松材线虫病菌对松材线虫种群增长的影响

松材线虫病菌对松材线虫种群增长的影响

在同一个环境中，由于快速繁殖，很容易个体之间的直接接触，并且在空间和物质上产生强烈的影响。微生物之间的关系可分为五种类型：中间，不相容，相互作用，至少没有明显的生态关系；共生，相互获取利益，即使一方单独不能生活。抵抗阻力，一方抑制另一方的生长，或杀死另一方。在竞争和相互竞争的环境中，双方都需要某些资源。捕获（包括寄生虫）以其他为资源，从另一方获取利益，并通过消除另一方并生存（梅汝红等人，1998）。在松草病毒木中，松草根和其他生物（如细菌、细菌等）同树，所以上述关系一定有。松草根长期存在腐败的树木中，因此，蘑菇和松草之间的关系对理解和使用真菌。在松草中发现的浮生昆虫是寄生虫蠕虫的后代，以及环己烯菌、金针菌、红景天菌、金针菌、三叶菌和松草绿直菌的可能性。为了了解从松动死木和松动死木中分离出的真菌与松动草之间的关系，我们研究了这些物质。将松材线虫接种于已在PDA平板上长出的上述真菌的菌落上,构成了一个松材线虫与真菌的微小生态系统,松材线虫必然与真菌发生上述生物间的种种作用,由于松材线虫不能在PDA平板上生长(Yeetal.,1993;曾永三,1996),只能以真菌为食料,而真菌又可能寄生或毒杀线虫,因此松材线虫与真菌的关系只能是共生、拮抗和捕食(寄生)三者之一,而一段时间后,松材线虫在真菌中的数量变化,将是这种关系的直接体现.1材料和方法1.1菌株和测试方法分别选择从松材线虫病病死木中分离的真菌.其中木霉有10-11、12-9、16-8、18-12、52-6、78-50、85-57、97-7-1、98-8、108-9、112-21计11个菌株,轮枝霉选取13-18、24-21、25-22、26-24、61-33、69-41、111-18、20-14、28-4、84-56计10个菌株,曲霉选取14-7、92-12-1、109-11-2、118-47计4个菌株,青霉选取29-1、72-44,2个菌株,镰孢霉选取90-9、92-12-2、103-9、113-N2、100-3,5个菌株,毛壳菌选取23-20、57-29、50-3,3个菌株,茎点菌选取82-54-1,1个菌株,短梗单胞霉选取22-16,1个菌株,头孢霉选取17-10,1个菌株,弯孢霉选取35-2、36-1,2个菌株,待鉴定无孢菌选取15-2、56-28、59-31、60-32、110-13,5个菌株,待鉴定有孢菌选取27-25、64-36、93-13,3个菌株.另引入木材腐朽菌和食用菌(木腐菌)进行测试,腐朽菌:拟管革裥菌Lenzitestrabea,密粘褶菌Gloeophyllumtrabeum,洁丽香菇Lentinuslepideus杂色云芝Polyporusversicolor,食用菌:毛柄金钱菌Flammulinavelutipes,糙皮侧耳Pleurotusostreatus,黑木耳Auriculariaauricula,香菇Lentinusedodes.松材线虫:从南京中山植物园自然感病的15~20年生黑松枝干上取样,用贝曼漏斗法(方中达,1998)分离,然后接种在长满灰葡萄孢(Botrytiscinerea)的PDA平板上,25℃培养8d,放置于4℃冰箱中备用.1.2松材线虫分离将上述真菌分别接入PDA平板培养基上,25℃培养至菌落达4/5培养皿平板时,接入松材线虫,每皿接种1000条,每菌株3皿,置于温箱中,25℃培养8d,以贝曼漏斗法对线虫进行分离计数.2木腐菌中各真菌的线虫量将松材线虫接入不同真菌培养物后培养8d的线虫数量列入表1,根据表1的结果,松材在不同真菌上的数量大致可分为以下3种情况.松材线虫可在其上大量繁殖的真菌类群.