安农大《基因工程原理》试卷

2003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷(A卷)一、填空题(20分)基因工程的四大要素是 、、和。可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和的活性。乙醇沉淀DNA的原理是 。受体细胞的感受态。在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。通常可在三种温度下保存DNA：4〜5°C、-20°C、-70°C，其中以最好。II类限制性内切核酸酶既具有 的专一性，又具有的专一性。切割后产生 末端的DNA片段和末端的DNA片段，作用时需要 作辅助因子。Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的，它具有和两种活性。二、单项选择题(20分)1953年Watson和Crick提出：( )多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋三个连续的核苷酸代表一个遗传密码遗传物质通常是DNA而非RNA分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变在原核生物DNA复制中，以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸()DNA聚合酶III (b)DNA聚合酶II(c)DNA聚合酶I (d)DNA连接酶关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当。由作用于同一DNA序列的两种酶构成这一系统中的核酸酶都是I类限制性内切核酸酶这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统I型限制性内切核酸酶()有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供有外切核酸酶和甲基化酶活性仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的中分离的，这种连接酶()催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接是一种单肽酶，分子量为74kDa既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接从中分离的连接酶：()需要ATP作辅助因子 (b)需要NAD作辅助因子(c)用于进行平末端的连接 (d)作用时不需要模板DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，()将双链DNA中的5，-P同3，-OH末端重新形成磷酸二脂键作用时不消耗能量需要Mn2+等二价辅助离子也可以连接RNA分子松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到((a)30-50 (b)100-200(c)300-400(d)500-7009.第一个作为重组DNA载体的质粒是((a)pBR322 (b)ColE1)(c)pSC101(d)EcoB10.关于碱解法分离质粒DNA，E哪一种说法不正确()溶液I的作用是悬浮菌体溶液II的作用是使DNA变性溶液III的作用是使DNA复性质粒DNA分子小，所以没有变性，染色体变性后不能复性印迹的DNA探针()杂交只与完全相同的片段可与任何含有相同序列的DNA片段可与任何含有互补序列的DNA片段可与用某些限制酶切成的DNA片段下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的()特定组织或细胞中提取DNA或RNA用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA用S1核酸酶去除双链的发夹结构黏性末端连接法，不仅操作方便，而且()(a)产生新切点(b)易于回收外源片段(d)影响外源基因的表达(c)载体不易环化14.关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确()(a)噬菌斑颜色的变化(b)cl基因失活造成的噬菌斑的变化(c)对IPTG的分解能力(d)对Xgal的分解与否15.下列哪一种酶作用时需要引物()(a)限制酶(b)碱性磷酸酶(c)反转录酶(d)DNA连接酶关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确()在不同的宿主中具有不同的复制机制在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度下面关于多克隆位点(MCS)的描述，不正确的一句是()仅位于质粒载体中具有多种酶的识别序列不同酶的识别序列可以有重叠一般是人工合成后添加到载体中文库包括该种生物的()某些蛋白质的结构基因 (b)所有蛋白质的结构基因(c)所有结构基因 (d)内含子和调控区19.