中山大学 实验室安全与论文写作复习纲要

《实验室安全基础知识》复习资料猩猩整理版实验室安全基础知识说明：本资料包括伦照荣老师前面三个课件95%的文字和小部分图片，便于复习和查找资料用，文中如有错漏，以课件为准！第一章实验室生物安全概要病原体研究很重要,但是危害实验人员!!!1941年,调查显示美国发生74例实验室相关的布鲁氏杆菌感染二战期间,日本在中国进行细菌战的同时,其工作人员也有上万人感染,数千人死亡!1976年统计,英国医学实验室的工作人员获得结核感染比普通人高5倍1979年,前苏联生物武器研究基地炭疽杆菌泄露造成64人死亡2003年,新加坡台湾以及中国大陆都有明确的实验室感染SARS的病例,以及随后对周围环境的危害提倡实验室生物安全势在必行!!实验室感染的直接原因：1微生物气溶胶传播2接种时出错,注入体内3被动物咬伤4注射器喷溅5离心机事故实验室生物安全的重点任务是:实验室感染的控制实验室对周围环境影响的控制对实验室和感染性材料的管理控制国内外关于实验室安全的相关规定WHO于1983年出版的《实验室生物安全手册》是第一本具有国际适用性的实验室生物安全手册WHO于1993年又组织了7个国家和WHO的生物安全专家及官员编写和发布了《实验室生物安全手册》第二版WHO于2004年完成了第三版《实验室生物安全手册》的发布，内容上更全面、更科学、更具时代感美国在不断的研究中于1999年发布了第四版的《微生物和生物医学实验室的生物安全》及２００２年《涉及重组ＤＮＡ研究的生物安全南（ＮＩＨ指南）》加拿大于１９９６年已发布第二版《实验室生物安全指南》欧洲：欧盟法规、英国的《生物因子危害程度及防护分类》、德国〈病原体分类〉、法国与比利时和荷兰的〈感染因子的危害等级分类〉、瑞士〈基于对人和环境危险性的生物因子分类〉等都在安全问题上进行了具体的规定2003年了SARS给中国的实验室生物安全拉响了警钟！！！2004年5月GB19489—2004《实验室生物安全通用要求》作为国家强制性标准正式颁布，在实验室生物安全管理、公共卫生体系和认证认可体系建设上是一件具有重要意义的大事，它标志着我国实验室生物安全管理进入了科学、规范的发展的新阶段。第二章实验室生物安全基本原则基本概念病原体：可使人、动物或植物致病的生物因子。危险废弃物：有潜在生物危险、可燃、易燃、腐蚀、有毒、放射和起破坏作用的，对人、环境有害的一切废弃物。气溶胶：悬浮于气体介质中的粒径一般为0.001μm-100μm固态或液态微小粒子形成的相对稳定的分散体系。一级防护屏障：实验室的生物安全柜和个人防护装备等共同构成的防护屏障，用以减少或消除危害性生物因子的暴露。二级防护屏障：实验室的设施结构和通风系统等共同构成的防护屏障，除了保护实验室人员，还能保护周围社区的人或动物免受生物因子意外扩散所造成的感染。生物安全实验室（BSL）：通过规范的实验室设计建造、实验室设备的配置、个人防护装备的使用，通过严格遵从标准化的工作操作程序和管理规程等综合措施，确保操作生物危险因子的工作人员不受实验对象的伤害，确保周围环境不受其污染的实验室。微生物危害等级1.危害等级Ⅰ（低个体危害，低群体危害）不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒、寄生虫等生物因子。2.危害等级Ⅱ（中等个体危害，有限群体危害）能引起人或动物发病，但一般情况下对健康工作者、群体、家畜或环境不会引起严重危害的生物因子。3.危害等级Ⅲ（高个体危害，低群体危害）能引起人类或动物严重疾病，或造成严重经济损失，但通常不能因偶然接触而在个体间传播，或能使用抗生素、抗寄生虫药治疗的生物因子。4.危害等级Ⅳ（高个体危害，高群体危害）能引起人类或动物非常严重疾病，一般不能治愈，容易直接或简接或偶然接触而在个体间传播。生物安全水平危害等级生物安全水平实验室类型实验室操作安全设备Ⅰ级基础实验室—一级生物安全水平基础的教学研究GMT不需要;开放实验台Ⅱ级基础实验室—二级生物安全水平初级卫生服务;诊断研究GMT加防护服生物危险标志开放实验台,此外需BSC用于防护可能生成的气溶胶Ⅲ级屏障实验室—三级生物安全水平特殊的诊断研究在二级生物安全防护水平上增加特殊防护服准入制度定向气流BSC和/或其他所有实验室工作所需要的基本设备Ⅳ级高度屏障实验室—四级生物安全水平危险生物因子研究在三级生物安全防护水平上增加气锁入口外出淋浴污染物品的特殊处理Ⅲ级BSC或Ⅱ级BSC并穿着正压服,双开门高压灭菌器(穿过墙体),过滤空气实验室生物安全保障措施要认识到实验室防护与实验室安全虽然相关，但二者并不等同使用和贮存病原体或毒素的区域应控制人员的出入明确在实验区有人员明确被带入实验区的物质明确被带出实验区的物质制定应急措施制定事故报告方案第三章生物安全实验室一级生物安全水平实验室BSL-1适用于具有以下特征的生物因子的操作：已知不会导致健康工作者和动物致病的细菌、真菌、病毒和寄生虫等，并且对实验室工作人员和环境的潜在危害性最小。进入BSL-1实验室的工作人员要通过实验室操作程序的特殊培训，并由一位受过微生物学及相关科学一般培训的实验室工作人员监督管理。BSL-1实验室标准微生物操作准则：

