象:41β

脂蛋白β脂蛋白42酒精性肝硬化中的β-γ

桥酒精性肝硬化中的β-γ桥43电泳技术的临床应用完整版课件44电泳技术的临床应用完整版课件45电泳技术的临床应用完整版课件46出现在b

区域的单克隆免疫球蛋白出现在b区域的单克隆免疫球蛋白47游离轻链病游离轻链病48Gammaglobulins(免疫球蛋白区带)在下列情况中会出现下降现象:

-部分的或全部的免疫缺陷

-免疫抑制治疗

-游离轻链病或非分泌型骨髓瘤Gammaglobulins(免疫球蛋白区带)49电泳技术的临床应用完整版课件50电泳技术的临床应用完整版课件51低免疫球蛋白血症低免疫球蛋白血症52多克隆免疫球蛋白的增加:

-炎症

-肝硬化

-亚急性和慢性感染检测到其他条带

-单克隆免疫球蛋白

-寡克隆免疫球蛋白

多克隆免疫球蛋白的增加: 53

高免疫球蛋白血症 高免疫球蛋白血症54血清蛋白021216－狼疮病血清蛋白030127－酒精肝B-r桥血清蛋白021216－狼疮病血清蛋白030127－酒精肝B-55

微量单克隆免疫球蛋白 微量单克隆免疫球蛋白56

大量单克隆免疫球蛋白 大量单克隆免疫球蛋白57

双克隆免疫球蛋白 双克隆免疫球蛋白58与下列各类疾病相关的寡克隆免疫球蛋白(多个条带):-自身免疫病-先天性免疫缺陷症-病毒感染

(CHepatitis,HIVdisease,CMV(巨细胞病毒),EBV,…)-免疫抑制治疗与下列各类疾病相关的寡克隆免疫球蛋白(多个条带):59Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)Oligoclonalpattern(寡克隆免疫球蛋白)60血清蛋白电泳是

M蛋白(MonoclonalProtein)多克隆(polyclonalProtein)

寡克隆(OligoclonalProtein)

的首选检测项目血清蛋白电泳是61什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapathies,MG)是由于单一克隆浆细胞无限增殖产生的均一单克隆蛋白(Monoclonal-proteins)所导致的一组疾病M蛋白疾病的“M”含义是Myeloma,Macroglobulinemia,Malignantlymphoma和MonoclonalGammapathies均以“M”开头.M蛋白在电泳上表现为高而狭窄的尖峰.什么是M蛋白M蛋白疾病(Monoclonalgammapa62电泳技术的临床应用完整版课件63表1646例M蛋白类型分类型别例数%IgG型骨髓瘤20531.73IgA型骨髓瘤9314.40IgM型骨髓瘤568.67IgD型骨髓瘤121.86重链病50.77轻链病21433.13半分子病10.157SIgM20.31BMG497.59双M蛋白病81.24表1646例M蛋白类型分类64多发性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是造血系统的恶性肿瘤,占整个恶性肿瘤的1%常见于中、老年人(50-70岁居多,40岁以下少见).以往对此病认识不足，漏诊、误诊可达到70%以上.随着寿命的延长对此病认识的提高病例数显著增加.多发性骨髓瘤(MultipleMyeloma,MM)MM是65MM临床表现特点骨痛,骨骼肿块与病理性骨折,骨质疏松和溶骨现象贫血免疫功能低下,反复感染肾脏损害高钙,高粘(血浆相对黏度6以上)高尿酸血症表现MM的临床表现多样化,常常因此就诊于骨科、肾脏内科等,延误诊治MM临床表现特点骨痛,骨骼肿块与病理性骨折,骨质疏松和溶骨现66多发性骨髓瘤的免疫学特征血中出现M蛋白,正常Ig水平明显减低尿中出现M蛋白和轻链蛋白(BJP)骨髓中浆细胞明显增加无免疫活性Ig导致免疫功能低下多发性骨髓瘤的免疫学特征血中出现M蛋白,正常Ig水平明显减低67多发性骨髓瘤病人溶骨报告(骨盆)多发性骨髓瘤病人溶骨报告(骨盆)68多发性骨髓瘤病人溶骨报告多发性骨髓瘤病人溶骨报告69多发性骨髓瘤病人溶骨报告(颅骨)多发性骨髓瘤病人溶骨报告(颅骨)70临床实例临床实例71电泳技术的临床应用完整版课件72电泳技术的临床应用完整版课件73电泳技术的临床应用完整版课件74意义未明的单克隆免疫球蛋白疾病:BenignMC在法国,在对献血者进行检测时,会检测到0,15%比例的单克隆免疫球蛋白携带者.

