广东省中药破壁饮片质量标准研究规范标准

./XX省中药破壁饮片质量标准研究规范〔试行XX省药品检验所二零一零年十月目录前言21范围32引用标准33术语与定义44实验室条件及人员的要求45样品及对照物质的要求46质量标准起草的指导原则与技术要求56.1质量标准起草的指导原则56.2质量标准起草的技术要求66.3质量标准正文的编写细则116.4质量标准起草说明编写细则117质量标准复核的指导原则与技术要求117.1质量标准复核的指导原则117.2质量标准复核的技术要求127.3质量标准复核意见的撰写细则128标准检验的指导原则与技术要求138.1标准检验的指导原则138.2标准检验的技术要求138.3检验原始记录及报告149示范性研究品种149.1西洋参破壁饮片15附录中药破壁饮片通则39前言在中医药理论的指导下,中药饮片历经时代的变迁,发生了巨大的改革。为适应中药现代化的需要,一种新型饮片——中药破壁饮片应运而生,它是在现代超微粉碎技术基础上开发出的一种新型中药饮片,既保留了传统饮片的成分属性,也具备现代中药的用药形式,是一种新型高效的现代饮片。为规范中药破壁饮片的来源、制法,以及质量标准的起草、复核、检验全过程,确保人民用药安全有效,现拟定《中药破壁饮片质量标准研究规范》,作为中药破壁饮片在研究、复核、检验过程中应遵循的准则。本规范在十个破壁饮片品种的研究基础上,根据品种特点并结合相关法规、技术文件编写而成,包括质量标准起草的指导原则与技术要求、质量标准复核的指导原则与技术要求以及标准检验的指导原则与技术要求,是XX省中药破壁饮片的研发单位和检验机构必须遵循的技术规范。XX省中药破壁饮片质量标准研究规范〔试行范围本规范主要包括XX省中药破壁饮片质量标准起草、质量标准复核、标准检验的指导原则与技术要求。本规范适用于XX省内从事中药破壁饮片质量标准起草与复核、检验的试点研发生产企业、科研院所、药检机构等。本规范是XX省中药破壁饮片品种注册的技术审评依据之一,同时也为该类品种的注册复核检验、标准检验提供技术指引。本规范不包含实验室在质量标准研究过程应符合的法规和安全要求。本规范的注是对正文的说明、举例和指导。引用标准本规范引用了以下标准：《中国药典》、《43种进口药材标准》、各省地方药材标准及炮制规范。《国家药品标准工作手册》〔第三版国家药典会印发有关《中国药典》中药质量标准研究制定技术要求的函<国药典中发[2008]349号>,附件包括"中药质量标准正文各论编写细则"、"中药质量标准起草说明编写细则"、"中药质量标准起草与复核工作规范"、"中药质量标准复核技术要求"、"中药质量标准研究制定技术要求"、"中药饮片注册管理办法"省食品药品监督管理局印发的"XX省中药材标准起草指导原则和技术要求"、"XX省中药材标准复核指导原则和技术要求"、"XX省中药饮片炮制规范起草指导原则和技术要求"、"XX省中药饮片炮制规范复核指导原则和技术要求"等。中国药品生物制品检定所编制的《中国药品检验标准操作规范》〔20XX版XX省药品检验所《质量手册》〔第五版GDIDC/Q5A-200注：未注明版本号或日期的参考文献系指最新版本术语和定义本规范主要使用相关的法律法规、中国药典给出的相关术语和定义,并根据本规范的要求予以补充说明。中药破壁饮片是将符合《中国药典》要求并具有细胞结构的植物类中药饮片,经现代粉碎技术加工至D90﹤45µm〔300目以上的粉体,加水或不同浓度的乙醇粘合成型,制成30~100目的原饮片全成分的均匀干燥颗粒状饮片。药品质量标准,是指为保证药品质量而对各种检查项目、指标、限度、范围等所做的规定。药品质量标准是药品的纯度、成分含量、组分、生物有效性、疗效、毒副作用、微生物、物理化学性质以及杂质的综合表现。国家药品标准,是指国家为保证药品质量所制定的质量指标、检验方法以及生产工艺等的技术要求,包括国家食品药品监督管理局颁布的《中国药典》、药品注册标准和其他药品标准。质量标准起草,是指通过试验研究,建立检测项目,并通过一系列的方法学验证体现其科学性与合理性,初步拟出质量标准草案。质量标准复核,是指药品检验所对申报的药品标准中检验方法的可行性、科学性、设定的项目和指标能否控制药品质量等进行的实验室检验和审核工作。标准检验,是指按照法定的药品质量标准对样品进行检验,强调检验过程的规范化与标准化,以保证实验数据与结论报告的正确、可靠。实验室条件及人员的要求承担中药破壁饮片质量标准起草、复核、标准检验的单位应配备相应的实验室,具有相应资格的技术人员,具备中药研究、检验常用仪器和设备并已通过计量认证,能确保实验用试剂、试药及对照物质符合相关规定。承担质量标准研究的人员应取得相应技术职称,具有相关专业知识背景、多年的中药检验、研究工作经历,并有一定的标准研究和起草经验。样品及对照物质的要求供研究用样品应具有代表性,覆盖面要广,一般至少应收集10批以上样品供研究用,样品量除满足起草研究、留样观察外,还应有不少于3倍检验量的样品供复核用。标准检验用样品应有3倍检验量。