1.实验正在进行或正在操作组织和标本时，实验室主任应限制人员进入实验室。

2.操作潜在危险物和摘下手套后要洗手，离开实验室之前也要洗手。

3.工作区内禁止吃东西、喝水、抽烟、操作隐形眼镜、使用化妆品及储存食物。在实验室戴隐形眼镜的人员应佩戴护目镜和防护面具。食物要储存在工作区外的专用柜子或冰箱里。4.严格禁止用嘴吸移液管，要使用机械吸液装置。5.制定尖锐物品的安全操作规范。

6.所有的实验操作步骤尽可能小心，减少气溶胶或飞溅物的形成。

7.工作日结束后，应实行终末消毒处理。如有任何潜在危险物溅出时，工作台表面应立即净化消毒处理。

8.所有培养基、保存物和其它系统管理的废弃物，在处理之前应使用经审定批准的净化方法（如：高压灭菌法）进行净化处理。

9.实验室应具备防止昆虫和啮齿类动物在实验室孳生的防护设备。一级屏障1.操作属于生物安全一级的生物因子一般不需要特殊防护装置和设备，如生物安全柜。

2.实验服、实验袍或实验制服，防止便服被污染或弄

3.如果手部皮肤破损或起疹时应戴上手套；要配备可替换的胶乳手套。

4.操作中遇到可能有微生物或其它有毒害物质飞溅出来时，应佩戴保护性眼罩。二级屏障1.BSL-1实验室应该有控制进入的门。

2.每个实验室应配备一个洗手用的洗涤槽。

3.实验室的设计应使实验室易于清洁，不适合铺设地毯。

4.实验台面应是防水的，并且能够耐受中等程度的热、有机溶剂、酸碱及其它用于净化处理台面和设备的化学药品。

5.实验室器材设施应能支持预期的承重和使用需要。桌凳、柜子和设备之间的间距应便于清扫。二级生物安全水平实验室BSL-2实验室布局应分清洁区、半污染区和污染区，人流、物流、信息流应有效分隔。BSL-2设计要求：1.首先要符合BSL-1实验室建筑设计和设施要求2.实验室门宜带锁、可自动关闭。实验室的门应有可视窗。3.实验室出口应有在黑暗中可明确辨认的标识。4.实验室宜有不少于每小时3～4次的通风换气次数。5.应通风，如使用窗户自然通风，应有防虫纱窗。6.应有足够的存储空间摆放物品以方便使用。在实验室工作区域外还应当有供长期使用的存储空间7.在实验室工作区域外应有存放个人衣物的条件8.在实验室门口应有生物安全二级实验室标识。防护设备1.应在实验室内配备生物安全柜。2.应设洗眼设施，必要时应有应急喷淋装置。3.在实验室所在的建筑物内应配备高压蒸汽灭菌器。三级生物安全水平实验室BSL-3是一个按特殊要求建造的实验室，适合操作、研究会引起严重的、可能致死的疾病的病原微生物。整个实验室完全密封，室内气压比室外低40帕斯卡，处于负压状态，从而避免实验室内部的可能含有病源微生物的气体跑到外面而造成污染。操作准则：

