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文档简介

医学细胞生物学设计型实

验设计报告——细胞核

的分离与鉴定成员：彭英、向欢欢、令狐琪琦、杨秀麟、敬昱宸、李明先第一大组

细胞破碎的方法实验原理一、分离细胞质与细胞核细胞核的分离和鉴定

１.破碎细胞机械法

物理法化学法高速组织捣碎机玻璃匀浆器（匀浆）研钵超声匀浆器冻融法自溶法表面活性剂处理法酶处理细胞核的分离和鉴定

在低温下，将组织块放入匀浆器，加入等渗浆介质进行研磨，破碎细胞，使之成为各种细胞器及其包含物的匀浆液。匀浆：

２.离心技术细胞核的分离和鉴定

细胞内各种结构的比重和大小等都不相同，在同一离心场内的沉降速度也不相同，根据这一原理，常用不同介质和不同转速的离心，将细胞各种组分分级分离出来(cellfractionation)。组织细胞匀浆分级分离分析

细胞核的分离和鉴定

离心方法差速沉降离心法

速率区带离心法等密度区带离心法密度梯度区带离心法

差速离心differentialcentrifugation细胞核的分离和鉴定

加速低速高速差速沉降离心法一般用于分离沉降速度相差较大（一般为10倍）的颗粒。

细胞核的分离和鉴定

实验步骤：1、颈椎脱臼法处死小白鼠。迅速开腹取肝，在盛有生理盐水的小烧杯中反复洗涤。2、称取湿重约1g的肝组织，量取8ml预冷的匀浆缓冲液（0.25mol/L蔗糖-0.003mol/L氯化钙溶液）并加入烧杯中，尽量剪碎肝组织。3、将剪碎的肝组织倒入匀浆器匀浆（匀浆器下段浸入盛有冰块的小烧杯中保持低温），捣毁组织，直至看不到明显的组织块。

细胞核的分离和鉴定

4、匀浆彻底后，8层纱布过滤（先用少量匀浆缓冲液润湿纱布），滤液转移至玻璃离心管中。5、平衡离心管，离心15min(2500r/min),将上清移入另一玻璃离心管中。取上清液制一张涂片①,残余约1ml液体将沉淀吹打均匀制成悬浊液，制另一张涂片②，自

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