样品保存应符合各品种项下的贮藏要求。质量标准制定应使用国家法定部门认可的对照物质〔包括对照品和对照药材。若使用的对照物质是工作对照,应按照相关的要求提供鉴定研究资料。质量标准起草的指导原则与技术要求6.1质量标准起草的指导原则6.1.1符合中药饮片的法定属性中药破壁饮片是运用现代超微粉碎技术将传统饮片加工而成的一种以粉末形式入药的中药饮片。中药破壁饮片为全成分入药,药用物质基础不变,符合中药饮片的内涵,破壁后饮片的性味与归经、功能与主治等应保持与传统饮片的性质相一致。投料饮片应符合中药饮片法定标准。6.1.2符合中药饮片粉末入药的原则经传统中药饮片微粉化深加工的中药破壁饮片,其原料应为适用于粉末入药的中药饮片,原则上动物、矿物和毒性药材不适合制成直接口服的中药破壁饮片。6.1.3符合中药饮片质量标准研究制定的原则中药破壁饮片研究水平定位应遵循现行版《中国药典》,充分体现"安全有效、技术先进、经济合理、不断完善"的原则,坚持质量第一。质量标准制定应遵循以下原则：a.根据质量考察与稳定性试验结果,合理设置检测项目,全面控制药品质量；b.各项检测方法应科学、可行〔方法学试验内容需全面、规范；c.各项检测限度应宽严适度,合理可行；d.格式、文字应规范。6.1.4符合生产工艺的过程控制中药破壁饮片的生产工艺关键参数应固定,保证破壁微粉的质量稳定。工艺过程一般只用水或不同浓度的乙醇作为粘合剂,工艺如涉及到特殊的设备应制定相应的控制检测项目；生产环境应符合洁净度要求,并对产品进行微生物限度检查。6.1.5符合中药破壁饮片通则的要求制成颗粒剂能够使中药破壁饮片质量更加稳定。根据中药破壁饮片的特点,应制定中药破壁饮片通则,使中药破壁饮片系列品种均符合该通则的要求,包括饮片品种的筛选、药用部位的分类、制法〔含关键工艺参数、粒径分布、未破壁细胞限度、粒度、用法与用量等。6.1.6符合质量安全可控、稳定均一的要求中药破壁饮片的质量是保证其中医临床疗效的基础,应设置对品种的安全可控、稳定均一有明显影响的项目,由于原饮片的外观形态改变,因此应强化专属和整体质量控制,并制定合理的限度。根据中药破壁饮片的特点,建立相应检测项目。6.2质量标准起草的技术要求6.2.1根据中药破壁饮片质量标准起草指导原则,结合中药破壁饮片品种的特点与通则要求,建立质量标准。中药破壁饮片质量标准内6.2.2检与国家药典会印发的"中药质量标准研究制定技术要求"一致。6.2.3药包括中文名称和汉语拼音。药材名称应采用《中国药典》现行版一部及部颁标准中药材的名称,经加工的成品名称按"***破壁饮片"进行命名,即"药材名＋破壁饮片"。6.2.4来包括原植物药材的科名、中文名、拉丁学名和药用部位按"药材的科名、中文名、拉丁学名和药用部位,经加工制成的破壁饮片"进行描述。6.2.5制简要描述制备工艺过程,应包括主要的操作步骤和所用的试剂、辅料,内容应符合中药破壁饮片通则。6.2.6性根据多批样品的实际情况,对品种的外观颜色、形态和气味进行客观、准确的描述。6.2.7鉴6.参考《中国药典》20XX版的研究情况,拟定专属性强、灵敏度高、重现性好的方法。鉴别方法应尽量与投料饮片质量标准的鉴别方法相一致,如有变动或采用其他更简便的薄层鉴别方法,应考察方法的耐用性,并在起草说明中予以阐述。6.由于破壁饮片与传统饮片在形态上有较大区别,建议鉴别采用两种不同的技术或方法进行定性确认,加强质量标准的可控性。6.投料含多来源植物的品种,其鉴别用对照药材必须明确来源,应考察不同来源对照药材的色谱图。若不同来源的对照药材图谱差异较大,则不适合采用该对照药材作鉴别对照,除非固定药材来源。6.显微鉴别首选现行版药典中已有规定的该饮片的显微特征,如果确有干扰,可选用其他显微特征或改用其他鉴别方法。a.标准所列的显微特征应易于检出,对镜检出现概率低于60%的〔制片5张,可检出规定特征的应不少于3张,或镜检难度大的,且已有该药材TLC鉴别的,可不作正文规定。对不易查见或无专属性的显微特征不要列入。b.对于多来源的药材饮片,建议采用共有的组织、细胞或内含物特征描述。c.药典药材粉末通常是细粉〔小于180μm,应注意显微鉴别项下的特征的大小与药材细度尽量相一致。内容系指破壁饮片在生产、贮藏过程中可能含有并需要控制的物质,包括安全性、有效性、均一性与纯度要求。应符合以下几点：a根据制剂品种特点设定检查项目；b方法设计合理；c项目按顺序排列；d限度依据样品考核结果并参考有关质控原则确定；e方法与限度的表达应规范6.2.8.2应重点关注安全性、稳定性检查项目的设置是否足够、项目的可行性、操作方法是否合理。例如：含油脂的种子类药材饮片应设立酸败度检测。6.2.8.3应根据生产过程中可能造成的污染情况、工艺要求、贮藏条件等建立检查项目,检查项目应能真实反映饮片质量,并确保安全与有效。6.2.8.4中药破壁饮片应按照《中药破壁饮片通则》规定的检查项目进行检查。6.2.8.5根据生产工艺的具体情况,设置粒度检查项，检测方法参照《中国药典》颗粒剂项下方法,根据多批样品测定结果制定限度,反映品种的均一性。