1．实验器材应避免使用玻璃制品和锐器。2．所有的实验、检测操作都必须在指定区域内进行3．菌毒种的使用严格执行菌毒种有关管理规定，责任人签订责任书，做到双人双锁保管4．实验中不得不使用玻璃制品和锐器时，应通过镊子等工具夹取，尽量避免直接用手接触。5．必须使用螺口可密闭的离心管或试管进行离心6．实验动物放在负压饲养箱内饲养，每天至少观察1—2次，做好观察记录7.完成每一项试验（感染性材料的操作、动物解剖）或转换实验区时都应更换第二层手套，摘下的手套应立即置于盛有消毒剂的容器中。8.每次实验、检测工作结束后，工作人员应对涉及的所有工作区域、仪器设备和试验台面进行清洁整理和消毒处置。四级生物安全水平实验室BSL-4四级生物安全水平实验室是为进行与危害等级Ⅳ的微生物相关的工作而设计的，根据所使用的生物安全柜的类型和穿着防护服的不同，可以分为安全柜型、正压服型和混合型实验室。在建设和投入使用前，应充分咨询有运作类似设施经验的机构，其运作应在国家有关部门的管理之下进行。动物实验室设施动物实验室的生物安全防护（ABSL）设施参照BSL-1—BSL-4实验室的要求，此外还应考虑对动物呼吸、排泄、毛发、抓咬、挣扎、逃逸、动物实验、动物饲养、动物尸体及排泄物的处置等过程产生的潜在生物危害的防护。动物实验设施水平危害等级防护水平实验室操作和安全设施Ⅰ级ABSL-1限制出入，穿戴防护服和手套Ⅱ级ABSL-2ABSL-1的操作加：生物危害警告标志。可产生气溶胶的操作应使用Ⅰ级或Ⅱ级BSC。废弃物和饲养笼舍在清洗前先清除污染Ⅲ级ABSL-3ABSL-2的操作加：准入控制。所有操作均在BSC内进行，并穿着特殊防护服Ⅳ级ABSL-4ABSL-3的操作加：严格限制出入。进入前更衣。配备Ⅲ级BSC或正压防护服。离开时淋浴。所有废弃物在清除出设施前需先清除污染第四章危害评估生物安全工作的核心是危害评估，也指风险评估。当实验室活动涉及感染或潜在感染因子时，对某一个特定的操作程序或实验进行危害评估，可以帮助正确选择生物安全水平，评估职业性疾病风险、采取相应安全防护措施、减少所危险性时间发生。（评估的意义）危害评估的影响因素病原体的致病性传播途径病原体的稳定性病原体的感染力量病原体的浓度感染性物质的来源动物研究结果基因技术实验室操作预防措施或治疗方法医疗监督其他