同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是()SCDNA>LDNA>OCDNA (b)SCDNA>OCDNA>LDNA(c)OCDNA>SCDNA>LDNA (d)LDNA>SCDNA>OCDNA是用作基因工程载体的自然质粒，它不具有下列哪个性质()是松弛复制型 (b)具有四环素抗性（C）能被氯霉素扩增 （d）产生大肠杆菌素三、 判断题（15分）同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。迄今发现的质粒DNA都是环状的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子。通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。用免疫化学方法筛选的重组体不需要外源基因的表达。甘油会使许多限制性内切酶的特异性发生改变，是导致一些酶星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。聚合酶I有三种酶活性，其中3’一5’外切核酸酶的活性在较多的dNTP存在下，常被5’一3'合s成酶的活性所掩盖。基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。简并引物是根据已知DNA的序列设计的引物群。一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。四、 简答题（第1题3分，，2〜4题各4分）连接酶将Sau3AI（GATC）切割的DNA与经BamHI（GGATCC））切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大（百分比表示）下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列，为什么GAATTC，AAGCTT，GAATCG，ACGGCA，CTGCAG。你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请从所列出的的引物中选出合适的一对。5'-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3'3'-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5'引物1：(1)5’-GACCTGTGGAAGC(2)5’-CTGGACACCTTCG(3)5’-CGAAGGTGTCCAG(4)5’-GCTTCCACAGGTC引物2：(1)5’-CATACGGGATTG(2)5’-GTATGCCCTAAC(3)5’-GTTAGGGCATAC(4)5’-CAATCCCGTATG原核生物中有哪两种不同的转录终止机制五、问答题（30分）PCR扩增的基本原理是什么用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足处。在DNA分离过程中，为何常常酚：氯仿联用4.2003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷（B卷）一、填空题（20分）基因工程的四大要素是、、和。可用T4DNA聚合酶进行平末端的DNA标记，因为这种酶具有和的活性。乙醇沉淀DNA的原理是 。受体细胞的感受态。在DNA分离过程中造成DNA分子断裂的因素主要有、和。通常可在三种温度下保存DNA：4〜5°C、-20°C、-70°C，其中以最好。为了防止DNA的自身环化，可用脱去双链DNA。Klenow大片段是用切割DNA聚合酶I得到的，它具有和两种活性。放射免疫筛选的原理基于以下三点：、和。二、单项选择题(20分)1953年Watson和Crick提出：( )多核苷酸DNA链通过氢键连接成一个双螺旋三个连续的核苷酸代表一个遗传密码遗传物质通常是DNA而非RNA分离到回复突变体证明这一突变并非是一个缺失突变在原核生物DNA复制中，以下哪种酶除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸()DNA聚合酶III (b)DNA聚合酶II(c)DNA聚合酶I (d)DNA连接酶关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有()不太恰当。