在老龄人群中检测到的携带者比例更高(80岁以上人群).在对60到99岁人群的检测显示,出现Ig的比例从2,6%上升至19,2%.(平均值=5%)MGUS意义未明的单克隆免疫球蛋白疾病:BenignMCMGUS75MGUS携带者特征:

-未出现临床和影像学特征 -未出现不良反应,未检测到血钙升高,也未出现肾功能衰竭

-未见骨髓瘤的临床特征 -单克隆免疫球蛋白<20g/l-其他免疫球蛋白都是正常的,同时在患者尿液中未检测到本周氏蛋白 -单克隆免疫球蛋白的浓度随着时间的推移未发生增加现象 -其他的免疫球蛋白的浓度也未随时间推移而出现下降

在20%的情况中,MGUS将会转化成恶性疾病(6-10years)MGUS携带者特征:在20%的情况中,MGUS76Kylereport显示,通过对1384名含有MGUS的患者的20–35(average:22years)年的跟踪监测发现,24%的患者最终演变成恶性的淋巴细胞增生症(multiplemyeloma,macroglobulinemia,amyloidosis,…).从检测到单克隆免疫球蛋白,直到作出多发性骨髓瘤的诊断报告,这段时间是不定的,从2-29年(平均是10年左右).Kylereport显示,通过对1384名含有MGUS的患77大量报告显示,在下列情况中,发展成为恶性淋巴细胞增生疾病的可能性很小: -单克隆免疫球蛋白: IgG<15g/L IgA<10g/L IgM<5g/L -尿蛋白中未出现本周氏蛋白

-其他类型的免疫球蛋白未出现下降电泳技术的临床应用完整版课件78寡克隆免疫球蛋白

由于药物原因导致的免疫缺陷: -在器官或者骨移植之后 -自身免疫病:

(类风湿关节炎,干燥综合征(66%),系统性红斑狼疮….)

由于细菌或病毒感染导致的免疫缺陷:

-病毒:HIV(63%),EBV,CMV,viralhepatitis,… -细菌,寄生虫感染:

(脑膜炎,脑炎,…)寡克隆免疫球蛋白79在一些肿瘤中:(慢性淋巴细胞性白血病CLL:29%)

在5%正常群体中(MGUS)

在多发性硬化患者中:(CSF90%)在一些肿瘤中:(慢性淋巴细胞性白血病CLL:29%)80检测结果阐述电泳的结果是以%的形式给出的,但是对于临床诊断,结果必须要以浓度的形式给出g/L蛋白浓度出现异常时,必须要进行其它的补充检测检测结果阐述电泳的结果是以%的形式给出的,但是对于临床诊断81患者的随访

首次被发现的患者:

如果检测到的异常M蛋白峰值不多,同时其他免疫球蛋白的含量未发生变化,也没有临床症状,怀疑可能是MGUS,

第一年每4至6个月对患者经性随访,从第二年起,每年进行一次随访.患者的随访首次被发现的患者:82

已确诊的患者:

如果电泳结果和先前检测相同,利用异常峰值进行量化以便于检测异常M蛋白的浓度是否发生变化.

这种情况下的随访检测,一定要选择相同的技术方法.

如果随访结果显示出现异常区带,一定要进行免疫固定电泳确认这些异常蛋白的成分.已确诊的患者:83电泳技术的临床应用完整版课件84IgGl单克隆免疫球蛋白(近正极端)IgGl单克隆免疫球蛋白(近正极端)85IgG

k

单克隆免疫球蛋白,伴随有k

型游离轻链本周氏蛋白检测BENCEJONES蛋白检测结果IgGk单克隆免疫球蛋白,伴随有k型游离轻链本周氏86异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征血清蛋白质的图谱类型

总蛋白Albα1α2βγ1.低蛋白血症↓↓↓↓N↑N↓N↑2.肾病型↓↓↓↓↑↑↑不定3.肝硬化型↓N↑↓↓N↓N↓β-γ↑桥4.急性炎症或急性时相反应症N↓N↑↑N5.慢性炎症型

↓↑↑↑6.弥漫性肝损害型↓N↓↓↑↓↑7.弥漫宽γ球蛋白血症型↑↓N↑↑8.M蛋白血症型

在α-γ区带中出现M蛋白峰-M区带峰9.高α2（β）球蛋白血症↓↑↑↑10.妊娠型（高α型）↓N↓↑↑N11.蛋白质缺陷型个别区带出现特征性缺乏异常血清蛋白质电泳图谱的分型及其特征血清蛋白质的图谱类型总87免疫固定电泳

