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文档简介

1、生物制品的纯化分离法的普通程序?1)根据产品的分子构造和理化性质制订出可行的分离纯化办法,然后破碎生物材料的组织细胞,提取生化产品的混合物,运用盐析法,有机溶剂沉淀及其它沉淀剂等办法对应的生化产品进行粗提,2)再运用电泳技术,色谱技术和膜分离等技术对粗体产品进一步分离化,3)最后可对纯化产品进行鉴定并制成制剂,即完毕了对生化产品的制备2、免疫反映的基本过程?免疫反映从功效上能够分为3个互有关联的过程:1起始阶段,免疫活性细胞识别抗原或抗原多肽与MHC复合物2激活阶段:又称增殖分化阶段,淋巴细胞被激活,大量复制、分裂、增值,分泌多个细胞因子3反映阶段,激活后的免疫细胞与感染的细胞互相作用将它们从人体内去除3、肿瘤坏死因子的生物学特性?1)抗肿瘤活性2)免疫调节作用3)炎症活性4)促凝血活性5)抗病毒、抗细菌、抗真菌的作用6)热原质活性7)参加骨质的吸取4、普通生物制品的制备办法?1)原料的选择、预解决和保存2)提取目的产物3)分离纯化目的产物5、蛋白类制品分离纯化办法?根据蛋白质分子大小、形状和密度差别进行分离纯化:1)过滤盒超出滤技术2)离心和超离心技术3)凝胶过滤层析技术4)透析运用蛋白质的电性进行分离纯化1)等电点沉淀2)离子交换层析3)电泳和等电聚焦电泳运用蛋白质的亲水性和疏水性分离:1)盐析法2)乙醇和聚乙二醇沉淀法3)疏水层析法运用蛋白质的化学性质分离纯化:1)辛酸沉淀法2)利凡诺沉淀3)固相化染料柱层析4)螯合柱层析运用蛋白质的生物学活性分离纯化重要有亲和层析法运用蛋白质多个结合能力,用羟基磷灰石层析分离纯化6、工程菌的构成及保存办法?构成:目的基因、载体、受体细胞保存办法:普通采用将工程菌种冻干后封存于菌种管内再作低温保存的办法7、血清学实验的办法和原理?所谓血清学实验是指体外抗原抗体反映实验,抗原抗体反映含有高度的特异性,用已知的一方检测另一方,抗原抗体在体外结合时,可因抗原的物理性状不同或参加反映的成分不同出现多个类型的反映8简述生物反映器的基本类型和特点1搅拌式生物反映器合用于大多数的生物过程,即用于微生物的发酵,也广泛用于动植物细胞的大量培养2气升式生物反映器气体通过装在罐低的喷管进入生物反映器的导流管致使该部分液体的密度不大于导流管外部区域的液体密度,从而使液体循环流动3中空纤维式生物反映器既可适于贴壁细胞培养,也合用于悬浮细胞培养4透析袋或膜式生物反映器可将有害代谢产物透析或过滤掉,从而使细胞生长更高密度,同时可根据需要选用不同相对分子质量的膜,使产物保存在膜内或与细胞分开5固定床或流化床式生物反映器能够重复运用生物催化剂,便于讲生物催化剂与反映产物分开9疫苗的第二次革命重要是那些背面?1重组DNA技术2蛋白质化学3单克隆抗体技术10疫苗的基本成分有哪些?1抗原2佐剂3防腐剂4稳定剂5反活剂及其它有关成分11疫苗的基本性质1免疫原性2安全性3稳定性12疫苗的种类有哪些?1传统疫苗:a灭火疫苗b减毒c亚单位或成分2新型育苗a基因工程b遗传重组c合成肽d抗独特型抗体e微胶囊13联合疫苗中各抗原的互相作用重要指那些?1加强反映2克制反映3机体已有的免疫力对新抗原应答的干扰14常见免疫佐剂的类型1铝佐剂2矿物油乳剂3植物油佐剂4植物来源佐剂5细菌来源佐剂6人合成佐剂7细胞因子佐剂15免疫系统涉及那两个部分?