由作用于同一DNA序列的两种酶构成这一系统中的核酸酶都是I类限制性内切核酸酶这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统I型限制性内切核酸酶()有内切核酸酶和甲基化酶活性且经常识别回文序列仅有内切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供有外切核酸酶和甲基化酶活性仅有外切核酸酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供T4DNA连接酶是从T4噬菌体感染的中分离的，这种连接酶()催化连接反应时既能以ATP又能以NAD作为能量来源既能催化平末端连接又能催化黏性末端连接是一种单肽酶，分子量为74kDa既能催化单链DNA连接又能催化双链DNA连接从中分离的连接酶：()需要ATP作辅助因子 (b)需要NAD作辅助因子(c)用于进行平末端的连接 (d)作用时不需要模板DNA连接酶的主要作用是在DNA复制、修复中封闭缺口，( )将双链DNA中的5，-P同3，-OH末端重新形成磷酸二脂键作用时不消耗能量需要Mn2+等二价辅助离子也可以连接RNA分子松弛型质粒pUC载体系列不必进行氯霉素扩增，因为它们的拷贝数很高达到()(a)30-50 (b)100-200 (c)300-400 (d)500-700

第一个作为重组DNA载体的质粒是（）（a） pBR322（b）ColEl（c）pSC101（d）EcoB印迹的DNA探针（ ）杂交（a） 只与完全相同的片段（b） 可与任何含有相同序列的DNA片段（c） 可与任何含有互补序列的DNA片段（d） 可与用某些限制酶切成的DNA片段用碱法分离质粒DNA时，因为（）所以可以被除去（a） 染色体DNA断成了碎片（b） 染色体DNA分子量大，而不能释放（c） 染色体DNA变性后来不及复性（d） 染色体末同蛋白质分开而沉淀黏性末端连接法，不仅操作方便（a）产生新切点（c）载体不易环化关于cDNA的最正确的提法是：黏性末端连接法，不仅操作方便（a）产生新切点（c）载体不易环化关于cDNA的最正确的提法是：（（a）同mRNA互补的单链DN（c）以mRNA为模板合成的双链DNA而且((b)(d))）易于回收外源片段影响外源基因的表达关于噬菌斑筛选法的原理，下面哪一种说法不正确（（a）噬菌斑颜色的变化（c）对IPTG的分解能力下列哪一种酶作用时需要引物（a）限制酶（c）反转录酶(b)(d)(b)(d)（b）同mRNA互补的双链DNA（d）以上都正确）cI基因失活造成的噬菌斑的变化对Xgal的分解与否）碱性磷酸酶DNA连接酶在不同的宿主中具有不同的复制机制在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度关于穿梭质粒载体，下面哪一种说法最正确（）在不同的宿主中具有不同的复制机制在不同的宿主细胞中使用不同的复制起点在不同的宿主细胞中使用不同的复制酶在不同的宿主细胞中具有不同的复制速度（a）（b）（c）（d）下面关于多克隆位点（MCS）的描述，不正确的一句是（ ）（a） 仅位于质粒载体中（b） 具有多种酶的识别序列（c） 不同酶的识别序列可以有重叠（d） 一般是人工合成后添加到载体中文库包括该种生物的（ ）（a）某些蛋白质的结构基因 （b）所有蛋白质的结构基因（c）所有结构基因 （d）内含子和调控区19.同一种质粒DNA，电泳时，三种不同形式的迁移速度是（）（a）SCDNA>LDNA>OCDNA （b）SCDNA>OCDNA>LDNA（c）OCDNA>SCDNA>LDNA （d）LDNA>SCDNA>OCDNA是用作基因工程载体的自然质粒，它不具有下列哪个性质（）（a）是松弛复制型 （b）具有四环素抗性（c）能被氯霉素扩增 （d）产生大肠杆菌素三、判断题（15分）同一种限制性内切核酸酶切割靶DNA，得到的片段的两个末端都是相同的。迄今发现的质粒DNA都是环状的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。核酸杂交探针就是带有放射性标记的DNA分子。通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。用免疫化学方法筛选的重组体不需要外源基因的表达。甘油会使许多限制性内切酶的特异性发生改变，是导致一些酶星活性的主要原因之一，防止的办法是酶切反应体系中，将甘油的浓度控制在5%以下。不匹配的黏性末端可以通过部分填补后进行连接。聚合酶I有三种酶活性，其中3’一5’外切核酸酶的活性在较多的dNTPs存在下，常被5’一3'合成酶的活性所掩盖。基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。简并引物是根据已知DNA的序列设计的引物群。一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。