基因敲除三大技术对比

基因敲除大技术对比技术名称优势局限性可提供服务类型基于胚胎干细胞的同源重组技术成熟、可靠、精细是目前为止唯一一个可以满足所有要求的打靶技术1） 需要ES细胞，目刖只有小鼠有高效的ES细胞，其它模式动物的ESC还不能实现大规模应用。2） 周期长、工作量大、费用相对比较高1） 全基因敲除模式小鼠2） 条件性基因敲除模式小鼠3） 先全敲除再条件性敲除模式小鼠4） 基因敲入模式小鼠5） ROSA位点定点转基因TALEN技术基因敲除效率高，速度快，可实现多物种基因敲除基因敲入效率较低，多基因敲除困难，系统构建相对复杂，存在脱靶风险1） 全基因敲除大/小鼠2） 全基因敲除细胞系EGE系统基因敲除/敲入效率高，速度快，可实现多基因、多物种基因敲除/敲入，系统构建简单存在脱靶风险，但通过选择合适的sgRNA可以有效降低脱靶率，Invivo脱靶可通过传代去除1） 全基因/条件性基因敲除大/小鼠2） 全基因/条件性报告基因敲除/敲入大/小鼠3） CRISPR/Cas9粒构建4） 细胞系敲除/敲入免疫类B-NSG小鼠：Biocytogen-NOD-SCID-IL2rgB-NSG小鼠是NOD遗传背景，Prkdc和IL2rg双基因敲除的小鼠，是目前国际公认的免疫缺陷程度最高、最适合人源细胞或组织移植的工具小鼠。基本特征•NOD(non-obesediabetes)遗传背景：自发I型糖尿病；其巨噬细胞对人源细胞吞噬作用弱；先天免疫系统，如补体系统和树突状细胞功能降低。•Prkdcscid:Prkdc(proteinkinaseDNA-activatedcatalytic)基因突变，小鼠的功能性T和B细胞缺失，淋巴细胞减少，表现为细胞免疫和体液免疫的重度联合免疫缺陷(severecombinedimmunedeficiency,scid)。•Il2rgnull:Interleukin-2受体的gamma链(IL-2R丫^又称CD132)位于小鼠X染色体上，是具有重要免疫功能的细胞因子112、Il-4、Il-7、Il-9、Il-15和I-21的共同受体亚基，该基因敲除后的小鼠机体免疫功能严重降低，尤其是NK细胞的活性几乎丧失。B-NSG小鼠：综合了NOD-SCID-IL2rg背景特征，具有重度免疫缺陷表型，无成熟T细胞、B细胞和功能性NK细胞，细胞因子信号传递能力缺失等。非常适合人造血干细胞及外周血单核细胞的移植和生长。优点•迄今世界上免疫缺陷程度最高的工具小鼠；•与NOD-scid小鼠相比寿命更长，平均长达1.5年；•对人源细胞和组织几乎没有排斥反应；•少量细胞即可成瘤，依赖于细胞系或细胞类型；

•无B淋巴细胞泄漏。成功案例小鼠脾脏流式分析图Tcells«?DIICD4+)Tcells(CDJ+CM：-)Bcells

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(CD49b^-J■C57OM&■皿即匚Tcells«?DIICD4+)Tcells(CDJ+CM：-)Bcells

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(CD49b^-J■C57OM&■皿即匚<D3*CMiCD3+CD8^CD11+匚主要应用领域•人源细胞或组织移植•肿瘤和肿瘤干细胞研究•ES和iPS细胞研究•造血和免疫学研究•人类疾病感染模型研究IL17-EGFPknockinmiceCatalognumber：BCG-IM-0001Name:C57BL/6-Il17atm1Bcgen .'.'二 ；Mousestrain:IL17-EGFPknockinmiceGenecommonname:Interleukin17A,IL-17A,IL17AChromosome:Chromosome1AlleleType:Targeted(Knockin)StrainofOrigin:C57BL/6JESCellLineStrain:C57BL/6ExpressedGene:EGFP,EnhancedFluorescentProteinNote:DNAfragmentcontainingIRES-EGFP-SV40polyAsignalsequencewasinserteddownstreamofthestopcodonoftheinterleukin17A(IL17A)gene.IL17a《m”廿m”，中m““,n>20721k 20722k 20723k 20724kMGI^Representative^TranscriptsQTTMUSTO0WO8521Q,HGI：W7364^I117^0- —TH—>疾病模型类Tp53彳，， ， ・ .hmr">3_一一- Targetingexon2 、~~〜tGAGCATCGAGCTCCCTctgagtcaggagacattttcATGCTTATGGMACTGTGaSequenceRat#GenotypeSequenceT・#99T-W100.101T-#103T#04T-#1O5Wild-typewt..mosaicA1.inslT・#99T-W100.101T-#103T#04T-#1O5Wild-typewt..mosaicA1.inslwtA10△1.A1[GAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGGAGACATTTTCATGCTTATGGAAACTGTGatGAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGGAGA:ATTTTCATGCTTATGGAAACTGTGatGAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGGAG:CATTTTCATGCTTATGGAAACTGTGatGAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGAGAGACATTTTCATGCTTATGGAAACTGTGatGAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGGAGA：：：：：：：：：：CTTATGGAAACTGTGatGAGCATCGAGCTCCCTCTGAGTCAGGA:ACATTTTCATGCTTATGGAAACTGTCaTp53KnockoutRatStrain:Sprague-DawleyProduct#:BCG-KOR-003__-- Targetingexon3 〜~tTCTGGGATTACCTGCGctgggtgcagacgctttCTGACCAGGTCCAGGAaRat#A成9A-#73A-#76A-#80A-#32GenotypeSequenceWiW-typetTCTGGGATTACCTGCGCTGGGTGCAGACGCTTTCTGACCAGGTCCAGGAaA13.A13tTCTGGGATTACCTGCGCTTTCTGACCAGGTCCAGGAaW・t・,A13tTCTGGCATTACCTGCGCT：：：：：：：!：：：：TTTCTGACCAGGTCCAGGAaA61.A61 ：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：：:GCTTTCTGACCAGGTCCAGGAiiW.t.,A17tTCTGGGATTACCTGCGCTG:：;：：：;：：：：：：：:::ACCAGGTCCAGGAaW.t..insltTCTGG<5ATTACCTGCGCTGGGTGCAAGACGCTTTCTGACCAGGTCCAGGAiiApoEKnockoutRatStrain:Sprague-DawleyProduct#:BCG-KOR-002KnockoutRatRag2KnockoutRatStrain:Sprague-DawieyProduct#:BCG-KQR-001Rag2KnockoutRatStrain:Sprague-DawieyProduct#:BCG-KQR-001Rat#Genotype SequenceWild