用全自动血液分析仪检测小型猪血液生理指标

用全自动血液分析仪检测小型猪血液生理指标

国家“15”科学研究中心“中国实验小型猪资源开发、研究和应用”项目计划整合中国主要小型猪的资源。从中国农业科学院北京畜牧兽医研究所、广西农业大学和贵阳中医药大学联合引入贵阳小型猪（gxmp）和小群体猪（guzhou微型猪，gzmp）。封闭群由贵州省的小型猪（gzmp）组成，封闭群由小群体组成，其中一些是gzmp。净化后，形成一个基本群体，并建立国家实验小型猪资源中心（以下简称“中心”）。血液生理指标是监测小型猪健康状况以及反映净化过程中生理变化的主要依据,也是小型猪用于人类医学研究的重要基础数据。本研究检测了这3个小型猪品种引入“中心”前,原群体的血液生理指标,这些指标可以作为群体净化和饲养环境发生变化后,小型猪生理变化的参考,并以此了解净化及标准化的饲养环境对小型猪的影响。通过3个小型猪品种之间相应指标的横向比较,以及与人类、中国普通猪种、国外著名小型猪品种和国外重要猪品种相应指标的比较,可以为将来的研究工作奠定基础。1数据分析和指标检测方法贵州小型猪46头(公畜21头,母畜25头),于2005年5月底,采自贵阳中医学院实验动物研究所;五指山小型猪近交系45头(公畜7头,母畜38头),于2005年7月初,采自中国农业科学院北京畜牧兽医研究所;广西巴马小型猪56头(公畜9头,母畜47头),于2005年7月底,采自广西大学动物科技学院巴马小型猪保种场。非抗凝血3ml,EDTA抗凝血3ml均通过前腔静脉采集。血液生理指标共18项,包括:白细胞总数(WBC,109/L);红细胞总数(RBC,1012/L);血小板总数(PLT,109/L);中性粒细胞数(GR,109/L);中性粒细胞百分比(GR%,%);单核细胞数(MO,109/L);单核细胞百分数(MO%,%);淋巴细胞数(LY,109/L);淋巴细胞百分数(LY%,%);RBC平均容积(MCV,FL);红细胞比容(HCT,%);红细胞分布宽度(RDW,%);红细胞平均血红蛋白量(MCH,pg);平均RBC血红蛋白量(MCHC,g/L);血红蛋白(HGB,g/L);平均血小板容积(MPV,FL);血小板比容(PCT,%);血小板分布宽度(PDW,%)。贵州小型猪血样送贵州省人民医院血常规检验科,用ADVIA120全自动血球分析仪分析;五指山小型猪近交系血样送中国人民解放军309医院,用K-1000血细胞全自动分析仪(日本东亚公司)检测;巴马小型猪血样送广西医科大学第一附属医院,用日本产NIHONKOHDEN血球计数仪(MEK-6318K)分析。计算3个小型猪品种各指标的总群体、公畜和母畜平均数,并在品种间进行方差异质性平均数差异显著性检验,以总群体平均数与人类各指标的参考范围、国外著名的哥廷根小型猪品种、中国地方猪品种以及国内外育种中广泛使用的长白猪相应指标进行比较。人类参考值来自309医院,哥廷根小型猪数据来源于哥廷根小型猪网站和文献报道(Ellegaard等,1995),中国地方猪品种来源于文献中报道的军牧1号(李慕等,2000)和剑河白香猪(邱小田等,2005),国外优良品种来源于文献报道的长白猪(邱小田等,2005)。2人类、哥廷根小型猪、地方猪的临床生理指标比较GZMP、WZSP和GXMP各项血液生理指标的群体平均数、最大值、最小值和标准差见表1。GZMP和WZSP群体间差异不显著(P>0.05)的血液生理指标有:LY、HGB、PCT和PDW;差异达到显著水平(0.01<P<0.05)的指标有:RBC、PLT和MO;差异达到极显著水平(P<0.01)的指标有:WBC、GR、MCV、HCT、RDW、MCH、MCHC和MPV。GZMP和GXMP群体间差异不显著的指标有:GR、LY、RDW、PCT和PDW;差异达到显著水平的指标有:HCT和HGB;差异达到极显著水平的指标有:WBC、RBC、PLT、MO、MCV、MCH、MCHC和MPV;WZSP和GXMP群体间差异不显著的指标有:GR、LY、MO、HCT、HGB和PCT;差异达到显著水平的指标有:MCH;差异达到极显著水平的指标有:WBC、RBC、PLT、RDW、MCHC、MPV和PDW。GZMP、WZSP和GXMP与人类、哥廷根小型猪、地方猪品种及长白猪各血液生理指标的比较见表2。