四、简答题（第1题3分，，2〜4题各4分）连接酶将Sau3AI（GATC）切割的DNA与经BamHI（GGATCC）1切割的DNA连接起来后，能够被BamHI切割的机率有多大（百分比表示）下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列，为什么GAATTC，AAGCTT，GAATCG，ACGGCA，CTGCAG。你打算扩增下图所示的两段序列之间的DNA，请从所列出的的引物中选出合适的一对。5'-GACCTGTGGAAGC CATACGGGATTG-3'3'-CTGGACACCTTCG GTATGCCCTAAC-5'引物1：(1)5’-GACCTGTGGAAGC(2)5’-CTGGACACCTTCG(3)5’-CGAAGGTGTCCAG(4)5’-GCTTCCACAGGTC引物2：(1)5’-CATACGGGATTG(2)5’-GTATGCCCTAAC(3)5’-GTTAGGGCATAC(4)5’-CAATCCCGTATG某学生在用EcoRI切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因五、问答题（30分）PCR扩增的基本原理是什么用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息黏性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处。为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离应如何处置2003-2004学年第二学期01级生物技术《基因工程原理》试卷（A卷）

参考答案（A卷）一、填空题目的基因，工具酶，载体，受体细胞5’一3’的聚合酶，3’一5‘的外切核酸酶乙醇使DNA分子脱水接受外源DNA的生理状态核酸酶降解，化学降解，物理剪切-70°C识别位点，切割位点，平，黏性，Mg2+枯草杆菌蛋白酶，5’一3’的聚合酶，3’一5’的外切核酸酶二、单项选择题1.a2.9.cc3.b4.b5.b6.b7.a8.d三、判断题1.X 2.X3.X4.X5.V6.X7.X8.X9.V10.V11.V12.X13.X14.X15.X四、简答题25%GAATTC，AAGCTT，CTGCAG，因为它们是回文序列。引物1：（1）5’-GACCTGTGGAAGC引物2：（4）5’-CAATCCCGTATG一种只取决于DNA的碱基顺序，即终止子序列；而另一种还需要终止蛋白质（P因子）的参与。五、问答题PCR反应是在模板DNA、引物和dNTPs存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合成反应，它根据DNA半保留复制的原理，在体外模仿细胞内DNA复制的过程，首先使模板DNA变性，两条链解开，然后使引物与模板退火，二者碱基配对，DNA聚合酶随即以四种dNTP为底物，在引物的引导下合成与模板互补的DNA新链。进行PCR扩增，应对目的基因片段两侧的序列了解清楚，至少要预先知道足够合成一对引物的靶DNA序列。粘性末端连接的优点是实验操作简单，易于回收外源DNA片段。不足之处：（1）载体易自身环化；（2）用同一种限制酶产生的黏性末端连接不易定向克隆；（3）难插入特定的基因；（4）大片段DNA的重组率较低，即使用碱性磷酸酶处理了载体，载体也有成环的倾向；（5）用这种方法产生的重组体往往含有不止一个外源片段或不止一个载体连接起来的串联重组体，增加筛选工作的困难。酚与水有一定程度的互溶，单独用酚抽提DNA不能完全除去酚，而残留的酚抑制限制性内切酶和连接酶活性，甚至导致酶变性，而氯仿也是蛋白变性剂，它不与水互溶，而与苯酚互溶，故可带去残留酚。2004-2005学年第一学期

生物科学01级《基因工程原理》（A）一、填空题（25分）基因工程实施的四个必要条件是：①，②，③，④。部分酶切时通常可采取的措施有：①，②，③。DNA聚合酶I具有三种活性:①，②③。

pUC系列的载体是经人工改造的 型质粒载体，它们的拷贝数很高，不必进行 的扩增，拷贝数即可达到。碱法分离质粒DNA时，溶液I的作用是，溶液II和溶液III的作用分别是使DNA在DNA分离纯化过程中，造成DNA分子断裂的因素很多，主要有：①②，③。在原核生物mRNA的转录过程中，有三个序列是必不可少的，它们是 ①②，③。克隆一个编码某种蛋白质的基因必须考虑其表达的三个基本条件是：②，③。、选择题(15分)第一个用于构建重组体的限制性内切酶是( )EcoRI (b)EcoB (c)EcoC (d)EcoR下列限制性内切核酸酶中，选用( )时要考虑连接后外源DNA的插入方向。EcoRI (b)EcoRI (c)BamHI (d)PstI用免疫化学法筛选重组体的原理是( )。