涉及先天性的非特异免疫系统和后天性的特异性免疫系统。先天性免疫系统由一系列物理屏障、细胞、细胞因子和蛋白质构成。获得性免疫系统则重要由T淋巴细胞、B淋巴细胞和抗原提呈细胞,以及它们分泌的多个细胞因子所构成。16常见的免疫活性细胞及类型?1)淋巴细胞:B淋巴细胞、T淋巴细胞、自然杀伤细胞2)抗原提呈细胞:单核-巨噬细胞、树突状细胞、APC3)粒细胞:嗜中性粒细胞、嗜碱性粒细胞及肥大细胞、嗜酸性粒细胞17传统疫苗和新型疫苗有何不同?传统疫苗是采用病原微生物及其代谢产物经人工减毒,脱毒,灭活等办法制成的疫苗。新型疫苗则是通过基因工程技术和生物化学合成技术生产的疫苗。18基因工程亚单位疫苗的体现系统用于亚单位疫苗生产的体现系统重要有大肠杆菌,枯草杆菌,酵母,昆虫细胞,哺乳动物细胞,转基因植物,转基因动物等。体现系统的选择重要考虑其体现抗原的免疫原性,体现效率及产物纯化的难易程度。19构建核酸疫苗的基本操作流程核酸疫苗由编码目的抗原的的基因和质粒体现载体两部分构成,因此首先要明确目的基因几对目的基因的提取,然后就是DNA疫苗载体的选用。核酸疫苗的特点(1)诱导机体产生全方面的免疫应答,其保护免疫应答对不同亚型的病原体含有交叉抵抗作用(2)无病毒,灭活疫苗引发的致病作用,含有可靠的安全性(3)能体现经修饰的天然抗原(4)与亚单位疫苗同样含有高产性(5)可将编码不同抗原的基因构建在同一种质粒中(6)DNA含有防止作用,也有治疗作用(7)生产简便,成本低廉,稳定性好,储运方便(8)易于快速筛选含有免疫作用的基因(9)能定向诱导以Th1和为Th2主导的免疫应答20基因工程疫苗的发展重点(1)重要研究常规技术不能解决或很难解决的新疫苗(2)主动进行传统疫苗的改造(3)加强治疗性疫苗的研究(4)发展多价疫苗21细菌类疫苗的种类和制备办法种类:减毒疫苗,灭活疫苗,亚单位疫苗或成分疫苗制备办法:(1)用人工诱变的办法哺育出弱毒菌株或无毒菌株而制成的(2)将自然强毒株或原则菌株人工大量哺育后,经加热解决或福尔马林,戊二醛,B-丙内酯等化学解决制成(3)细菌培养液中提取、用化学办法、脱毒22细菌外毒素的基本特性和简朴生产流程特性:1毒性强2含有亲组织性3具抗原性4是一种双组分构造蛋白质生产流程:1产毒2脱毒3精制23病毒类疫苗的培养办法1细胞培养2鸡胚培养法3动物培养法24血浆的生物学功效1运输功效2维持内环境的稳态3参加凝血-纤溶等生理性止血功效和营养功效4参加体液调节和防卫功效25简述白细胞的种类和各自的作用1嗜中性粒细胞:炎症时进入组织,吞噬作用与巨噬细胞相似,无抗原提呈和免疫调节作用2嗜碱粒细胞及肥大细胞:含有组织胺,嗜碱性粒细胞表面体现IgE受体,可诱发I型细胞过敏反映3嗜酸性粒细胞:表面含有Ig受体,能吞噬与销毁组胺颗粒与抗原体复合物,引发Ig免疫应答反映,但不能吞噬病原异物26简述RH血型系统RH抗原只存在于红细胞膜上,不存在与其它组织细胞和体液中。RH血型系统是红细胞血型中最复杂的一种系统,现在已发现46个RH抗原,与临床关系亲密的是D、C、E、C、e五种抗原。其中,D抗原的抗原性最强。