待鉴定的无孢菌和待鉴定的有孢菌上,每一皿线虫均达数万头,其中15-2菌株,单皿线虫量达9万头,说明这类菌可以成为线虫的良好食料.每个培养皿的菌落上少于1000头松材线虫的真菌类群.包括曲霉、青霉、短梗单孢霉、头孢霉、弯孢霉、拟管革裥菌、粘褶菌、洁丽香菇、杂色云芝,糙皮侧耳、香菇、黑木耳.其中曲霉中的109-11-2菌株和粘褶菌、糙皮侧耳的菌落中完全没有线虫,多次测定结果一致.糙皮侧耳是专性产毒杀线真菌,在培养皿中,可见到将线虫接入菌落十多分钟,即有被击倒的个体.曲霉、青霉菌落上菌丝很少,线虫很难取食,而将线虫接入菌落后,线虫即表现行动的迟缓,因此,不能排除其分泌的代谢物对线虫的影响.试验选用的8种木腐菌中除毛柄金钱菌外,每个培养皿每种真菌上分离的线虫量不足100条(表2).它们均不利于线虫的发育和繁殖.短梗单孢霉、头孢霉、弯孢霉表现出与上述木腐菌相似的结果,但由于所选菌株数少,有待进一步试验筛选.在不同菌株的菌落上,线虫数量差异大的真菌类群是木霉、轮枝霉和镰孢霉.木霉菌上的线虫量普遍较低,在11个菌株中,有2个菌株每个皿(18-12、98-8)线虫量不足1000条,变化幅度为60~260,有8个菌株(12-9,16-8,52-6,78-50,85-57,97-7-1,108-9、112-21)线虫数量不超过万头,仅菌株10-11每皿线虫量达到9000~12760条.在所选取轮枝霉菌的10个菌株中,有4个菌株(13-18,26-24,61-33,111-18)线虫量不足1000条,变化幅度为0~733,有2个菌株(24-21,25-22),其上的线虫量不超过万头,有3个菌株(20-14,28-4,84-56),线虫在其菌落上可以大量繁殖,每个培养皿线虫量可以达到12197~46000条.在所选镰孢霉的5个菌株中,有3个菌株(90-9,103-9,113-N2)每个培养皿不足1000条,其中90-9,103-9菌株的菌落上线虫量不足100条,100-3菌株的菌落上线虫量近万头,而92-12-2菌株的菌落上线虫量高达每个培养皿15800~34200条,松材线虫在镰孢菌不同菌株的菌落上繁殖数量差异最大,显示出镰孢菌与松材线虫的关系较为复杂.3其他木腐担子菌对松材线虫的毒杀作用松材线虫可以以真菌为食料,因此早期在研究松材线虫致病机制中,较多地关注了松树体内的真菌作为松材线虫食料的适合性,显示了与前人相似的结果.无孢菌普遍可以作为松材线虫的食料菌,松材线虫可在这些菌的菌落上大量繁殖.但Kawazu等(1993)从一株无孢菌(D1084)中分离出2种环缩肽毒素,在浓度为0.00125%~0.0025%时,可以抑制松材线虫的生长.尽管在病木中没有分离到担子菌,但试验中选用的8种木腐担子菌,除毛柄金钱菌外,它们都抑制松材线虫的生长,其中,糙皮侧耳对许多其他线虫的毒杀作用已有报道,且试验证明了其对松材线虫的毒杀作用.可能其他木腐担子菌种类也会对松材线虫有抑杀作用.在以微生物活体进行的生物防治中,施用的微生物在使用环境中的定殖能力往往是至关重要的,因此测定木腐菌对松材线虫的作用更有价值.因为,木腐菌可以如食用菌栽培那样,在病木早期被伐倒后,其它腐生菌尚未大量在木材上定殖时,就人工接种使其定殖生长.这样就可以解决在原地消灭病死木上松材线虫的问题.目前松材线虫病的远距离扩散主要是通过病木或病材人为运输造成的,如果能解决病木在原地处理,将对松材线虫病的防治起很大作用.在实验室条件下,对线虫起强烈抑杀作用的真菌,常以24或48h的死亡率观察某种真菌对线虫的作用(李国红等,2001),但室内有效的真菌在田间实际应用时,往往效果甚微,其主要原因是这些真菌在环境中的定殖能力太差(张克勤等,200