根据外源基因的表达 (b)根据载体基因的表达(c)根据mRNA同DNA的杂交(d)根据DNA同DNA的关于宿主控制的限制修饰现象的本质，下列描述中只有( )不太恰当。由作用于同一DNA序列的两种酶构成这一系统中的核酸酶都是I类限制性内切核酸酶这一系统中的修饰酶主要是通过甲基化作用对DNA进行修饰不同的宿主系统具有不同的限制-修饰系统在原核生物复制子中，除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸的是( )DNA聚合酶I (b)DNA聚合酶II (c)DNA聚合酶I(d)DNA连接酶主要原因是()(b)会改变pH值(d)主要原因是()(b)会改变pH值(d)在DNA分离后不易除去IPTG的作用是()。(b)诱导宿主的3肽的合成(d)作为显色反应的指示剂(b)使DNA进入水相(d)减少气泡，促进分相使DNA的磷酸二脂键断裂(c)同DNA形成复合物在利用lacZ失活的显色反应筛选中(a)诱导宿主的a肽的合成(c)作为酶的作用底物异戊醇的作用是()(a)使蛋白质脱水(c)帮助DNA进入水相下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的( )从特定组织或细胞中提取DNA或RNA用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA用S1核酸酶去除双链的发夹结构从中分离的连接酶：( )(a)需要ATP作辅助因子 (b)需要NAD作辅助因子(c)用于进行平末端的连接 (d)作用时不需要模板从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是( )（a）抑制核酸酶活性 （b）保护DNA，防止断裂（c）加速蛋白质变性 （d）有利于细胞破裂用碱法分离质粒DNA时，因为（ ）所以可以被除去（a） 染色体DNA断成了碎片（b） 染色体DNA分子量大，而不能释放（c） 染色体DNA变性后来不及复性（d） 染色体末同蛋白质分开而沉淀部分填补是DNA体外重组中常用的一种技巧，填补时应（ ）（a）控制DNA聚合酶的用量（b）控制酶反应的时间（c）限制dNTP的种类 （d）注意只能填补载体印迹的DNA探针（ ）杂交（a） 只与完全相同的片段（b） 可与任何含有相同序列的DNA片段（c） 可与任何含有互补序列的DNA片段（d） 可与用某些限制酶切成的DNA片段15.在基因工程中，可用碱性磷酸酶（ ）（a） 防止线性载体DNA的自身环化（b） 同多核苷酸激酶一起进行DNA的5,末端标记（c） 制备突出的3,末端（d） 上述说法都正确三、 判断题（15分）T4DNA连接酶和DNA连接酶都能催化平末端和粘性末端的连接。所谓穿梭质粒载体是指能够在两种以上的不同寄主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。外源基因（或DNA片段）插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。以噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。任何一种质粒都可以用氯霉素扩增的方法增加它的拷贝数。核酸杂交的原理是根据DNA分子间的互补。同聚物接尾法构建重组体，不仅连接效率高，而且也很容易回收插入的片段。限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰而实现的。取代型载体是指同一种限制性内切核酸酶在入DNA中具有两个切点。外源DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。所谓引物就是同DNA互补的一小段RNA分子。用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。一般情况下，质粒既可以整合到染色体上，也可以独立存在。四、 简答题（每题各4分）重组DNA的含义是什么哪些条件可促使DNA复性（退火）下面几种序列中你认为哪一个（哪些）最有可能是II类酶的识别序列：GAATCG，AAATTT，GATATC，ACGGCA。为什么基因工程中，为什么常用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）而不喜欢用大肠杆菌碱性磷酸酶（BAP）来脱去DNA的5’端的磷酸基团五、问答题(第1题8分，2、3、4题各7分)用PCR扩增某一基因，必须预先得到什么样信息引物设计的一般原则有哪些为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离应如何处置如何防止载体DNA分子的自身环化问题理想的质粒载体应具备哪几个条件2004-2005学年第一学期生物科学01级《基因工程原理》试卷(B)一、 填空题(25分)基因工程是在上世纪年代发展起来的遗传学的一个分支学科。