普通将红细胞上含有D抗原者称为RH阳性,缺少者称为RH阴性27细胞因子的种类及其作用1干扰素除含有抗病毒作用外,尚有抗肿瘤、免疫调节、控制细胞增殖、引发发热等2集落刺激因子有集落刺激活化,不同的CSF对不同发育阶段的造血干细胞和造血细胞起促增殖化分作用,是血细胞发生不可少的刺激因子3白细胞介素有重要的介导作用4肿瘤坏死因子除含有杀肿瘤外,TNF还可引发炎症反映5趋化因子调节淋巴细胞和巨噬细胞的趋化性,激活巨嗜/单核细胞,增进定向造血干细胞的增殖,增进内皮细胞的某些转化细胞的功效。在体炎症反映和抗感染及创伤愈合中起作用6生长因子对机体不同细胞有增进生长作用28简述细胞因子的特性1来源的多样性:一种因子源于多个细胞或同种刺激物可诱发同种细胞产生多个细胞因子2多效性:一种细胞因子能够有多个生物学活性3高效性:有微量,高效的特性4快速反映性5两面性:含有生理和病理性6理化性质:绝大多数的细胞因子为小分子的分泌性多肽或蛋白质,多数细胞因子为单链构造,部分为同源双体构造,不同的细胞因子的氨基酸序列有很大差别,某些细胞因子的基因是连锁的1、联合免疫:采用多个含有免疫原性的抗原联合制成多联或多价疫苗,注射这种疫苗克防止多个传染病或相似疾病的不同亚型,也可将多个疫苗同时进行免疫接种,已达成防止多个传染病的目的。2、免疫佐剂:凡非特异地通过物理或化学的方式与抗原结合而增强其特异免疫性的物质3、先天性免疫系统:是人体天生含有的免疫保护系统,涉及四道重要防线,即物理防线、生理防线、吞噬细胞防线和感染反映防线。4、基因工程亚单位疫苗:又称生物合成亚单位疫苗或重组亚单位疫苗,重要是指将病原微生物的抗原基因用分子生物学的办法分离,然后与载体DNA相连接,再经载体将抗原基因带进受体进行复制与体现,最后将基因工程体现的蛋白质抗原分离纯化后制成的疫苗。5、肿瘤坏死因子:是一类含有广泛生物学活性的细胞因子,能引发肿瘤出血性坏死。对多个正常细胞含有广泛的免疫生物学活性。6、单克隆抗体:是将抗体产生细胞与含有无限增值能力的骨髓瘤细胞相融合,通过有限稀释法及克隆花使杂交瘤细胞成为纯的单克隆细胞系而产生。7、抗原:指能够刺激机体产生免疫应答,并能与免疫应答产生抗体和致敏淋巴细胞在体内外结合,发生免疫效应的物质。8、转基因植物疫苗:通过介导特定的外源基因来获得转基因植物,以改良植物、研究植物功效,生产含有重要经济价值的蛋白质。9、细胞因子:是人类或动物的各类细胞分泌的含有多样性生物活性的因子,是一组可溶性的不均一的蛋白质分子,能够调节细胞的生长与分化10、类毒素:是一种主动免疫制剂,用于细菌毒素性疾病的防止,涉及白喉、破伤风等类毒素。11、灭火疫苗:是将自然强毒株或原则菌株人工大量培养后,经加热解决或福尔马林、戊二醛、B-丙内酯等化学解决制成的。灭火疫苗需加工佐剂以提高其免疫效果。12、集落刺激因子:是一类能参加造血调节过程的酸性糖蛋白分子,在体外培养中能刺激骨髓造血细胞分化增值为细胞集落,又称造血刺激因子或造血调节因子。13、疫苗:是一种特殊的药品,一类由免疫学的经验、理论和生物技术共同发展而产生的生物制品,它与普通药品含有明显的不同,重要用于健康人群,通过免疫机制防止疾病发生。14、离子交换层析:是以离子交换剂为固定相,根据流动相中的组分离子与交换剂上的平衡离子进行可逆交换时的结合力大小的差别而进行分离的一种层析办法。15、蛋白质等电点沉淀:当蛋白质溶液的PH=pI时,蛋白质的净电荷为0,因而失去了水化和分子间相斥的作用,疏水性氨基酸残基暴露,蛋白质分子互相靠拢、聚集,最后形成沉淀析出,即等电点沉淀。