6.2.8.6根据本品特点,设置粒径分布、未破壁细胞限度等检查项,检测方法参照《中药破壁饮片通则》,根据多批样品测定结果制定限度,控制工艺的稳定性。6.2.8.7其他检查项目的设置,应参照投料饮片标准,结合生产工艺情况拟定。如投料饮片标准设置农残检测项目，原则上破壁饮片应检测该项,并根据多批样品的实验情况制定限度,应不低于饮片标准。6.2.8.8微生物限度方法学验证按照《中国药典》现行版附录"微生物检查法应用指导原则"实施,同时应关注不同的制备工艺品种有不同的限度要求，有抗菌活性与无抗菌活性品种的需采用不同的样品处理方法。6.2.9浸出物系指用水或其他适宜的溶剂采用冷浸、热浸等方法对破壁饮片中可溶性物质进行测定。对难以进行含量测定或所测成分含量低于万分之一的品种,应建立浸出物测定。测定方法参照《中国药典》现行版一部附录浸出物测定的有关规定,结合用药习惯、药材质地及已知的化学成分类别等选定适宜的溶剂,测定其浸出物量以控制质量。应选择适当的溶剂进行测定,比较各种溶剂和浸出条件对浸出物的影响。根据样品实测数据,制定浸出物量限度。含量测定系指用化学、物理或生物的方法,对中药破壁饮片含有的有效成分、指标成分或类别成分进行测定,以评价其内在质量的项目和方法。如含量测定限度低于万分之一,应增加其他含量测定指标；如测定有困难,可考虑增加浸出物测定项,以增加标准的可控性。6.2.10.1测定成分的选定a.应首选有效或活性成分,如药材、饮片含有多种活性成分,应尽可能选择与中医用药功能与主治相关成分。结合生产工艺,尽量与饮片标准规定的测定成分相对应,以便更有效的控制质量。b.为了更全面控制质量，可以采用同一方法测定2个以上多成分含量,一般以总量计制订含量限度为宜。c.对于尚无法建立有效成分含量测定,或虽已建立含量测定、但所测定成分与功效相关性差或含量低的品种,而其有效成分类别又清楚的,可进行有效类别成分的测定,如总黄酮、总生物碱、总皂苷、总鞣质等的测定；含挥发油成分的,可测定挥发油含量。d.某些品种,除检测单一专属性成分外,还可测定其他类别成分。e.应选择测定饮片所含的原形成分,不宜选择测定水解成分。f.不宜采用无专属性的指标成分和微量成分〔含量低于万分之二的成分定量。含量测定方法含量测定方法很多,常用的如经典分析方法<容量法、重量法>、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱扫描法、气相色谱法、其他理化检测方法以及生物测定法等。6.2.10.3含量测定方法验证中药破壁饮片是中药饮片的深加工产品,两者物质基础一致。若本品采用的含量测定方法与《中国药典》现行版收载的对应饮片方法一致,拟定的方法可不做方法学验证,仅提供检测的结果与图谱等实验资料。若含量测定方法有改变,应进行分析方法验证,确证其可行性,验证方法按《中国药典》现行版一部附录XⅧA"中药质量分析方法验证指导原则"执行。验证内容有准确度<即回收率试验>、精密度、线性、范围、耐用性等。6含量限<幅>度的制定含量限<幅>度的制定，应根据投料饮片的实际情况并参考《中国药典》来制定。一般应根据不低于10批样品的测定数据,按其平均值的±20％作为限度的制定幅度,以干燥品来计算含量。含量限度规定的方式,有以下几种：a.所测定成分为有效成分时可只规定下限。b.凡含有两种以上的有效成分,而且该类成分属于相互转化的,可规定二种成分之和,如苦参："本品按干燥品计算,每袋含苦参碱<C15H24N2O>和氧化苦参碱<C15H24N2O2>的总量,不得少于1.2mgc.多植物来源的品种,可根据实际测定的情况,制订两个指标。6.2.11性味与归经按中医理论对中药破壁饮片性能的概括,应与投料饮片的法定标准一致。6.2.12功能与主治按中医理论和临床用药经验对中药破壁饮片所作的概括,作为临床用药指导。应与投料饮片的法定标准一致。6.2.13用法与用量除另有规定外,用法指冲泡服用；用量系指成人一日常用剂量,必要时可根据需要酌情增减。6.2.14注意系指用药注意事项,包括主要禁忌和不良反应等。中药破壁饮片注意项应与投料饮片一致。6.2.15贮藏贮藏条件根据稳定性考察情况制定。书写顺序按照包装要求-贮藏条件书写,如：密闭,于阴凉处保存；密封,冷处保存等。6.3质量标准正文编写细则参见国家药典会印发的"中药质量标准正文各论编写细则"。6.4质量标准起草说明的撰写细则参见国家药典会印发的"中药质量标准起草说明编写细则"。质量标准复核的指导原则与技术要求7.1质量标准复核的指导原则质量标准复核应遵循"科学、规范、安全、实用"的指导原则,同时还应突出地遵守以下原则。品名的规范申报品种的命名应以国家标准收载的饮片品名为依据,名称按"***破壁饮片"进行命名,即"药材名＋破壁饮片"。7.1.2复核样品的符合性原则单一品种的复核样品应包括三批以上不同批号的样品,多来源品种应尽可能包含不同基原的药材制成的破壁饮片。