结果分析指南

免疫固定电泳

结果分析指南88在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条带的蛋白出现异常增加

电泳结果显示为低免疫球蛋白血症,或者免疫球蛋白定量结果显示可能是游离轻链病

尿蛋白检测结果异常(检测到单克隆游离轻链),查看患者是否做过血清蛋白电泳,如果有必要需要进行血清的免疫固定电泳

什么情况下必须要进行免疫固定电泳检测?在血清蛋白电泳时,检测到异常条带的出现,或者是某一个条带的89正常血清标本正常血清标本90电泳技术的临床应用完整版课件91电泳技术的临床应用完整版课件92IgGl单克隆免疫球蛋白(近负极端)IgGl单克隆免疫球蛋白(近负极端)93IgGl单克隆免疫球蛋白(近正极端)IgGl单克隆免疫球蛋白(近正极端)94IgG

k

单克隆免疫球蛋白,伴随有k

型游离轻链本周氏蛋白检测BENCEJONES蛋白检测结果IgGk单克隆免疫球蛋白,伴随有k型游离轻链本周氏95出现在a2区域的IgAl

出现在a2区域的IgAl96出现两个异常蛋白带:利用Beta巯基乙醇处理后,结果为IgA

l单克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment出现两个异常蛋白带:BME/Fluidil97BME/Fluidiltreatment检测结果显示为3个IgAl:利用Beta巯基乙醇处理后,结果为IgAl单克隆免疫球蛋白BME/Fluidil检测结果显示为3个IgAl:98IgA

k单克隆免疫球蛋白伴随有k

型游离轻链characterizedonHYDRAGELBENCEJONESBJassayIgAk单克隆免疫球蛋白伴随有k型游离轻链chara99IgM

k单克隆免疫球蛋白IgMk单克隆免疫球蛋白100在每一个电泳条带上都能见到加样点痕迹:使用BME处理在BME处理过以后,结果显示为IgM

k单克隆免疫球蛋白BME/Fluidiltreatment在每一个电泳条带上都能见到加样点痕迹:在BME处理过以后,101寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)寡克隆免疫球蛋白IgG(k+l)102双克隆免疫球蛋白IgG

k和

IgA

k双克隆免疫球蛋白IgGk和IgAk103免疫固定结果显示为单独的

l

成分:需要使用抗

l游离轻链和/或抗IgD和IgE的抗血清确认

该结果为

l型游离轻链BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定结果显示为单独的l成分:该结果为l型游离轻链B104免疫固定结果显示为2个独立的

l

成分:需要使用抗

l游离轻链和/或抗IgD和IgE的抗血清确认该结果为单克隆IgDl,并伴随有

l游离轻链BJassaycharacterizedonHYDRAGELBENCEJONES免疫固定结果显示为2个独立的l成分:该结果为单克隆Ig105免疫固定结果确认:IgEl单克隆免疫球蛋白免疫固定结果显示为单独的

l成分:需要使用抗

l游离轻链和/或抗IgD和IgE的抗血清确认免疫固定结果确认:IgEl单克隆免疫球蛋白免疫固定106特殊病例特殊病例107在免疫球蛋白区域检测到异常条带,但是免疫固定检测结果却为阴性在使用抗-纤维蛋白原的抗血清结果显示为阳性在免疫球蛋白区域检测到异常条带,但是免疫固定检测结果却为阴108电泳技术的临床应用完整版课件109尿蛋白的电泳研究尿蛋白的电泳研究110肾单位的生理结构和各类生理蛋白1百万个肾单位每天过滤180升的血浆，同时产生大约1.5升的尿液。肾小管的废弃物排放最后形成的尿液含有1/3的白蛋白和2/3球蛋白肾小管重新吸收白蛋白转铁蛋白免疫球蛋白小分子蛋白肾小球过滤白蛋白转铁蛋白免疫球蛋白小分子蛋白小分子蛋白肾单位的生理结构和各类生理蛋白1百万个肾单位每天过滤180升111尿蛋白:定义在生理学角度讲，正常的人的尿蛋白量在50至120mg/24

h(大约在100mg/L)

主要的蛋白是白蛋白(少于30mg/L)病理上的肾功能疾病：当尿蛋白量大于150mg/24

h

而此时，尿蛋白的成分也是不定的。尿蛋白:定义在生理学角度讲，正常的人的尿蛋白量在50112导致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:间歇性的(站立过久,正餐以后,运动过后,压力之下)肾前性:高血压,发烧,心脏或肝脏功能衰退,…

