DB42T2106-2023芋疫病抗性室内离体接种鉴定技术规程

ICS65.020.20CCSICS65.020.20CCSB16湖 北 省 地 方 标 准DB42/T2106—2023芋疫病抗性室内离体接种鉴定技术规程Codeofpracticeforidentificationoftarotoleafblightinroom20232023092720231127湖北省市场监督管理局发布目 次前言 III112范引文件 13语定义 14作程 15原分与定 16种制备 27内体种定法 28性定价准 3附录A（料）芋病典病，原的态描和子定 4附录B（料）芋病抗离鉴记表 6参考献 7前 言本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。本文件起草单位：武汉市农业科学院、华中农业大学。本文件实施应用中的疑问，可咨询湖北省农业农村厅，联系电话bsnab@126.com；对本文件的有关修改意见建议请反馈至武汉市农业科学院蔬菜研究所，联系电话邮箱：watc1989@163.com。原物分原物分接种体繁殖调查与病情分级室内离体接种鉴定评价结果记载芋疫病抗性室内离体接种鉴定技术规程范围本文件适用于芋品种及种质资源对芋疫霉菌抗性的室内离体接种鉴定及评价。（NY/T2327 芋疫病taroleafblight由芋疫霉菌（PhytophthoracolocasiaeRacib.）侵染芋叶片、叶柄或球茎引起的病害。接种体inoculum芋疫病taroleafblight由芋疫霉菌（PhytophthoracolocasiaeRacib.）侵染芋叶片、叶柄或球茎引起的病害。接种体inoculum用于接种以引起病害的病原物或病原物的一部分。4操作流程5病原物分离与鉴定A.1）DNAA.2和A.3V8（90℃下暗培养7d（=5mm）V8（1mL、CaCO32g800mL15g，121℃20min。V84℃～8℃30d1鉴定材料准备NY/T232760d～120d2mm接种方法V87（=5V824水中含0.05282412h/12h。病情调查961mm调查每份鉴定材料接种病原物后的发病情况，依据表1病情级别划分标准，逐份调查和登记病情级别，计算出病情指数（DI）。病情指数按式（1）计算： 𝐷𝐼=∑(𝑠×𝑛)×100···································································(1)9×𝑁式中：DI—病情指数；s—n——表1病斑直径划分病情级别病情级别病斑直径（mm）0病斑直径≤515＜病斑直径≤10310＜病斑直径≤20520＜病斑直径≤30730＜病斑直径≤409病斑直径>40（DI2表2芋疫病抗性接种鉴定的评价标准病情指数（DI）抗性评价DI=0免疫（I）0＜DI≤20高抗（HR）20＜DI≤40抗病（R）40＜DI≤60中抗（MR）60＜DI≤80感病（S）DI>80高感（HS）附录A（资料性）芋疫病典型病症，病原菌的形态描述和分子鉴定3mm～5图A.1）（图A.2）。图A.1图A.2（Phytophthoracolocasiae×A1A2V6V828pH值为CTABDNA稀释至50ng/LDNintrnalyrnscriedpacr,TITS45’-TCCTCCGCTTATTAGTATGC-3’和ITS55’-GTGAATCATCGAATCTTTGAAC-3’ITS。用50μL：2μL模板DNA，10μL1μLDNAμL10mM的μL10μmol/LITS4ITS527μLPCR℃2变性1015℃1min，325μL的PCRPCR测序。测序结果去除两端质量差的碱基后与NCBI数据库进行BLAST（/Blast.cgi）比对。附录B（资料性）芋疫病抗性离体鉴定记载表表B.1给出了芋疫病抗性离体鉴定结果记载表格。表B.1芋疫病抗性离体鉴定结果记载表编号品种/种质名称病情级别相应的发病叶盘数病情指数抗性评价0级1级3级5级7级9级1.鉴定地点：2.定植日期：3.接种日期：4.接种病原菌分离物编号：5.调查日期：鉴定人：鉴定