提供的技术资料应真实完整〔包括复核公文、质量标准草案、起草说明、复核用样品检验报告书、复核用样品及对照物质等并符合技术要求。7.1.3标准物质的溯源性原则"标准物质的溯源性"是指标准物质必须使用可溯源的有证物质。实验用的对照品、对照药材或基准物质应为中检所或国家标准物质中心提供的；如为申请人提供的对照品或对照药材,应要求起草单位提供相应的研究资料,包括第三方的鉴定或确证报告等,经复核单位核实后供复核实验使用。7.1.4实验方法的评价原则应重点对质量标准中设定项目和指标的科学性、安全性以及质量标准的可控性等方面作出评价,以确保破壁饮片的内在质量和使用的安全、有效。7.1.5文字格式的规复核单位应严格审查质量标准书写的文字格式规范情况,参照《中国药典》现行版及《国家药品标准工作手册》要求,结合复核检验的实验情况,提供复核后的质量标准正文。7.2质量标准复核的技术要求参见国家药典会印发的"中药质量标准复核技术要求"。7.3质量复核意见的撰写要求参见国家药典会印发的"中药质量标准复核技术要求"及"中药质量标准起草与复核工作规范"。撰写文字应规范,提供的信息应全面。7.3.1名称应有规范的名称及情况说明,包括中文名和汉语拼音。7.3.2来源应有清楚的植物基源及描述。7.3.3制法应说明关键的工艺步骤,文字描述应准确、规范。7.3.4性状应有符合实物的特征描述及情况的说明。7.3.5鉴别应有方法的专属性、可行性的说明,耐用性考察实验的结果与评价。对于不足之处应提出改进的意见和建议。7.3.6检查应对项目设定的科学性、可行性及操作方法的合理性进行说明。7.3.7定量测定项目应对采用方法的可行性、专属性,测定结果的重现性，限度设置的合理性等做出评价,对于不足之处应提出改进意见。7.3.8功能与主治、注意应与投料饮片的法定标准一致。7.3.9贮藏应与稳定性相适应,描述应规范。7.3.10标准物质应对非国家标准物质的对照药材、对照品的相关情况进行说明。7.3.11对标准全面的评价7.3.11.1对申报的药品标准质量标准的规范性、合理性作出全面的评价,特别是对含量测定方法学验证的项目、内容、方法等作出正确的、合理的评价。如综上,质量标准中检验方法基本可行；或者是,综上,建议继续提高完善质量标准,增加或改进XXX鉴别或含量测定项等。7.3.11.2最后给出申报的药品标准文字格式规范情况的意见。标准检验的指导原则与技术要求8.1标准检验的指导原则8.1.1标准化原则从事标准检验的实验室必须通过计量认证并能满足检验要求,对人员、仪器等规定应与国家认可委的"检验与检测实验室准则"的24个要素相对应,并能符合准则的要求。标准检验的检验依据为法定的标准,检验按照标准操作规程实施。8.1.2规范化原则标准检验的操作应按照中国药品生物制品检定所编制的《中国药品检验标准操作规范》的要求，撰写原始记录应详尽、规范、8.1.3准确性原则在标准化、规范化的前提下,检验结果应准确、可靠。8.1.4高效原则标准检验的方法经过方法学验证,其耐用性、可操作性得到保证,多批样品可同时检验,提高了工作效率。8.1.5低耗原则标准检验过程中,应充分考虑各检验项目之间的衔接,减少试剂、能源等耗品的消费,坚持节能、环保的原则。8.2标准检验的技术要求8.2.1质量标准各项检验技术要求参见中国药品生物制品检定所编制的《中国药品检验标准操作规范》〔20XX版）8.2.2检验的工作程序参见XX省药品检验所《质量手册》第五版的相关文件：第十九章技术要求总则、第二十二章检验和校准方法及方法的确认、第二十六章样品的处置、第二十七章检验和校准结果的质量保证、第二十八章结果报告。检验工作程序亦涉及以下程序：GDIDC/P·4.13－1记录的控制程序、GDIDC/P·5.9－2检验工作管理程序GDIDC/P·5.4－1检验方法确认程序GDIDC/P·5.4－1仪器设备自校准确认程序GDIDC/P·5.4－2测量不确定度的评定程序GDIDC/P·5.9－1检验结果质量控制程序GDIDC/P·5.9－2检验工作管理程序8.3检验原始记录及报告应符合XX省药品检验所《质量手册》第五版〔GDIDC/M·5.10-1中的有关检验记录的相关要求及XX省药检所检验报告书底稿用语书写规范〔试行。示范性研究品种西洋参破壁饮片XiyangshenPobiYinpian本品为五加科植物西洋参PanaxquinquefoliumL.的干燥根经加工制成的破壁饮片。[制法]取西洋参,粉碎成细粉；将细粉进行超微粉碎得破壁粉体,混匀,加入适宜浓度的乙醇,制粒,干燥,即得。[性状]本品为黄色至黄褐色的颗粒；气微而特异,味微苦、甘。[鉴别]〔1取本品,置显微镜下观察：可见不规则的小颗粒状物充满视野,呈淡黄色,网纹导管碎片及木栓细胞碎片散在。〔2取本品0.5g,加入甲醇25ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。取西洋参对照药材0.5g,同法制成对照药材溶液。