脂肪乳实验(汇编)

2一、教学要求把握生物分别科学的进展、相关项单元操作技术的根本原理。把握试验方案设计的根本原则，学会试验方案设计的根本方法。娴熟地实施设计方案，优化试验条件。把握所学技术、方法在药学争论中的应用。把握试验数据的统计与处理，学会试验图表的制作方法以及试验结果分析争论二、教学学时6464856161024〕载药脂肪乳的组成以及在药物制剂中的争论进展。脂肪乳制备的根本流程和原则。各试验的根本原理，操作步骤和留意事项。标准曲线的制作方法和要求，5．在本模块根底上开展蛋白质争论的思路和常用技术、方法。6.试验设计和实施的根本的根本要求、留意事项。四、争论课题氯维地平脂肪乳制剂的处方争论氯维地平脂肪乳制剂的工艺优化氯维地平脂肪乳制剂的表征及质量评价氯维地平脂肪乳制剂的稳定性争论五、主要单元操作技术与设备1、单元操作技术：剪切乳化、高压均质、微射流2、主要设备：高剪切分散乳化机、高压微射流纳米分散仪、高压纳米均质机、Zetasizer/Nano-ZS90真空枯燥箱、分析天平、电子台秤、制冰机高效液相色谱等。六、教学组织方式两人一组，全部试验由学生设计方案，独立完成。七、教学的重点和难点1、学习的自主性加大，审核学生的试验方案、供给必要的条件。2、讲授局部的难点是进展、制备思路、原则和常用技术、方法的学习。3、本模块涉及的仪器特别多，技术方法多，学习难度较大，力求与理论课的对接、举一反三。八、难点的解决方法：1、认真备课，该讲的讲深、讲透，重点一对一答疑。2、做好设计报告的审核，提前一个月做好仪器检修和药品的预备。3、做好必要的单元操作示教和争论过程的现场指导。1、孙彦，生物分别工程；2、严希康，生化分别技术；1、孙彦，生物分别工程；2、严希康，生化分别技术；3、谭天伟，生物分别技术4、李建武，生物化学原理和方法；5、生物分别工程试验指导2—1材料与方法试验材料T-18basic〔IKA；M100PCE〔高压纳米均质机〔广州聚能生物科技〕YM50〔上海三申DF-101S〔郑州长城科工贸；Zetasizer/Nano-ZS90〔Malver，英国蛋黄卵磷脂〔LipoidE80，供注射用〕〕EDTA-2Na〔阿拉丁〕油酸〔Lipoid，供注射用〕油酸钠〔Lipoid，供注射用；试验方法zeta来评价，争论并探讨了油相、稳定剂以及抗氧剂对氯维地平脂肪乳的影响。处方组分的选择FDA〔见下表在此根底上，选择对制剂影响较大的关键组分进展优化。美国FDA批准上市的氯维地安静脉注射用脂肪乳处方油的种类和用量考察MCT制备氯维地平脂肪乳，考察不同油相比例对乳剂的粒径等稳定性指标的影响。稳定剂的种类和用量考察的粒径等稳定性指标的影响。抗氧剂的种类和用量考察注射液中常用的水溶性抗氧剂硫代硫酸钠、脂溶性抗氧剂VE以及两亲性抗氧60℃10PDIzeta其最适合的用量。EDTA-2Na的用量EDTA-2Na能与微量金属离子络合，具有提高油脂抗氧化及防止变色的作用。参考相关文献以及美国FDA批准上市0.005%质量的评价指标及方法外观氯维地平脂肪乳制剂的外观应为乳白色，均匀，流淌性良好。粒径0.5μm以下，在大于0.5μm1μm3％，并不得检5μm的乳粒。光粒度仪进展粒径的测定。zetazeta电位是连续相与附着在分散粒子上的流体稳定层之间的电zeta电位是衡量体系稳定性的一个重要指标。目前测量zeta电位的方法主要有电泳法、电渗法、流淌电位法以及超声波法，其中以电泳法应用最广。