蛋白浓度升高(尿蛋白含量过高)肾性:肾小球或肾小管受到损伤(或者两个同时受到损伤)肾后性:泌尿系统出现损伤导致尿蛋白含量增加的原因生理上的因素:间歇性的(站立过113电泳技术的临床应用完整版课件114肾前性的尿蛋白肾前性的尿蛋白115尿蛋白含量增加某一种蛋白含量出现异常升高，超出了肾小管对于这一蛋白的再吸收能力。原因自由轻链,主要是在单克隆免疫球蛋白疾病中beta2微球蛋白,淋巴组织增生综合征溶菌酶,在一些急性髓细胞白血病血红蛋白,在结合珠蛋白饱和后出现的溶血现象中血清粘蛋白,又称为Alpha酸性糖蛋白，在支气管癌患者中肌红蛋白,在横纹肌出现溶解患者中上述各类情况均可导致出现肾病

(尤其是含有自由轻链的本周氏尿蛋白)尿蛋白含量增加某一种蛋白含量出现异常升高，超出了肾小管对于116>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加>67kDa<67kDa尿蛋白含量增加117肾性尿蛋白分析肾性尿蛋白分析118在HYDRAGEL5PROTEINURIE

凝胶上主要的尿蛋白的电泳条带区域分析起源于肾小管的各类蛋白(分子量<67kDa)起源于肾小球的各类蛋白(分子量>67kDa)白蛋白(分子量:67kDa)a1-微球蛋白

(MW:33kDa)游离轻链

(MW

25kDa)转铁蛋白

(MW:80kDa)Cystatin(MW:11kDda)b2-微球蛋白

(MW:12kDa)溶菌酶

(MW:15kDa)视黄醇结合蛋白(MW:21kDa)游离轻链的二聚体(MW

50kDa)IgG(MW:160kDa)IgA(MW:165kDa)结合珠蛋白加样位置a2-巨球蛋白

(MW:900kDa)注:(CystatinC),血清半胱氨酸蛋白酶抑制剂C在HYDRAGEL5PROTEINURIE凝胶上起源119肾小球过滤小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被过滤到尿液中.其他决定各种蛋白被过滤的因素:分析形状,带电量,血浆浓度.还有一些血液动力学因素可影响蛋白的过滤.肾小球过滤小分子蛋白,分子量小于67

kDa,被过滤到120肾小球损伤经常出现于成人及儿童患者中,表现为尿蛋白含量出现增加现象

(大于1

g/24-h)原因糖尿病感染性损伤(细菌感染,乙肝患者,水痘,梅毒,单核白血球增多症

,…)其他系统性疾病(自动免疫系统,癌症,…)中毒现象(重金属,药物中毒,…)此时,我们可以在尿蛋白中发现白蛋白和其他大分子量蛋白(大于67

kDa)。肾小球损伤经常出现于成人及儿童患者中,表现为尿蛋白含量出现121电泳技术的临床应用完整版课件122临床示例临床示例123肾小管的再次吸收功能在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白，分子量小于67

kDa,将会在肾小管内被重新吸收(内吞作用).

99%的在肾小球内被过滤的蛋白,都将会被重新吸收利用.

例如,

18

g/24-h白蛋白将会被过滤掉;

30

mg/L

白蛋白在人的尿液中被发现.

肾小管的再次吸收功能在肾小球中被过滤掉的小分子蛋白，分子量124肾小管损伤肾小管损伤将会改变其对小蛋白分子的重新吸收能力

(小于67

kDa的蛋白)通常是暂时性的,并且少于0.5

g/24-hours原因遗传原因(Fanconi’ssyndrome)免疫球蛋白单克隆扩增(骨髓瘤)药物作用(抗癌药物)中毒现象(重金属)白蛋白(<30%)及其它小分子蛋白(小于67

kDa)都将会在尿液中被找到.肾小管损伤肾小管损伤将会改变其对小蛋白分子的重新吸收能力(125电泳技术的临床应用完整版课件126>67kDa<67kDa肾小管损伤<67kDa>67kDa>67kDa<67kDa肾小管损伤<67kDa>127>67kDa<67kDa混合性损伤>67kDa<67kDa混合性损伤128电泳技术的临床应用完整版课件129临床示例临床示例130肾小球、肾小管均受损伤。临床示例肾小球、肾小管均受损伤。临床示例1315PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa150KDa66KDa5PROTEINURIE14.3KDa26.6KDa1132电泳技术的临床应用完整版课件133轻链病多表现为肾脏损害，极易误诊为慢性肾炎。我们认为轻链有3种形式出现在血清或尿中；一是正常的轻链过剩（Kappa和Lambda同时出现），多出现于慢性肝病，红斑狼疮等多克隆增殖中。二是伴随轻链。三是单一轻链，血和尿中只出现单一增殖的大量轻链。轻链病多表现为肾脏损害，极易误诊为慢性肾炎。我们认为轻链有134电泳技术的临床应用完整版课件135电泳技术的临床应用完整版课件136关于本周氏蛋白的检测进行血清蛋白电泳时,已经了解患者的血清蛋白电泳信息(血液中检测到单克隆免疫球蛋白),