另取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rg1对照品及拟人参皂苷F11对照品,加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液。照薄层色谱法〔《中国药典》2010版附录ⅥB试验,吸取上述三种溶液各2μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷–甲醇–水〔13∶7∶210℃以下放置分层的下层溶液为展开剂,展开,取出，晾干,喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照药材和对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点；置紫外光灯〔365nm下检视,显相同颜色的荧光斑点。[检查]应符合中药破壁饮片通则项下有关各项规定〔附录。水分不得过7.0%。未破壁细胞限度在100倍显微镜下检视,大于100µm且完整的细胞的颗粒数目不过100个。重金属及有害元素照铅、镉、砷、汞、铜测定法〔《中国药典》2010版一部附录用ⅪD电感耦合等离子体质谱法测定,铅不得过百万分之五；镉不得过千万分之三；砷不得过百万分之二；汞不得过千万分之二；铜不得过百万分之二十。微生物限度照微生物限度检查法〔《中国药典》2010版一部附录XIIIC检查,应符合规定。供试液制备：取样品10g,加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,45℃水浴溶解,摇匀,制成1：10供试液。细菌计数检查：取1：10供试液1ml均匀分至2个平皿〔即0.5ml/皿,用培养基稀释法检查；1：100和1：1000为1ml/皿。霉菌和酵母菌计数检查：取1：10供试液,按平皿法检查〔即1ml/皿。控制菌：大肠埃希菌检查：取1：10供试液10ml,加入100ml胆盐乳糖增菌培养基中,按常规法,依法检查。大肠菌群检查：取1：10供试液1ml,加入不少于15ml乳糖胆盐发酵培养基中,按常规法,依法检查。[浸出物]照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法〔《中国药典》2010版附录=10\*ROMANXA测定,用70%乙醇作溶剂,不得少于30.0%。[特征图谱]照高效液相色谱法〔《中国药典》2010版一部附录VID测定。色谱条件以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂〔柱长为25cm,内径为4.6mm,粒径为5μm；以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；流速每分钟为0.5ml；检测波长为203nm；柱温为30℃。时间〔分钟流动相A〔%流动相B〔%0～817838～2217→4083→60参照物溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品和人参皂苷Rb1对照品适量,分别加50%甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.1mg、人参皂苷Re0.4mg和人参皂苷Rb11mg的溶液,即得。供试品溶液的制备取本品粉末〔过三号筛约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水饱和的正丁醇50ml,称定重量,置水浴中加热回流提取1.5小时,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中,蒸干,残渣加50%甲醇适量使溶解,转移至10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。测定法精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5µl,注入超高效液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。特征图谱中,应有7个特征峰,其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同。对照特征图谱峰1：人参皂苷Rg1峰2：人参皂苷Re峰3：人参皂苷Rb1特征图谱峰1：人参皂苷Rg1峰2：人参皂苷Re峰3：人参皂苷Rb1[含量测定]照高效液相色谱法〔《中国药典》2010版一部附录=6\*ROMANVID测定。色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈为流动相A,以0.1%磷酸溶液为流动相B,按下表中的规定进行洗脱；检测波长为203nm。理论板数按人参皂苷Rb1计算应不低于5000。