危害评估的范围含有已知感染性病原体的物质含有未知感染性病原体的物质含有遗传修饰微生物的物质可能含有（或没有）未知感染性病原体的物质动物研究其他应用(包括操作人本身)第五章实验室危害第一节化学品的危害可以根据危险性货物运输规定或化学品本身所具有的危害和危害程度来对危害性化学品进行定义和分类。可以根据化学药品其反应性、不稳定性、燃烧性或健康危害程度来进行分类。可以根据其毒性作用进行分类。暴露途径：吸入：化学品可能引起刺激性、致敏性、变态反应性、呼吸道的疾病或癌症接触：皮肤接触时可能引起化学烧伤、眼结膜炎或全身性中毒食入：危险性化学品可能经口吸入或污染食物和饮料而意外食入通过损伤皮肤：危险性化学品可能经皮肤切口、擦伤或针刺伤口进入体内第二节压缩气体和液化气的危害容器贮存要求压缩气体钢瓶和液化气容器安全地固定在墙上或坚固的实验台上，以确保钢瓶不会因为自然灾害而移动运输时必须戴好盖帽，并用手推车运送大量储备用钢瓶应存放在与实验室有一定距离的适当设施内。不应放置在散热器、明火或其他热源或会产生电火花的电器附近，也不应置于阳光下直晒小型、单次使用的气体钢瓶不得焚烧第三节火的危害火灾的通常原因：1.超负荷用电；2.电器保养不良，例如电缆的绝缘层破坏或损坏3.供气管或电线过长4.仪器设备在不使用时未关闭电源5.使用不是专为实验室环境设计的仪器设备6.明火7.供气管老化锈蚀8.易燃、易爆品处理或保存不当9.不相容化学品没有正确隔离10.在易燃物品或蒸气附近有能产生火花的设备11.通风系统不当或不充分灭火器的类型和应用范围种类应用范围不宜应用范围水纸、木质纤维电路和电器火灾、易燃液体、金属燃烧CO2易燃液体和气体、电火灾碱金属、纸开粉易燃液体和气体、碱金属、电路和电器火灾可重复使用的仪器和设备，因为其残渣难以清除干净泡沫易燃液体电火灾第四节电的危害实验室成员应该了解的危险情况：1、电器接近潮湿物体表面2、使用过长的软线3、电线绝缘性能差并已老化4、由于使用适配器使电路过载5、可能产生电火花的电器接近易燃物质及其蒸气6、电器在无人看管时处于通电状态7、电器着火时使用错误类型的灭火器第五节电离辐射的危害电离辐射能造成皮肤损伤、脱发、贫血、胃肠系统损伤及白内障和癌症等疾病;也会造成染色体损害或基因突变等遗传疾病辐射区域1只能在指定区域使用放射活性物质2只允许必要的工作人员参与3使用个人防护设备（包括实验室工作服、安全眼镜以及一次性手套）4监测实验人员的辐射暴露实验区域1使用溢出盘，内衬一次性吸收材料2限制放射性核素的用量3在辐射区域、工作区域以及放射性废气物区设置辐射源的隔离防护装置4辐射容器用辐射标志进行标记5工作结束后，用辐射计测量工作区域、防护服和手的辐射情况6使用经适当保护的运输容器放射性废弃物区域1要经常从工作区域清除放射性废弃物2要正确记录放射性材料的使用和处理情况3要筛查超过剂量限度材料的剂量测定记录4要制定并经常性操练应急反应计划5应急反应中首先要帮助受伤人员6要彻底清洁受污染区域7如果可能，从安全办公室请求协助8书写并保存事故报告第五章生物安全柜级别类型排风方式循环空气比例%柜内气流窗口进风平均风速m/s保护对象Ⅰ级--可向室内排风--乱流≥0.4使用者、环境Ⅱ级A1型可向室内排风70单向流≥0.4使用者、受试样品和环境A2型可向室内排风70单向流≥0.5B1型不可向室内排风30单向流≥0.5B2型不可向室内排风——单向流≥0.5Ⅲ级——不可向室内排风0单向流或乱流无工作窗口，当一只手套筒取下时，手套口平均风速≥0.7主要是使用者和环境，有时兼顾受试样品第一节Ⅰ级生物安全柜设计最简单，最早得到认可的生物安全柜，目前仍然被广泛应用；一般被用做特殊的密封设备或可能产生气溶胶的操作过程。虽然Ⅰ级生物安全柜能够为人员和环境提供保护，也可以用于操作放射性核素和挥发性有毒化学品，但是因为空气直接从正面的开口处吹到工作台面上，因此不能对操作对象提供切实可靠的保护。第二节Ⅱ级生物安全柜Ⅱ级生物安全柜不但提供个体保护，而且能保护工作台面的物品不受污染；有四种不同类型—A1型，A2型，B1型，B2型不同于Ⅰ级生物安全柜，能让HEPA过滤的无菌空气流过台面可用与BSL2和BSL3的感染性物质，配备防护复还可以操作BSL4水平A1型在风机和HEPA之间是正压的，称为正压污染区；如果污染区发生泄露，污染性气溶胶会安全柜内逃逸，直接对实验室和操作着产生危害。A2型最广泛使用；原理与A1型相似气体完全排到室外，如果HEPA泄露，不会污染实验室，但是污染外部环境B1型可以用于以微量挥发性有毒化学品和痕量放射性核素为辅助剂的微生物实验B2型所有流入和下降的气体都通过HEPA过滤排到外面环境，在安全柜内没有再循环的气体，因此是Ⅱ级生物安全柜中最安全的。Ⅱ级生物安全柜—A型和B型比较生物安全柜类型Ⅱ级A型Ⅱ级B型是否存在正压污染区A1有，A2无无操作面活动窗结构开启固定型或垂直推拉型操作面开口高度/mm160-250操作区层流风速/m.s-1≥0.23循环风比例%70B1-30，B2-0排风方式A1室内，A2室外室外