不建议进行尿蛋白浓缩.当怀疑患者出现淀粉样病变或者轻链沉淀病时(血清中未检测到单克隆免疫球蛋白),这种情况下，需要浓缩尿蛋白确认是否出现了本周氏蛋白.浓缩还是不浓缩

?关于本周氏蛋白的检测进行血清蛋白电泳时,已经了解患者的血清137BenceJonesprotein浆细胞增生症影响血液中出现游离轻链尿液中出现起因结果肾小管损伤淀粉样病变轻链沉淀病骨髓瘤巨球蛋白血症CLL慢性白血病MGUS.....BenceJonesprotein浆细胞增生症影响血液中138下列参数会影响本周氏蛋白的毒性:等电点(pI):

-WhenthepIis>6,theBenceJoneswillinteractstronglywiththeTamm-Horsfallprotein.

-IfthepIislow,therewillbelittleinteractionwithTHP.轻链形成的聚合体:-(polymerscanreachaMWof900kD).

轻链的初级结构:

-Theprimarystructureofthefreelightchainsisalsoinvolvedinthetoxicity.Thisisduetothevariableregionofthelightchain.下列参数会影响本周氏蛋白的毒性:等电点(pI):139尿液的检测原则当血液中检测到M蛋白时: -进行24H尿蛋白检测 -电泳+IF/BJ -对异常峰进行鉴定 -对患者进行随访,目的是确认药后疗效和肾脏损伤程度尿液的检测原则当血液中检测到M蛋白时:140原尿检测

(HR3Program)Hydragel15HR(高分辨试剂检测)原尿检测(HR3Program)Hydragel15141浓缩尿液检测(HR2Program)Hydragel15HR(高分辨试剂检测)浓缩尿液检测(HR2Program)Hydragel1142HydragelBenceJones(本周氏蛋白检测)HydragelBenceJones(本周氏蛋白检测)143总的尿蛋白:0,3g/L肾小管型损伤检测到:-微量白蛋白,-3个肾小管型小分子蛋白-多克隆的kandl

型轻链,没有重链与之对应本周氏蛋白检测阴性总的尿蛋白:0,3g/L肾小管型损伤检测到:本周氏蛋白检144重点:对患者定期随访检测,便于及时掌握患者肾脏损伤程度

总结重点:对患者定期随访检测,便于及时掌握患者肾脏损伤程度145电泳技术在同工酶分析方面的应用TheAssayandtheClinicalApplicationofIsoenzymes电泳技术在同工酶分析方面的应用TheAssayandt146同工酶的定义同工酶是以多种分子形式存在于机体的催化功能相同分子结构不同同工酶的定义同工酶是以多种分子形式存在于机体的147检测同工酶的目的检测同工酶活力比单测定酶的总活力更具有脏器特异性和高灵敏性等优点,因而提高了临床诊断价值早期诊断某些疾病,阳性率高,特异性强可以估计病情严重性和判断预后检测同工酶的目的检测同工酶活力比单测定酶的总活力更具有脏器特148同工酶的命名国际化学联合会(InternationalUnionofpureandAppliedChemistryIUPAC)建议:1、在命名同工酶时应采用规定的酶的名称2、如同工酶电泳图上各主要区带旁还分出若干亚区带时,可以用a,b,c,d注于主要区带的右下方.3、经明确鉴定过的特异同工酶,可以附加诸如分子量,稳定性,亚单位等参数.4、同工酶不应该用组织的分布来加以注解(如脑型，心肌型等)因为这类同工酶在别的生物机体中不一定存在于同一组织中。同工酶的命名国际化学联合会(InternationalUn149目前广泛应用于临床检测中的同工酶乳酸脱氢酶同工酶(Lactatedehydrogenase,LDH)肌酸激酶同工酶(Creatinekinase,CK)碱性磷酸酶同工酶(Alkalinephosphatase,ALP)天冬氨酸氨基转移酶(Aspartatetransaminase,AST)γ-谷氨酰转移酶(γ-glutamyltransferase,GGT)