正zeta电位，即＜-30mV和＞+30mV都将视为高zetazeta好的分散液具有抗分散性。游离脂肪酸pH值降低，pH的降低显著降低磷脂的离子化zeta电位的降低，从而导致脂肪乳不稳定，因此其含量5mmol/L。〕尼罗蓝显色剂的配制：称取尼罗蓝0.01g溶解于50ml25ml振摇，弃去上层正庚烷，反复操作约410ml，90ml，混匀。本液置棕色瓶中，室温下可存放一个月。0.12821g棕榈酸置于25ml容量20mmol/L的溶液，20mmol/L溶液52.51.25ml和2.5mmol/L溶液5、2.5、1.25ml至10ml容量瓶中得到10、5、2.5、1.25、0.625、0.3175mmol/L的一系列标准溶液。ml具塞试管中，加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L硫酸溶液(40:10:1)的5.0ml振摇1分钟，放置10分钟〔硫酸作用：将乳剂中的脂肪酸钠水解为脂肪酸，以测定全部的游离脂肪酸含量。加正庚烷2ml4ml10次，静置15分钟，使mol/LNaOH氧化钠的体积，以xy作图，得游离脂肪酸的标准曲线。量取样品1ml〔平行共2份，置20ml具塞试管中，加异丙醇-正庚烷-0.5mol/L硫酸溶液(40:10:1)的混合溶液5.0ml1103ml3ml，密塞，上下翻转10次，静置153ml，参与1ml尼罗蓝指示剂，用0.01mol/LNaOH滴定液滴定，至溶液低端由蓝色变为淡紫色，读出所用氢氧化钠的体积，代入标准曲线，计算得游离脂肪酸浓度。4操作，上层液3ml浑浊，可能1ml3进展操作！假设实验过程中未消灭浑浊，可实行一步萃取。过氧值其量。过氧化值多承受碘量法进展滴定测量，过氧化值一般不超过2.5mmol/L。1〕碘化钾饱和溶液的配制：碘化钾在20℃的时候溶解度是144g，量取10ml水，参与14.4g碘化钾，溶解，即可配置成碘化钾的饱和溶液〔保证有晶体存在〔2〕1%淀粉指示剂的配制：称取1.0g可溶性淀粉，加少量纯化水搅匀，随后一边搅拌，一边参与约60ml热水，再将此溶液煮沸2~3min，静置冷却〔3〕参照国家药品标准，取冰醋酸-氯仿〔6:4〕30ml250ml5ml，快速参与混合液中，轻0.5ml，密塞，振摇1min，加沸过的冷水30ml与12ml。用硫代硫酸钠滴定液〔0.01mol/L〕滴定至蓝紫色消逝，消耗的硫代硫酸钠滴定液不得超过1.0ml。留意用除去空白消耗NaOH过氧化值〔mmol/L〕=式中：V为样品消耗硫代硫酸钠溶液的体积Vo为空白消耗硫代硫酸钠溶液的体积ml；过氧化值〔mmol/L〕=W为供试品的取样量m。甲氧基苯胺值350nm处用分2.2。1甲醚〔0.25g〕100ml量瓶中，加冰醋酸溶解并稀释至刻度，得0.25〔2〕周密量取10ml样品于圆底烧瓶中，参与20ml甲醇，旋蒸除尽水分〔需要重复操作3次，残渣加20%异丙醇-异辛烷溶液溶解并稀释至25ml，摇匀，过滤得供试品。在350nm处，以20%异丙醇-异辛烷溶液做空白，测定供试品的吸取度A0〔3〕5ml1ml甲氧基苯胺醋酸溶液，加塞振摇，密闭放置15min，以20%溶液：醋酸=5:1350nm处测定吸取度A，计算甲氧基苯胺值。甲氧基苯胺值=式中：V为供试品的取样量，ml；甲氧基苯胺值=Bg/ml；为参与0.25%甲氧基苯胺的冰醋酸溶液后的溶液稀释因子。