操作对象

病原体

危险度1级-3级

危险度1级-3级重组遗传基因

BSL1-BSL3

BSL1-BSL3化学至癌物

A1不可，A2可以（低浓度时）

可以（低浓度时）放射性物质

A1不可，A2可以（低浓度时）

可以（低浓度时）挥发性溶剂

A1不可，A2可以（低浓度时）

可以第三节Ⅲ级生物安全柜用于操作危险等级为4级的对象，可提供高水平的个体保护；所有柜体为金属焊接，并且采用完全封闭设计；实验操作完全通过前窗的手套进行；尤其适用于致命因子的操作用于操作危险等级为4级的对象，可提供高水平的个体保护；所有柜体为金属焊接，并且采用完全封闭设计；实验操作完全通过前窗的手套进行；尤其适用于致命因子的操作第四节生物安全柜的使用1.缓慢移动原则为了避免影响正常的气流状态，柜内操作动作应该尽量平缓；2.物品平行摆放原则避免回风过程中交叉污染，呈一字型排开；避免堵塞后部回风隔栅；将所需物品放入，避免频繁进出安全柜，影响气流稳定性；3.避免震动原则尽量避免震动仪器（如离心机、震荡仪）的使用，会使HEPA脱落影响内部洁净度；4.不同样品柜内移动原则柜内两种及以上物品需要移动时，一定要遵循低污染性物品向高污染性物品移动的原则。第六章病原体及其生物安全水平第一节概述操作一种特定的病原体或者动物，选择恰当的生物安全水平取决于：病原体或病毒的毒力、致病性、生物稳定性、传播途径、传染性；实验室的性质或职能；设计病原体的操作步骤和方法；病原体的地方流行性；有效的疫苗和治疗方法的可用性。第二节细菌病原体炭疽杆菌实验室危害：1、可以存在于血液、伤口渗出物、脑脊液、胸水和痰液中2、完整或破损的皮肤直接或间接接触3、意外的胃肠道外接种，4、以及接触有传染性的气溶胶都是对实验室人员的主要危害。预防措施：除了经常做临床样本或培养的人员，不推荐所有实验室人员免疫疫苗；在动物疾病诊断实验室中，建议对所有操作病原体的人员，所有在培养处理间工作的人员，以及所有对受感染的动物进行操作的人员进行免疫！百日咳博德特氏菌百日咳博德特氏菌是引起百日咳的致病菌，全世界分部，是一种典型的儿童疾病，但也已日益变得与成人疾病有关。实验室危害：病原体主要存在于呼吸道分泌物中，但未见在血液和组织中存在；传播方式通过呼吸途径；最大的潜在危害是在操作该病原体的培养物或浓缩悬浮液时产生的气溶胶。推荐的预防措施：采用BSL-2级水平的操作以及ABSL-2的动物培养；采用生物安全柜、安全离心杯和特殊的安全离心机；大规模操作建议使用BSL-3操作技术布氏杆菌属最常见的实验室相关性细菌感染病！！包括牛布氏杆菌、犬布氏杆菌、羊布氏杆菌和猪布氏杆菌对抗原的过敏性也是一种危害个别病例是因为接触实验室感染或自然感染的动物或其他组织引起的实验室危害:病原体存在于血液、脑脊液和精液，有时也可以存在于尿液；实验室感染主要由于皮肤接触大量生长的布氏杆菌或者吸入了细菌培养物以及传染性的临床样本而感染；经口吸入，意外的胃肠道外接种，溅入眼、鼻和口中也曾导致感染。推荐的预防措施：对于操作含有或可能含有致病性布氏杆菌的人类或动物的临床样本工作，采用BSL-2级水平的操作技术对于致病的布氏杆菌培养物的所有操作或者相关动物实验，建议分别采用BSL-3级水平和动物ABSL-3级水平的操作技术、防扩散设备和设施破伤风杆菌实验室危害：意外的胃肠道外接种和摄入破伤风毒素是实验室人员的主要危害推荐的预防措施：采用BSL-2级水平的操作技术、方扩散设备和设施；实验室感染较低，但每隔10年注射一次白喉-破伤风毒素；结核分枝杆菌实验室危害：操作结核分枝杆菌的实验室人员结核病的发病率比其它人群高3倍；自然或实验室感染的非人灵长类动物是一个重要的传染源；实验室的豚鼠或小鼠不能通过咳嗽传染，但是动物垃圾会成为感染性气溶胶的来源。