时间〔分钟流动相A〔%流动相B〔%0～2519→2081→8025～6020→4080→6060～9040→5560→4590～10055→6045→40对照品溶液的制备取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品适量,精密称定,加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.1mg、人参皂苷Re0.4mg、人参皂苷Rb11mg的溶液,即得。供试品溶液的制备取本品粉末〔过三号筛约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水饱和正丁醇50ml,称定重量,置水浴中加热回流提取1.5小时,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中,蒸干,残渣加50%甲醇使溶解,转移至10ml量瓶中,再加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10µl,注入液相色谱仪,测定,即得。本品含人参皂苷Rg1〔C42H72O14、人参皂苷Re〔C48H82O18、人参皂苷Rb1〔C54H92O23的总量不得少于2.0%。[性味与归经]甘、微苦,凉。归心、肺、肾经。[功能与主治]补气养阴,清热生津。用于气虚阴亏,虚热烦倦,咳喘痰血,内热消渴,口燥咽干。[用法与用量]冲泡服用。日用量2～4g,一日可服2～3次；或遵医嘱。[注意]不宜与藜芦同用。起草说明1、来源本品为五加科植物西洋参PanaxquinquefoliumL.的干燥根,经加工并超微粉碎技术制成破壁粉后再制粒而成的颗粒。除制粒时用到少量适宜浓度的乙醇外,未添加其他辅料。西洋参药材2、制法根据实际工艺过程描述。3、性状根据三批样品的形态、色泽、气、味考察,暂定本品的性状为"黄色至棕色的颗粒；气微而特异,味微苦、甘"。附三批样品性状图〔见图1。图1三批样品性状图4、鉴别根据本品的特点,参照中国药典相关内容,制定了粉末显微鉴别方法和薄层色谱鉴别方法。4.1显微鉴别根据三批样品的显微特征进行描述,详见正文,各显微特征分述如下<显微镜：OLYMPUSBX41>：4.1.1整体特征为不规则的小颗粒状物充满视野,呈淡黄色,〔见图2。可见木栓细胞碎片散在,木栓细胞常多层重叠,表面观呈长方形〔见图3200902012009020220090203图3西洋参木栓细胞特征图4.2薄层鉴别参考《中国药典》20XX版一部西洋参的薄层鉴别项以及《中国药典中药材薄层色谱彩色图集》人参的内容并做相应修改而制定了本方法。十批样品的薄层色谱图见图4：123456789101112131412345678910111213144.2.1实验记录供试品溶液制备：取本品〔批号分别为：20090201、20090202、200902030.5g,加入甲醇25ml,超声处理30分钟,滤过,滤液蒸干,残渣加甲醇2ml使溶解,作为供试品溶液。对照药材溶液制备：取西洋参对照药材〔中检所,批号：120997-2006080.5g,同供试品溶液制备法制成对照药材溶液。对照品溶液制备：取人参皂苷Rb1〔批号：110704-200420、Re〔批号：110754-200320、Rg1〔批号：110703-200726对照品及拟人参皂苷F11〔批号：110841-200404薄层板：Merck硅胶预制板。点样：各2μl。展开剂：三氯甲烷-甲醇-水〔13∶7∶210℃以下放置的下层溶液。展距：15cm显色及检视：喷以10%硫酸乙醇溶液,在105℃加热至斑点显色清晰,分别置日光及紫外光灯〔365nm下检视。结果：供试品色谱中,在与对照药材及对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点和荧光斑点〔见图5。图5.西洋参破壁饮片薄层鉴别色谱图1.供试品<200902012.供试品<200902023.供试品<200902034.西洋参对照药材5.人参皂苷Rb1、Re、Rg1及拟人参皂苷F11对照品混合溶液4.2.2耐用性考察4.2.2.1不同薄层板的比较选取自制硅胶G板与Merck硅胶预制薄层板,分别按拟定的试验方法试验。结果表明,自制板色谱中人参皂苷Rg1和拟人参皂苷F11分离度不能达到鉴别要求,Merck硅胶预制薄层板可达到分离效果,且斑点相对集中,效果佳,〔见图6。Ｔ：25Ｔ：25℃RH：32%1234512图6.不同薄层板比较〔上图为预制版,下图为自制板1.供试品<200902012.供试品<200902023.供试品<200902034.西洋参对照药材5.人参皂苷Rb1、Re、Rg1及拟人参皂苷皂苷F11对照品混合溶液4.2.2.2不同温度的比较取点样后的薄层板,分别在3℃和22℃的温度环境下进行展开。结果表明该方法对不同温度的适应性较好,〔见图7。图7.不同温度展开比较1.供试品<200902012.供试品<200902023.供试品<200902034.西洋参对照药材5.