-淀粉酶同工酶(

-Amylase,AMY)目前广泛应用于临床检测中的同工酶乳酸脱氢酶同工酶(Lacta150同工酶的分析方法由于同工酶的一级结构(氨基酸序列)及高级结构(构象)的不同,因此,一种酶的各个同工酶在化学,物理化学,生物化学等方面的性质也就有所差异,这些差异就提供了分析和鉴定同工酶的理论基础在研究同工酶的所有方法中，电泳法的使用最为广泛。因为此法简便、快速、分离效果良好，并且一般不会破坏酶的天然状态同工酶的分析方法由于同工酶的一级结构(氨基酸序列)及高级结151乳酸脱氢酶同工酶(LDH)乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮酸的酶每种LD同功酶都是由4个亚单位(肽链)组成的四聚物.这些亚单位中,有两类分别专属M(肌肉)和H(心脏). H4=LD1 H3M=LD2 H2M2=LD3 HM3=LD4 M4=LD5乳酸脱氢酶同工酶(LDH)乳酸脱氢酶是能催化乳酸脱氢生成丙酮152乳酸脱氢酶同工酶(LDH)组成与分布

LDH1～5H,M,MW140,000.

LDH1,2:心肌,肾,红细胞

LDH3:肺,脾,胰,甲状腺,肾上腺,淋巴结

LDH4,5:骨骼肌,肝

LDHx:睾丸,精子检测方法--------琼脂糖电泳法

原理:以琼脂糖胶作为介质,LDH可分离出五种同工酶区带,根据其电泳迁移率的快慢,将迁移最快的命名为LDH1,依次为LDH2,LDH3,LDH4和LDH5,最后显色,扫描确定其百分率.参考值LDH128.4±5.3%LDH241.0±5.0%LDH319.0±4.0%LDH46.6±3.5%LDH54.6±3.0%乳酸脱氢酶同工酶(LDH)组成与分布

153电泳技术的临床应用完整版课件154临床意义LDH1和LDH2升高：见于急性心肌梗塞(LDH1／LDH2>1)、病毒性心肌炎、风湿性心肌炎和克山病LDH5和LDH4升高：

(1)急性肝炎：LDH5明显升高，LDH4轻度增高；

(2)急性肝萎缩：LDH5和LDH4都明显升高；

(3)慢性肝炎，肝硬化：LDH5轻度升高；

(4)骨骼肌急性损伤、皮肌炎：LDH5和LDH4都升高；

(5)前列腺癌：LDH5升高，LDH5／LDH1>1LDH的五种同工酶都升高：见于胃癌、结肠癌和胰腺癌.临床意义LDH1和LDH2升高：155肌酸激酶同工酶（ISO-CK）

肌酸激酶(CK)同工酶的组成

CK是由M和B两种亚单位组成的二聚体,在细胞质内质内共有三种同工酶：CK-MM,CK-MB和CK-BB。在细胞线粒体内还有另一种同工酶，称为CK-Mt。这几种同工酶的分子量虽然相同，但免疫特性不同，电泳迁移率也不同。肌酸激酶同工酶（ISO-CK）肌酸激酶(CK)156

肌酸激酶(CK)同工酶的组成

(广泛存在于各类组织中,与ATP形成有关)

骨骼肌:主要为CK-MM,不含CK-BB,仅有少量CK-MB（＜3％）

心肌:主要为CK-MM,CK-MB占CK总量的14％-42％

脑组织以及其中含平滑肌器官:几乎全部是CK-BB，它同时也是人胚胎中CK的主要存在形式。

MacroCKTypeICKBBApplicationpointCKMBCKMMMacroCKTypeII脑组织及其它平滑肌:CK-BB0%心肌细胞:CK-MB0~3%骨骼肌细胞:CK-MM97~100%CK-MB的阳性决定水平为5%

肌酸激酶(CK)同工酶的组成

(广泛存在于各类组织中,与A157

免疫抑制法测定

原理：用羊抗CK-M抗体与病人血清共同温育，血清中的CK-M亚单位全部被抑制，测定剩余的非M-CK活性，即代表CK-BB和CK-MB中的B亚基，也包括CK-Mt

活性，由于正常人和心脏，肌肉疾患病人血清中CK-BB和CK-Mt的含量极低，故一般忽略不计，此时测得的非M-CK活性实际上代表CK-MB中的B亚基活性，乘以2即为CK-MB活性。

免疫抑制法测定

原理：用羊抗CK-M抗体与158电泳技术的临床应用完整版课件159CK同工酶的临床意义

1．急性心肌梗塞

（1）CK总活性在急性心肌梗塞后的4小时便开始升高，至20-30小时达高峰，3-5天后下降至基础水平。此酶为诊断心肌梗塞的一个极灵敏指标。

4小时20-30小时3-5天CK同工酶的临床意义

1．急性心肌梗塞

（1）160（2）CK-MB主要存在于心肌细胞内，急性心肌梗塞后先于CK总活力1-2小时升高，12-20小时达峰值，如无并发症3天后回复至正常水平，如果胸痛病人患者在48小时内CK-MB尚在正常水平活力不足总CK的2%，即可排除急性心肌梗塞的诊断