结核菌可存在于痰液、胃灌洗液、脑脊液、尿液和许多损伤的组织；暴露在感染性气溶胶中是最主要的危害！预防措施：不产生气溶胶的样本，采用BSL-2级水平产生气溶胶的实验，必须在一级或二级生物安全柜使用实验性或自然感染的非人灵长类动物进行研究，采用ABSL-3级水平豚鼠或小鼠的动物研究可以采用ABSL-2水平对以前皮肤试验对阴性的实验室人员用纯蛋白衍化物再进行皮肤试验，可作为疾病监督的秩序；卡介苗可以作为疫苗使用，但在美国未被用于实验室人员。沙门氏菌文献证明，沙门氏菌可造成实验人员感染；主要的带菌宿主包括多种家养和野生动物，例如鸟类、哺乳类和爬行类动物等，它们都是实验室人员的传染源实验室危害:可以存在于粪便、血液、尿液以及食物、饲料和环境中摄入或胃肠道外接种是主要的实验室危害自然或实验感染动物对实验室人员、动物饲养员以及其他动物有潜在的传染预防措施:病原体的临床样本及培养物的工作，采用BSL-2级水平；操作实验性或自然感染动物的工作，采用ABSL-2级水平第三节真菌病原体皮炎芽生菌有报道称，在实验室有胃肠道感染的病例;在吸入分生孢子后，发生过肺部感染,其中一例发展成肺炎，一例发生骨质溶解病变;对于操作标本和样本，建议采用BSL-2和ABSL-2级水平的操作技术和设施.粗球孢子菌实验室危害：据报道，有一研究机构出现了31例相关性感染，有28例（90%）出现了临床症状，而通常超过一半的感染应该是无症状的；节分生孢子极小，易扩散，并滞留在肺深部；厚壁球孢子则体积大而危险性降低；吸入来自环境或者临床样本或霉菌型培养物的节分生孢子是一种严重的实验室危害；预防措施：对于操作和处理临床样本，采用BSL-2级水平的操作技术和设施对于实验性动物，采用ABSL-2级水平对于产孢子性培养物，采用BSL-3级水平的操作荚膜组织胞浆菌实验室危害：产孢子的霉菌型培养物和取自该病流行区土壤样本中的真菌具有感染性；存在于受感染动物的组织或体液中的酵母型真菌，在经胃肠道外接种后，也可引起局部感染预防措施：对于操作和处理临床样本，采用BSL-2和ABSL-2级水平的操作技术和设施；对于增殖和操作已经鉴定为荚膜组织胞浆菌的培养物以及感染性的分生孢子样本，采用BSL-3级水平的操作第四节寄生虫人类血液和组织寄生原虫实验室危害：疟原虫、锥虫、利什曼原虫的实验室感染都有相关报道。主要通过摄入、经伤口和微小破损侵入、意外接种和中间媒介传播；操作利什曼原虫、克氏锥虫或含有血鞭毛虫的组织匀浆或血液时，含有这种生物的气溶胶或飞沫中是潜在的危害；免疫功能抑制的个体避免操作。预防措施：对于传染期的工作，采取BSL-2级水平；防止与受感染的中间媒介的接触；操作含有血鞭毛虫的组织匀浆或血液，采取基本的防扩散设施（如生物安全柜）或个人保护设置（如面罩）有皮肤直接接触处于传染期的寄生虫，戴上手套。人类寄生吸虫实验室危害：处于传染期的血吸虫（尾蚴）和片形吸虫（囊蚴），可分别存在于实验室用于养中间宿主蜗牛的水池和水生植物中，接触会感染；解剖或压碎，也可导致皮肤和黏膜暴露在含有尾蚴的飞沫中。