人参皂苷Rb1、Re、Rg1及拟人参皂苷F11对照品混合溶液4.2.2.3不同湿度的比较取点样后的薄层板,分别在32%和88%的湿度中展开。结果表明该方法对低湿环境的适应性较好,〔见图8。图8.不同湿度展开比较1.供试品<200902012.供试品<200902023.供试品<200902034.西洋参对照药材5.人参皂苷Rb1、Re、Rg1及拟人参皂苷F11对照品混合溶液经上述方法学验证试验,结果表明薄层板方面,自制板达不到分离效果，Merck预制板可达到分离效果,且分离效果好、斑点集中；不同温度湿度变化可导致色谱效果略有不同,基本均能达到鉴别需要。验证及复核实验能够较好重现,因此本方法耐用性良好。4.3红外光谱鉴别本研究对三批样品进行红外光谱测定,并利用对比软件做相关比较,以其中一次测定结果为参比,相关系数为0.9986～1.0000。由于本方法对药材专属性不强,故不列入正文。具体说明如下：4.3.1仪器设备、测试条件及应用软件仪器设备：采用PE公司的Spectrum100红外分光光度计测试条件：测定范围4000-450cm-1,扫描信号累加2次,分辨率4cm-1应用软件：采用PE公司的定性分析软件-对比〔Compare软件,根据数学上的相关系数比较两个红外光谱之间〔或一个光谱和一系列光谱之间的相似程度。4.3.2样品制备取本品约2mg,置玛瑙研钵中,加入溴化钾粉末约200mg研匀,压片,置红外光谱仪中测定,即得。4.3.3测定结果〔见表1、图9表1红外光谱相似度比较结果批号相关系数20090101-11.000020090101-20.999920090101-30.999920090102-10.999720090102-20.999320090102-30.997620090103-10.994220090103-20.993620090103-30.9923图9红参红外光谱测定图谱图9红外鉴别图谱5、检查本品为颗粒型的破壁饮片,与一般颗粒剂不同：由单味中药原粉制成,除乙醇外无添加其他辅料；制粒工艺不同于颗粒剂；因此,制定检查项目既要考虑药材的特性,又要考虑到颗粒的特性,针对本品的特色制定适宜的项目及其限度。5.1水分照水分测定法〔中国药典20XX版一部附录IXH第一法测定。实测供试品十批,平均值5.4%〔见表2。以平均值的120%作为限度值,暂定本品水分限度为7.0%。表2.十批样品水分值批号水分〔%平均值〔%200902038.05.4200902045.1200902055.5200902065.2200902075.2200902085.0200902095.1200902104.8200902115.5200902124.65.2粒度为考察本品粒度的均一性,制定本方法。照粒度测定法〔《中国药典》一部附录ⅪB第二法,双筛分法采用一号筛和五号筛测定,测定结果见表3。根据十批样品的测定结果,暂定本品粒度限度为不得过15%。表3十批样品粒度值批号粒度平均值2009030411%11.7%2009030511%2009030612%2009030712%2009030813%2009030911%2009031011%2009031111%2009031212%2009031313%5.3粒径分布破壁饮片的粒径小而均匀是本品的特点之一,采用LS-POP<6>型激光粒度分析仪〔XX欧美克科技有限公司测定本品的粒径分布,以D90值作为反映粒径分布均匀性的指标,破壁饮片的粒径分布D90不得过45.0μm。附十批样品测定结果〔表4及三批样品粒径分布图〔图10。表4.十批样品D90值批号粒径分布<μm>平均值<μm>2009030412.4514.922009030514.982009030613.202009030713.862009030815.822009030924.112009031017.472009031114.132009031213.012009031314.42批号：20090201批号：20090202批号：20090203图10三批样品粒径分布图5.4未破壁细胞限度根据十批样品的测定结果,暂定限度为在100倍显微镜下检视,大于100μm且完整的细胞的颗粒数目不得超过100个。〔因篇幅有限,表5列出三批样品测定结果,其余七批经试验均符合要求。表5未破壁细胞限度计数结果批号计数结果〔个平均〔个限度设定〔个西洋参200904015060100200904026820090403605.5装量差异〔装量本品分单剂量和多剂量多种包装规格,应分别测定装量差异或装量,其测定方法参照颗粒剂项下相关规定〔《中国药典》一部附录IC执行。