3个小型猪品种与人类各血液生理指标参考值相比较,处于人类指标范围内的有8项:GR、GR%、MO、HCT、HGB、MPV、PCT和PDW;比人类最大值高的有5项:WBC、RBC、LY%、RDW和MCHC;比人类最小值低的有3项:MO%、MCV和MCH;GXMP的PLT和LY,WZSP的MO大于人类的最大值,而其它2个品种的同一指标的处于其范围内。GXMP检测结果与文献报道的数据比较(王爱德等,2001),文献报道中较本次检测结果高的指标有:WBC、PLT和RDW。中国3个小型猪品种与哥廷根小型猪相比较,同一血液生理指标,哥廷根小型猪的MO%、MCV和HCT比3个小型猪的值都低,且低于人类参考范围最小值;PLT和LY较3个小型猪的值都高,且高于人类参考范围最大值。3个小型猪品种与国内普通猪品种相比,国内普通猪较小型猪及人类最小值低的指标是HGB,较3个小型猪和人类最大值高的指标有WBC、PLT和LY;长白猪较所有小型猪品种都低及人类最小值低的指标有:WBC、RBC、LY、LY%和HGB,没有比国内3个小型猪高的指标。3国内外在行业内不同品种间的差异3.13个小型猪品种的背景资料本研究检测了引入“中心”的3个小型猪品种净化前的血液生理指标。五指山小型猪原产于海南省白沙县和东方县,由于这些区域属于偏远山区,交通不便,经历代近亲繁育,在当时就已经是基因高度纯合的近交品种。到20世纪70年代,五指山小型猪已濒临灭绝。1987年,中国农业科学院北京畜牧兽医研究所冯书堂研究员等从海南省五指山地区将同一窝仔猪中的公母猪各1头引到北京,经过子配母、全同胞交配和祖孙三代内交配的方式进行近亲繁育,在移地保种获得成功的基础上,成功培育出世界首批近交系猪。WZSP被北京解放军总医院、北京口腔医院、北京佑安医院、北京阜外医院、北京同仁医院等医院、学校和研究所广泛用于糖尿病、心血管疾病、口腔疾病、结膜保存和移植等相关研究中,并取得很好的研究成果(冯书堂等,1999)。贵州小型猪的中心产区在贵州省从江县。1985年,贵阳中医学院甘世祥教授从中心产区引入贵州小型香猪组建基础群,以小型化、早熟化为育种目标进行定向选育,1987年,经专家鉴定,正式命名为贵州小型猪。贵阳中医学院通过与贵州省人民医院、贵州省心血管研究所、中国人民解放军第三军医大学烧伤研究所以及中国人民解放军海军医学研究所等单位进行广泛合作,为人类心血管系统疾病、烧伤和减压病等的研究建立了有效的动物模型(甘世祥等,2001)。广西巴马小型猪原产于广西壮族自治区巴马县。1987年,广西大学王爱德教授等从原产地引入2头公猪和14头母猪组建基础群,采用群内闭封纯繁选育及半同胞为主的近交方式进行选育,形成了遗传稳定的封闭群,具有“两头乌”的毛色特点。到2005年6月底,广西巴马小型猪总存栏数有300多头,其中封闭群260头,完成了17世代封闭群的培育。广西巴马小型猪广泛应用于医学研究的多个领域,例如广西壮族自治区药品检验所病理室进行新药检验,广西壮族自治区人民医院以其建立心肌梗塞动物模型和呼吸系统疾病动物模型,广西大学将其作为烧伤病人皮肤敷料的供体,并用于猪瘟疫苗的动物模型(王爱德等,1995)。3.2各指标在品种间差异的来源血液生理指标一直作为实验动物用于人类医学研究的重要基础数据,这些指标将成为监测小型猪从贵阳和广西引到北京过程中健康状况,以及SPF、恒温、恒湿封闭环境中培育过程个体生理变化的主要依据。本研究的各项生理指标中,3个小型猪品种间都无显著差异的指标仅有血小板比容,血红蛋白含量在贵州与广西巴马小型猪间具有显著差异,五指山小型猪与这2个品种间的差异不显著,有6项指标在3个品种间都具有极显著差异,而其它10项指标最少在2个品种间具有极显著差异。同一群体内不同指标的变异程度也不尽相同,贵州小型猪的变异系数(coefficientofvariation,CV)在0.035(MCHC)到1.059(MO)之间,平均CV为0.243,五指山小型猪的CV值在0.024(MCHC)到0.564(MO%)之间,平均CV为0.19,广西巴马小型猪的CV值在0.015(MCHC)到0.597(GR)之间,平均CV为0.182。产生这种差异的原因可能是品种的遗传基础、生长繁育环境、饲养条件和管理水平等因素。本研究检测的18项指标中,有8项是3个小型猪品种的值均位于人类参考范围之内,有3项是较人类最小值都低,有5项较人类最大值都高。与3个小型猪品种相比较,哥廷根小型猪有3项指标较中国小型猪参数值都低,且低于人类最小值;有2项指标较它们的都高,且高于人类最大值;国内普通猪比小型猪和人类最小值都低的指标有1项,较小型猪都高且高于人类最大值的指标有3项;