预防措施:实验室操作，应该采取BSL-2水平；直接接触污染的水或植物，应该戴上手套；当在可能污染的水源周围工作时，应该穿上长袖或其他保护性工作服.第五节朊病毒朊病毒是缺乏核酸的蛋白质感染颗粒，主要由一种正常的细胞蛋白的异常异构型组成，其蛋白被标明为PrPSc；在哺乳类动物中的朊病毒可引起羊瘙痒病以及其他有关的人类和动物的神经变性疾病。朊病毒的生物安全水平：人类的朊病毒以及那些在类人猿和猴子中繁殖的朊病毒要在BSL-2级和BSL-3级水平操作；其他动物的朊病毒需在BSL-2中进行。人类朊病毒是不传染或不通过接触传染的，但是某些情况下具有传染性：例如：1、新几内亚，食人习俗引起库鲁病；2、服用被朊病毒污染的生长激素引起医疗性的CJD；；3、移植被朊病毒污染的硬脑膜。第六节病毒乙型肝炎最常发生的实验室相关性感染之一，相关工作的实验室人员属于高危人群。实验室危害：乙肝感染者的血液及其血液制品、尿液、精液、脑脊液及唾液中均可能含有乙型肝炎病毒；实验中最常见的感染方式是病毒通过注射、黏膜接触及皮肤伤口进入人体。预防措施：处理传染性或可疑的体液和组织标本时，实验设施及操作应符合BSL-2级标准；如果出现病毒的液体飞溅物或气溶胶时，应遵循BSL-3级；研究相关性感染的灵长类动物，应该符合ABSL-2级；推荐实验室工作人员接种乙肝疫苗。SARS冠状病毒严重急性呼吸综合症（SARS），其传染途径主要通过近距离飞沫、接触患者呼吸道分泌物及密切接触传播。人群普遍易感，医护人员是此病的高危人群，死亡率约为6.5%。样品采集：所有样品采集应贴上标签、包括编号和采集日期；临床资料和接触史应与实验室检查结合，以便更好地了解病毒的释放和传播周期。样品转运：1、标本必须经过三层包装2、液体容量不能超过500ml,必须防漏3、固体容量不能超过500g,必须防散落预防措施：1、血液和尿液样品、未经处理的样品应该在BSL-2以上的实验室中进行；2、任何有可能产生气溶胶的过程应该在生物安全柜中进行；3、SARS的细胞培养以及标本培养的初步操作应该在BSL-3的实验室中进行；4、SARS标本接种动物以获得病原体，为鉴定假定的SARS病原体的任何动物接种第七章其他安全设备注射针头如何消除或减少伤害不要重新给针头戴护套或截断枕头;使用针头锁定型注射器以避免枕头和注射器的分离;使用针头和注射器为一体的一次性注射器注射液抽液时要尽可能减少形成气泡避免用注射器来混合感染性液体,避免用力过大竖直向上将注射器中过量的液体和气泡排到经适当消毒剂浸湿的脱脂棉或有棉花的小瓶操作感染性物质时应该再生物安全柜进行在对动物进行接种时要进行固定使用后要进行高压灭菌并确保进行了妥善处理!!离心机防止气溶胶喷溅，使用可封闭的容器；每个转子均有运转时间记录，并应制定预防性维修保养措施以减少发生机械故障的危险;安装转子应该正确，做到平衡.水浴锅确保定期清洁和消毒,避免微生物的生长!不用叠氮化钠作抑菌剂,因为叠氮化钠与有些金属形成爆炸性混合物.超声处理器容易产生气溶胶，损伤听力，清洁剂外溅导致化学伤害。因此要:在密封单元中打开仪器，确保隔离以免受次谐波影响，戴上手套避免清洁剂的伤害。匀浆器在打开匀浆器以前先等候30min以使气溶胶沉积,冷却以使气溶胶凝聚;使用手动研磨器,管外用可吸收材料包裹;使用专门设计可以避免在转子轴承和O型垫圈处泄漏的仪器型号。干燥器烘箱人离实验室，烘箱等干燥器必须关闭，避免温度过高而发生火灾或者爆炸事故。