Cohen等在 年构建了第一个有功能的重组DNA分子。部分酶切时通常可采取的措施有：①，②，③。DNA聚合酶［具有三种活性:①，②，③。ColE1是一种 型天然质粒载体，能产，但没有 基因，不能通过 筛选。碱法分离质粒DNA时，溶液I的作用是，溶液II和溶液III的作用分别是使DNA。在DNA分离纯化过程中，造成DNA分子断裂的因素很多，主要有：①，②，③。在原核生物mRNA的转录过程中，有三个序列是必不可少的，它们是 ①，②，③。克隆一个编码某种蛋白质的基因必须考虑其表达的三个基本条件是：，②，③。在DNA复制过程中，连续合成的子链称，另一条非连续合成的子链称为。二、 选择题(15分)第一个用于构建重组体的限制性内切酶是( )(a)EcoRI(b)EcoB (c)EcoC (d)EcoR下列限制性内切核酸酶中，选用()时要考虑连接后外源DNA的插入方向。(a)EcoRI(b)EcoRI (c)BamHI (d)PstI在下列表型中，( )是基因工程上理想的受体菌表型。(a)r+m+rec+ (b)r-m-rec- (c)r+m+rec- (d)r-m-rec+TOC\o"1-5"\h\z因研究重组DNA技术而获得诺贝尔奖的科学家是( )(a) (b) (c) (d)在原核生物复制子中，除去RNA引发体并加入脱氧核糖核苷酸的是( )(a)DNA聚合酶I (b)DNA聚合酶II (c)DNA聚合酶I(d)DNA连接酶变色氧化的酚不能用于DNA的分离，主要原因是()(a)使DNA的磷酸二脂键断裂 (b)会改变pH值(c)同DNA形成复合物 (d)在DNA分离后不易除去在利用lacZ失活的显色反应筛选中，IPTG的作用是( )。(a)诱导宿主的(a)诱导宿主的a肽的合成(c)作为酶的作用底物异戊醇的作用是()(a)使蛋白质脱水(c)帮助DNA进入水相诱导宿主的3肽的合成作为显色反应的指示剂使DNA进入水相减少气泡，促进分相下列关于建立cDNA文库的叙述中，哪一项是错误的()从特定组织或细胞中提取DNA或RNA用反转录酶合成mRNA的对应单链DNA以新合成的单链DNA为模板合成双链DNA用S1核酸酶去除双链的发夹结构从中分离的连接酶：()(b)需要NAD作辅助因子(a)(b)需要NAD作辅助因子用于进行平末端的连接 (d)作用时不需要模板从细胞或组织中分离DNA时，常用蔗糖溶液，目的是()(a)抑制核酸酶活性 (b)保护DNA，防止断裂加速蛋白质变性 (d)有利于细胞破裂用碱法分离质粒DNA时，因为( )所以可以被除去染色体DNA断成了碎片染色体DNA分子量大，而不能释放染色体DNA变性后来不及复性染色体末同蛋白质分开而沉淀部分填补是DNA体外重组中常用的一种技巧，填补时应( )(a)控制DNA聚合酶的用量 (b)控制酶反应的时间(c)限制dNTP的种类 (d)注意只能填补载体印迹的DNA探针( )杂交只与完全相同的片段可与任何含有相同序列的DNA片段可与任何含有互补序列的DNA片段可与用某些限制酶切成的DNA片段15.在基因工程中，可用碱性磷酸酶()防止线性载体DNA的自身环化同多核苷酸激酶一起进行DNA的5,末端标记制备突出的3,末端上述说法都正确三、判断题(15分)T4DNA连接酶和DNA连接酶都能催化平末端和粘性末端的连接。所谓穿梭质粒载体是指能够在两种以上的不同寄主细胞中复制的质粒，所用的复制起点不同。密码的偏爱性是指不同种属的生物对简并密码具有不同的使用频率。基因克隆中，低拷贝数的质粒载体是没有用的。外源基因(或DNA片段)插入到某一基因内的位点后，这个基因不再有任何功能。基因组DNA文库是含有某一生物中全部DNA序列随机克隆的克隆群，而cDNA文库是含有某一生物中所有表达基因随机克隆的克隆群。以噬菌体为载体的筛选方法比较简便，凡能形成噬菌斑的就一定是重组体。通过原位菌落杂交得到的阳性克隆即是重组体，但不能判断插入的外源基因是否进行了表达。核酸杂交的原理是根据DNA分子间的互补。用免疫化学方法筛选的重组体不需要外源基因的表达。限制与修饰现象是宿主的一种保护体系，它是通过对外源DNA的限制和对自身DNA的修饰而实现的。取代型载体是指同一种限制性内切核酸酶在入DNA中具有两个切点。外源DNA通过取代这两个切点间的片段被克隆。简并引物是根据已知蛋白质的氨基酸序列设计的引物群。用不同的产生粘性末端的限制性内切核酸酶分别切割载体和外源DNA片段，得到的粘性末端是不能通过末端互补而连接的。核酸酶是Ca2依赖性的，在反应混合物中加入EDTA便可抑制它的活性。四、 简答题（每题各4分）重组DNA的含义是什么哪些条件可促使DNA复性（退火）某学生在用EcoRI切割外源片段时，出现了星号活性，请分析可能的原因基因工程中，为什么常用小牛肠碱性磷酸酶（CIP）而不喜欢用大肠杆菌碱性磷酸酶（BAP）来脱去DNA的5’端的磷酸基团五、 问答题（第1题8分，2、3、4题各7分）用PCR扩增某