16、免疫原性:指疫苗接种进入机体产生免疫应答的强度和持续时间,影响因素涉及:1,抗原的强弱、大小和隐定性2,抗原的理化性质17、获得性免疫系统:是在抗原诱导下形成的,它涉及中枢免疫系统、外周免疫器官及多个组织中的免疫细胞、多个免疫活性介质等18、亚单位疫苗:是运用单一蛋白质抗原分子来诱导免疫反映的填空题:基因工程技术是生物技术的核心技术。当代生物技术是以20世纪70年代DNA重组技术的建立为标志。PCR涉及三个环节_变性,退火,延伸基因工程的实施涉及四个必要条件:工具酶、基因、载体和受体细胞。限制性内切酶酶切DNA片断后普通有两类末端:平末端、黏性末端。基因组文库中涉及有内含子和外显子,而cDNA文库中则不含内含子生物技术重要是指基因工程、细胞工程、酶工程、发酵工程、蛋白质工程。基因工程操作流程重要涉及目的基因分离、与克隆载体重组、转入受体细胞、筛选和鉴定克隆子。细胞工程涉及植物细胞的体外培养技术、细胞融合技术、细胞器移植技术、克隆技术、干细胞技术。酶工程涉及酶的固定化技术、细胞的固定化技术、酶的修饰改造技术、酶反映器的设计等技术。酶的生产办法有提取法,发酵法和化学合成法。酶分子修饰的重要目的是改善酶的性能,即提高酶的活力、减少抗原性,增加稳定性。蛋白质工程的目的是根据对蛋白质功效的特定需求,对蛋白质构造进行分子设计,根据中心法则便能够改造天然蛋白质。简答题基因工程操作过程的重要环节有哪些?①分离或合成基因;②通过体外重组将基因插入载体;③将重组DNA导入细胞;④扩增克隆的基因;⑤筛选重组体克隆;⑥对克隆的基因进行鉴定或测序;⑦控制外源基因的体现;⑧得到基因产物或转基因动物、转基因植物一种抱负的用作克隆载体的质粒必须满足的条件是什么?(1)含有转录复制起始点。(2)含有抗菌素抗性基因。(3)含有若干限制酶切单一识别位点。(4)含有较小的分子量和较高的拷贝数。基因工程研究的理论根据是什么?(1)不同基因含有相似的物质基础。(2)基因是可切割的(3)基因是能够转移的(4)多肽与基因之间存在对应关系(5)遗传密码是通用的(6)基因能够通过复制把遗传信息传递给下一代分离目的基因的途径有哪些?(1)酶切法(2)PCR法(3)化学合成法(4)基因组或cDNA文库法目的基因克隆的基本办法有哪些?(1)直接从染色体DNA中分离:仅合用于原核生物、叶绿体和线粒体基因的分离,较少采用。(2)人工合成:根据已知多肽链的氨基酸次序,运用遗传密码表推定其核苷酸次序再进行人工合成。适应于编码小分子多肽的基因。(3)从mRNA合成cDNA:采用一定的办法钓取特定基因的mRNA,再通过逆转录酶催化合成其互补DNA(cDNA),除去RNA链后,再用DNA聚合酶合成其互补DNA链,从而得到双链DNA。这一办法普通可得到可体现的完整基因。(4)运用PCR合成:如已知目的基因两端的序列,则可采用聚合酶链反映(polymerasechainreaction,PCR)技术,在体外合成目的基因。(5)从基因文库中筛选:首先建立基因组或cDNA文库,运用探针从文库中筛选目的克隆。cDNA文库和基因组文库的重要差别有哪些?(1)基因组文库克隆的是任何基因,涉及未知功效的DNA序列;cDNA文库克隆的是含有蛋白质产物的构造基因,涉及调节基因。(2)基因组文库克隆的是全部遗传信息,不受时空影响;cDNA文库克隆的是不完全的编码DNA序列,因它受发育和调控因子的影响。