仪器设备相关事故的原因分类事故事故原因减少或消除灾害设计或建造有缺陷培养箱有电火花、电休克没有温度过高断路装置没用提供可靠的接地符合国家标准使用不当离心事故转轴上的离心桶没有平衡培训和监督工作人员厌氧培养箱不正确使用气体不正确配用家用保温瓶爆炸液氮运输不当使用专门设计的仪器设备家用型冰箱爆炸危险性化学品没有储存在防火/防暴容器中低熔点溶剂和提取物仅储存在具有火花/爆炸保护作用的冰箱或安全柜中缺乏正确的维护火焰光度计产生的火焰维护过程中各组件的重新组装不正确培训和监督工作人员一些实验室常用的个人防护装置实验服、隔离衣、塑料围裙：防水、罩在日常服装外，避免污染衣服；不得穿离实验室区域，应在实验室所在机构进行洗烫工作。护目镜、安全眼睛和面罩：避免实验物品飞溅对眼睛和面部造成的危害；实验室佩戴隐性眼镜必须戴上护目镜保护不得戴离实验室区域呼吸防护装置：为了达到理想的防护效果，应对呼吸器作个体适合性测试；应按照作业指导书及培训的要求使用不得戴离实验室区域手套：进行实验时，手可能会被污染，而且容易受“锐器”所伤！！选择手套时，应符合舒服、合适、灵活、握牢、耐磨、耐扎和耐撕的要求。一般性工作，以及处理感染性物质、血液和体液时，广泛使用一次性乳胶、乙烯树脂等材料的手术用手套；尸体解剖等可能接触尖锐器械的情况下，应该戴不绣钢网孔手套使用过的一次性手套应与实验室的感染性废弃物一起丢弃，手套不得戴离实验室区域！！！鞋：鞋应舒适，鞋底防滑；推荐使用皮制或合成材料的不渗液体的鞋在BSL-3和BSL-4实验室要求使用专用鞋，如防静电工作鞋等第八章重组DNA技术和生物安全下列情况需要较高的生物安全水平：1、来源于病原生物体的DNA序列的表达可能增加GMO的毒性2、插入的DNA序列性质不确定，例如在制备病原微生物基因组DNA库的过程中3、基因产物具有潜在的药理学活性4、毒素的基因产物编码生物表达载体由宿主细胞和载体组成，必须有效、安全地使用；工程大肠杆菌是非致病菌，不能在健康人和动物的消化道中持久克隆;当克隆的DNA来自病原微生物时，特别是克隆编码毒素一类的蛋白时，需要较高的生物安全说水平。病毒载体可以用于将基因有效地转移到其他细胞；但是这类病毒载体的贮存液中可能污染了可复制病毒而存在生物安全。插入基因所直接引起的危害：1、毒素2、细胞因子3、激素4、基因表达调节剂5、毒力因子或增强子6、致瘤基因序列7、抗生素耐药性8、变态反应原与受体/宿主有关的危害：1、宿主的易感性2、宿主菌株的致病性，包括毒力、感染性和毒素产物3、宿主范围的变化4、接受免疫状况5、暴露后果携带外源性遗传信息的动物（转基因动物）应当在适合外源性基因产物特性的防护水平下进行操作！！表达了能够耐受除草剂或抵抗昆虫能力的转基因植物还饱受争议；争议焦点主要是这类植物作为食物的安全性。对于转基因食品，可以通过危害评估确定它们转基因产品所需的生物安全水平，并进行相关要求操作。样品容器：样品容器可以是玻璃的，但最好使用塑料制品；正确地使用盖子或塞子盖好后应无泄漏在容器外部不能有残留物容器上应当正确地粘贴标签以便于识别样品的要求或说明书得放防水的袋子里样品在设施内的传递为了避免意外泄露或溢出,应将容器固定在架子上使其直立;或者将其放置于盒子等二级容器;如果是密封的最好有个垫圈,定期的清除架子或者是二级容器的污染样品接收:需要接收大量样品的实验室应当安排专门的房间