含量测定0.5ml于10ml量瓶中，加适量甲5000rpm离心5min，HPLC测定方法进展。TC-C18柱(5μm,4.6×250mm)，80:20v/1ml/min25℃，364nm20μl。结果与争论氯维地平脂肪乳的工艺争论氯维地安静脉注射用脂肪乳处方试验材料与方法试验材料T-18basic〔IKA；M100PCE〔高压纳米均质机〔广州聚能生物科技〕YM50〔上海三申DF-101S〔郑州长城科工贸；Zetasizer/Nano-ZS90〔Malver，英国蛋黄卵磷脂〔LipoidE80，供注射用〕〕EDTA-2Na〔阿拉丁〕油酸〔Lipoid，供注射用〕油酸钠〔Lipoid，供注射用；试验方法初乳工艺优化初乳制备工艺。油水相的制备磷脂的参与方式有参与油相或参与水相，试验中觉察将磷脂参与水中剪切分散后制备的初乳放置5min很快分层；而参与油相剪切时，油相产生太度把握在卵磷脂的相变温度〔75℃〕四周，可以使溶解速度加快。75℃，水相制备温度要尽量与油相温度接近，否则70℃为制备水相的温度。剪切工艺3、5、10、20、30min〕取样，测定初乳粒径、PDI。均质工艺匀质设备选择承受优化的脂肪乳处方和剪切工艺，承受高压匀质机和高压微射流两种不同的布的影响。匀质参数优化压力和循环次数对氯维地安静脉注射脂肪乳粒径及其分布的影响。脂肪乳pH值优化为了使样品的pH值与人体血液pH接近，必需保证最终的样品pH在6~8pH值会下降，pH值应调整至稍高。处方前争论结果说明氯维地平在pH5~10范围中相对较稳定。考察乳pH值对脂肪乳的zeta电位的影响。灭菌工艺优化pH115℃30min121℃下15min的热压灭菌工艺对氯维地安静脉注射乳剂的影响。3.结果与争论氯维地平脂肪乳的表征与质量评价对药物制剂进展质量评价可以为制定制剂的质量标准供给依据，对其进展表征则可以进一步争论药物制剂的微观构造。zetaTEM、DSC、XRD1仪器与试剂i220透射电子显微镜I公司，荷兰；DSC-7差热(Perkin-Elmer公司，美国)；o6L冷冻枯燥系统o公司，美国；XIIIB粉末衍射仪u公司，日本；其他试验仪器同前试验方法质量评价以外观、粒径、电位、游离脂肪酸、过氧化值、甲氧基苯胺值以及药物含量为指标对氯维地平脂肪乳进展质量评价。表征〔TEM〕5003μl滴5μl磷钨酸溶液〔2%，w/v〕5min，再次烘干即可。〔DSC〕-2℃冰箱预冻8-83置于冷冻枯燥机中-40℃升华，冷冻枯燥三天，待样品完全枯燥，将样品拿出备用。预备四个冻干粉末样品待做DSC：1、氯维地平原料药；2、空白制剂冻干粉末；3、空白制剂冻干粉末与氯维地平原料药的物理混合粉末；4、氯维地平脂肪乳制剂粉末。条件：在0~20010℃/min。X射线衍射分析〔XRD〕按5.3.2.2项下的方法制备冻干样品，XRD试验条件为：Cu-Kα辐射，工作电压40k505°~5〔θ100.02°步。结果与争论氯维地平脂肪乳的稳定性依据中国药典2023版二部附录药物稳定性试验指导原则加速试验；并争论制剂在生理盐水及葡萄糖注射液中的稀释稳定性。仪器与试剂氯化钠〔分析纯，国药；葡萄糖〔分析纯，国药其它仪器试剂同前试验方法影响因素试验高温试验取经过充氮灌封、灭菌的氯维地平脂肪乳置于60℃条件下放置100天和第10低温试验4℃条件下放置100和第10天取样，考察其粒径、电位以及游离脂肪酸等指标。冷冻试验取经过充氮灌封、灭菌的氯维地平脂肪乳置于-20℃条件下放置10天，分别在0天和