若已下降的CK-MB再度上升，提示可能有新

的心肌梗塞发生。

1-2小时12-20小时3天后（2）CK-MB主要存在于心肌细胞内，急性心肌梗塞后先于CK161（1）肌营养不良

骨骼肌中富含CK，以CK-MM为主，故各型肌营养不良均可引起CK活力升高，发病年龄越早，予后也越差。其中半数以上可检出CK-MB，（CK-MB/CK＜5%)而心电图都无阳性发现，说明并非心肌受累。

（2）肌肉创伤及肌肉注射

肌肉创伤可使CK活力升高，无CK-MB出现，CK-MM是骨骼肌损伤的特异指标。肌肉注射青霉素，利血平，肾上腺素等药物期间，约有1/3的病人在12-48小时内总CK活力升高，一般可持续3-6天，检测CK同工酶，可见主要是CK-MM占优势，提示这是肌肉创伤所至。

2．神经肌肉系统疾病（1）肌营养不良

骨骼肌中富含CK，以CK-MM为1623.巨CK的临床评价-巨CK1巨CK1

是一种同工酶(抗体)与自身抗体的复合物最多的是CK-BB与IgG或IgA的复合物.也有少数为CK-MM与IgG的复合物。CK-BB-IgG或IgA。老年人、风湿和心脏病、肌炎患者。在做冠脉造影的患者中巨CK1的发生率13.8％，认为至少部分起源于血管壁。3例低血钾性肌病妇女。1例急性横纹肌溶解，肌肉内肉碱棕榈酰转移酶缺乏。认为巨CK1与自身免疫性疾病无明显联系。3.巨CK的临床评价-巨CK11633.巨CK的临床评价-巨CK2巨CK2是一种低聚的线粒体CK，又称CK-Mt，存在于细胞线粒体膜上，当线粒体崩解时，线粒体的小碎片进入血液，使CK-Mt成低聚状态。众多文献认为巨CK2不会在健康人血中出现，它与恶性肿瘤密切相关，可作为肿瘤的标志物。原发性肺癌巨CK2检出率为56.8%。肺癌组CEA(人癌胚抗原)测定的阳性率40.0%。手术切除后巨CK2转为阴性，提示将巨CK2和CEA联合检测，用于检出肺癌有无周围淋巴结转移具有价值。巨CK2亦可为胃肠道恶性肿瘤的标志物，13例结肠癌患者，手术前有9例血清出现巨CK2；21例结肠癌或胃癌转移的患者中16例检出巨CK2。3.巨CK的临床评价-巨CK2巨CK2是一种低聚的线粒体164MMMBBBMacroCK1MMMBBBMacroCK11654.CK-BB《急性颅脑损伤患者血清CK—BB监测的临床意义》华西医学－1997年12月2期何永生，叶长宁，四川省人民医院神经外科

目的；探讨急性颅脑损伤患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及动态变化的临床意义。方法：逐日监测５０例急性脑伤患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，与临床指标对比评价其临床价值，并分析其变化规律与治疗转归，预后的关系，结果：血清ＣＫ－ＢＢ在伤后早期升高，且与伤情成正比相关，ＣＫ－ＢＢ较快恢复正常是治疗有效、无并发症和预后良好的标志。4.CK-BB《急性颅脑损伤患者血清CK—BB监测的临床意166急性颅脑损伤患者血清CK—BB监测的临床意义华西医学－1997年12月2期何永生，叶长宁，四川省人民医院神经外科

目的：探讨急性颅脑损伤患者血清ＣＫ－ＢＢ活性及动态变化的临床意义。方法：逐日监测５０例急性脑伤患者血清ＣＫ－ＢＢ活性，与临床指标对比评价其临床价值，并分析其变化规律与治疗转归，预后的关系，结果：血清ＣＫ－ＢＢ在伤后早期升高，且与伤情成正比相关，ＣＫ－ＢＢ较快恢复正常是治疗有效、无并发症和预后良好的标志。急性颅脑损伤患者血清CK—BB监测的临床意义167动态监测缺氧缺血性脑病患儿血清CK-BB的临床意义中国误诊学杂志－2002年