(3)基因组文库中的编码基因是真实基因,含有内含子和外显子,而cDNA文库克隆的是不含内含子的功效基因。重组DNA导入受体细胞办法有哪些?(1)化合物诱导法(2)电穿孔法(3)农杆菌介导基因转化法(叶盘法)(4)微弹轰击法(5)超声波解决法(6)脂质体介导法(7)体内注射转化法(8)精子介导法工业化菌种的规定是什么?(1)原料便宜、生长快速、繁殖能力强、目的产物产量高。(2)发酵中产生的泡沫少,易于控制培养条件,酶活性高,发酵周期短。(3)抗杂菌和噬菌体的能力强。(4)不产生或少产生与目的产物相近的幅产物。(5)菌种遗传性稳定,不易变异和退化(6)不产生任何有害的生物活性物质和毒素,确保安全生产。什么是种子的扩大培养?种子扩大培养是发酵生产的第一道工序。就是将保存在砂土管、冷冻干燥管中处在休眠状态的生产菌种接种到试管斜面活化后,再通过摇瓶及种子罐逐级扩大培养而获得一定数量和质量的纯种过程。34、什么是蛋白质工程?是以对蛋白质构造和功效关系的认识为根据,借助基因工程技术和X-射线衍射分析技术,从基因入手,通过定点突变变化核苷酸次序,以达成改造现有蛋白质分子、或发明新的蛋白质分子目的的技术学科。何谓固定化酶?固定化酶的特性与游离酶的比较有哪些变化?固定化酶是指固定在一定载体上并在一定的空间范畴内进行催化反映的酶。固定化酶既保持了酶的催化功效,又克服了游离酶的局限性之处,含有提高酶的催化效率,增强稳定性,可重复或持续使用以及易于和反映产物分开等明显优点。固定化酶与游离酶比较,其催化特性重要有下列变化:(1)固定化酶的稳定性普通比游离酶的稳定性好,重要体现在:对热稳定性提高,能够耐受较高的温度;保存稳定性好,能够在一定条件下保存较长时间;对蛋白酶的抵抗性增强,不易被蛋白酶水解;对变性剂耐受性提高,在尿素、有机溶剂和盐酸胍等蛋白质变性剂的作用下,仍可保存较高的酶活力等。(2)固定化酶的最适作用温度普通与游离酶差不多,活化能也变化不大,但也有些固定化酶的最适温度与游离酶比较会有较明显的变化。(3)酶通过固定化后,其作用的最适pH往往会发生某些变化。(4)固定化酶的底物特异性与游离酶比较可能有些不同,其变化与底物相对分子质量的大小有一定关系。对于那些作用于低分子底物的酶,固定化前后的底物特异性没有明显变化。而对于那些可作用于大分子底物,又可作用于小分子底物的酶而言,固定化酶的底物特异性往往会发生变化。转基因食品的优点有哪些?(1)可延长蔬菜的货架期及感官特性。(2)提高食品的品质。(3)提高食品的营养。(4)提高肉、奶和畜类产品的数量和质量。(5)增加农作物抗逆能力,增加农业产量。(6)生产可食性疫苗或药品(7)生物功效性食品什么是生物农药?生物农药是“可用来防治病、虫、草等有害生物的生物体本身或源于生物,并可作为‘农药’的多个生理活性物质”。生物农药可分为生物体农药和生物化学农药。生物农药本身含有的对人畜毒性小,只杀害虫,与环境相容性好以及病虫害相对不易产生抗性等优点。简述疫苗的概念,并简述三代疫苗的特点?疫苗:广义的疫苗是指将病原微生物(如细菌、立克次氏体、病毒等)及其代谢产物,通过人工减毒、灭活或运用基因工程等办法制成的用于防止传染病的自动免疫制剂。其中,由细菌制成的称为菌苗;由病毒、立克次体、螺旋体等制成的称为疫苗。第一代疫苗:19世纪中叶,法国科学家Parsteur首先发明了减毒疫苗的制备技术。用病原体减毒或弱化制成疫苗,称之为第一代疫苗。