第2卷第12期郑红英

目的：探讨缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿血清脑型肌酸激酶同工酶(CK-BB)和心型肌酸激酶同工酶(CK-MB)的活性变化,以了解CK-BB和CK-MB对HIE患儿的检测价值.方法：在出生后1～3d检测HIE患儿CK、CK-BB、CK-MB活性,与正常新生儿作对比,分析各项指标与病情、转归、预后的关系.结果：中度、重度HIE患儿血清CK-BB、CK与正常新生儿相比有显著性升高;重度组CK-MB比正常组显著升高.CK-BB活性迅速下降者,治疗有效,预后良好;CK-BB活力持续升高,患儿预后差,CK-MB升高患儿常伴有心肌功能损害.结论：血清CK-BB是诊断HIE的可靠、特异性指标,动态监测新生儿CK-BB、CK-MB活性对病情估计、判断疗效及预后评估有重要价值.动态监测缺氧缺血性脑病患儿血清CK-BB的临床意义168羊水Ⅲ°混浊新生儿肌酸磷酸激酶同功酶改变及临床意义

当代医学，2007年6月傅发展，浙江省蒲江县人民医院目的

探讨羊水Ⅲ°混浊新生儿肌酸磷酸激酶及其同功酶的改变及意义。方法

24例羊水Ⅲ°混浊新生儿暂无心脑肺等脏器并发症作为实验组，24例正常新生儿作为对照组，出生后48小时内测定CK、CK-MB、CK-BB。

结果

两组差异有显著性（P＜0.01）。结论

CK-BB主要存在于脑部神经细胞和星形胶质细胞的胞浆中，只有在神经元和胶质细胞受损时才释放到细胞外。由于宫内缺氧导致血脑屏障功能受损，因而大量CK-BB通过血脑屏障进入血液循环，使血清中水平升高。CK-BB在血中表达水平越高，持续时间越长，表明脑损害病情越重，因其有较高的特异性与灵敏性，在脑缺氧损害时，CK-BB可作为早期诊断、病情估计及判断预后的评价指标。

羊水Ⅲ°混浊新生儿肌酸磷酸激酶同功酶改变及临床意义当代医学169新生儿缺氧缺血性脑病血清CK-BB水平与脑实质CT值的相关性研究中国优生与遗传杂志，2006年第14卷05期张爱梅,刘长云,吕祖芳,段全纪目的：探讨新生儿血清肌酸激酶脑型同工酶(CK-BB)的水平与脑实质CT值对缺氧缺血性脑病(HIE)的诊断价值.方法：采用比色法对49例HIE患儿和32例对照组新生儿血清CK-BB水平进行动态测定.同时采用日本东芝Aqilion螺旋CT扫描机单纯头颅平扫,在CT诊断分度的同时测定脑实质CT值.结果：生后24小时内HIE组血清CK-BB水平与对照组相比明显增高(P均<0.01),且HIE各组之间差异有显著性意义(P均<0.01);生后48及72小时重度HIE组血清CK-BB水平仍高于对照组(P<0.01),与轻、中度HIE组与对照组相比差异有非常显著性意义(P<0.01).轻、中、重度HIE患儿脑实质CT值均明显低于对照组(均P<0.01),且HIE各组之间差异有显著性意义(P均<0.01).相关分析发现,HIE组生后24小时内患儿血清CK-BB水平与脑实质CT值呈显著负相关(r=-0.747,P<0.01).结论：血清CK-BB水平监测可作为HIE诊断及评价脑损伤程度的早期预测指标,与脑实质CT值结合可对窒息后缺氧缺血性脑病做出早期而正确的诊断,为早期治疗提供依据.新生儿缺氧缺血性脑病血清CK-BB水平与脑实质CT值的相关性170脑脊液蛋白研究脑脊液蛋白研究171中枢合成免疫球蛋白是中枢神经系统疾患的一个重要信号，主要用于对中枢神经系统疾患进行诊断和鉴别诊断如：多发性硬化症、痴呆、脊髓炎、副肿瘤性脑炎、神经性梅毒等现阶段临床上诊断中枢神经系统病变主要依靠影像学结合临床分析，但是，在病变早期影像学及常规检查常无法诊断然而中枢神经系统病变患者脑脊液中免疫球蛋白IgG增加却发生较早因此实验中对脑脊液中IgG进行蛋白电泳，形成的典型寡克隆区带对上述疾病的早期诊断而言，是重要的、必不可少的依据中枢合成免疫球蛋白是中枢神经系统疾患的一个重要信号，主要用于172琼脂糖凝胶电泳和免疫固定原理相结合利用高分辨技术在琼脂糖凝胶上对脑脊液蛋白进行电泳分离(血清中的免疫球蛋白的浓度应该被稀释到和脑脊液中Ig一样的浓度:5至10mg/L).利用与标