特点:以减毒、弱化或灭活的病原体做疫苗。第二代疫苗(基因工程疫苗):将病原体的抗原(某种蛋白质)基因克隆在细菌或真核细胞内,运用其生产的病原体抗原作为疫苗。特点:运用病原体的某些抗原成分作为疫苗。第三代疫苗(核酸疫苗):将含有编码病原体抗原基因序列的质粒载体直接作为疫苗,经肌肉注射或微弹轰击等办法导入体内,通过宿主细胞体现系统体现抗原蛋白,诱导宿主产生对该抗原蛋白的免疫应答。特点:用含有病原体抗原基因序列的质粒载体直接作为疫苗。如何运用微生物勘探石油和提高采油量?微生物二次采油技术的基本原理:运用微生物能在油层中发酵并产生大量的酸性物质以及H2、CO2及甲烷等气体的生理特点,产气增加地层压力、酸性物质减少原油黏度,发酵产物含有表面活性剂作用。采油量可提高20%-34%。微生物三次采油原理运用微生物分子生物学技术构建能产生大量CO2和甲烷等气体的基因工程菌株或选育能提高产气量的高活性菌株。让这些工程菌能在油层中不仅产愤怒体增加井压,并且还能分泌高聚物,糖酯等表面活性剂,减少油层表面张力,使原油从岩石中、沙土中松开,黏度减低,从而提高采油量。什么是生物修复技术?生物修复是运用生物,特别是微生物的代谢活动来减少或去除污染环境中的化学污染物的过程。这种技术涉及生物催化进行的降解、去毒或积累作用,并且可用于大面积污染环境的治理,又称为生物改善、生物挽救、生物再建或生物解决等。生物修复的技术大致可分为原位生物修复和异位生物修复两类。原位生物修复中的污染对象不需移动,解决费用低,但解决过程控制比较难。异位生物修复需要通过某种办法将污染对象转移到污染现场之外,再进行解决。生物技术领域的发明涉及哪些?①转基因动物和植物品种发明;②微生物及遗传物质发明;③生物制品发明;④获得生物体的生物学办法或遗传工程学办法发明;⑤微生物学办法发明;⑥基因治疗办法发明等。生物技术专利保护的两个核心问题是什么?①如何拟定生物技术领域中的科学发现和发明的界限,特别是有关基因的发明与发现问题。②如何界定一种符合专利申请的与生命物质有关的发明,以及对此项发明该予以多大范畴的保护。生物技术:也称生物工程,是人们以当代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其它基础科学的科学原理,按照预先的设计,改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达成某种目的的一门新兴的、综合性的学科。基因组DNA文库:将某一种基因DNA用适宜的限制酶切断后,与载体DNA重组,再全部转化宿主细胞,得到含全部基因组DNA的种群,称为基因组DNA文库。或:把某种生物基因组的全部遗传信息通过载体贮存在一种受体菌克隆子群体中,这个群体即为这种生物的基因组文库。cDNA文库:即由mRNA通过反转录成cDNA,然后来构建文库,构建的文库不包含内含子。基因和基因组DNA分子中含有特定生物学功效的片段称为基因(gene)。一种生物体的全部DNA序列称为基因组(genome)载体:把一种有用的目的DNA片段通过重组DNA技术,送进受体细胞中去进行繁殖或体现的工具称为载体。转化:外源DNA导入宿主细胞的过程称之为转化。细胞工程:以生物细胞

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