5.6重金属及有害元素根据本品工艺特点,参考《中国药典》2010版一部西洋参项下,建立本方法,具体详述如下：仪器型号：ICP-MS：ThermoFisherXSeriesⅡC1552微波消解仪：MARS240/50天平：MettlerToledoAB265-S5.6.1对照品溶液的制备汞单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GBW086179041中国计量科学研究院铅单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GBW086198061中国计量科学研究院镉单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GBW086127063中国计量科学研究院铜单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GSBG62024-90<2902>批号：09110643国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院砷单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GSBG62028-90（330国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院金单元素标准溶液〔100μg/g〔GBW086500905国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院锗单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GSBG62073-90〔3201批号：09010633国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院铟单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GSBG62041-90〔4901批号：08090458国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院铋单元素标准溶液〔1000μg/ml〔GSBG62072-90〔8301批号：08081538国家钢铁材料测试中心钢铁研究总院5.6.2标准储备液的制备分别精密量取铅单元素标准溶液〔1000µg/ml、砷单元素标准溶液〔1000µg/ml、、镉元素标准溶液〔1000µg/ml与汞元素标准溶液〔1000µg/ml各0.1ml,铜单元素标准溶液〔1000µg/ml1ml至同一100ml量瓶中,用10%硝酸溶液稀释至刻度,即得。〔即：铅、砷、汞、镉〔1µg/ml,铜〔10µg/ml的混合标准储备液精密称取金单元素标准溶液1g至100ml容量瓶中,用水稀释至刻度,即得。〔1µg/ml5.6.3内标溶液的制备精密量取锗、铟、铋标准溶液100µl、10µl、10µl至500ml容量瓶中,用10%硝酸溶液稀释至刻度,即得。〔即：锗〔200ng/ml,铟、铋〔20ng/ml的混合内标溶液5.6.4标准曲线的制备精密量取五元素混合标准储备液2.5ml至50ml量瓶中,用10%硝酸溶液稀释至刻度,即得〔即：铅、砷、汞、镉〔50ng/ml,铜〔500ng/ml的混合标准溶液s2。精密量取五元素混合标准溶液s25ml至50ml量瓶中，用10%硝酸溶液稀释至刻度，即得5.6.5供试品溶液的制备取供试品0.5g,精密称定,置微波消解罐中,加硝酸5ml和30%过氧化氢2ml,密闭并消解。消解完全后，冷却至低于605.6.6回收溶液的制备取供试品0.25个,精密称定,置微波消解罐中,加入混合标准储备液[铅、砷、汞、镉〔1µg/ml,铜〔10µg/ml]0.1ml,制得回收溶液。5.6.7空白溶液的制备同5.6.5制得空白溶液5.6.8测定结果〔见表6表6重金属测定结果铅〔Pb镉〔Cd砷〔As汞〔Hg铜〔Cu20090304百万分之零点二千万分之二百万分之零点一千万分之零点一百万分之十二20090305百万分之零点二千万分之二百万分之零点一千万分之零点一百万分之十一20090306百万分之零点一千万分之二百万分之零点一千万分之零点一百万分之十一20090307百万分之零点二千万分之一百万分之零点一千万分之零点一百万分之四20090308百万分之零点二千万分之一百万分之零点一千万分之零点二百万分之七20090309百万分之零点一千万分之一百万分之零点一千万分之零点一百万分之九20090310百万分之零点一千万分之二百万分之零点一千万分之零点一百万分之十一20090311百万分之零点一千万分之二百万分之零点零五千万分之零点一百万分之十一20090312百万分之零点二千万分之一百万分之零点一千万分之零点一百万分之四20090313百万分之零点二千万分之一百万分之零点一千万分之零点二百万分之五5.7微生物限度按《中国药典》20XX版一部附录ⅩⅢC依法测定,具体方法验证详述如下：实验材料5.7.1.1验证用培养基营养琼脂培养基,玫瑰红钠琼脂培养基,营养肉汤培养基,改良马丁培养基,改良马丁琼脂培养基,胆盐乳糖培养基,乳糖胆盐发酵培养基,MUG培养基。以上培养基均购自中国药品生物制品检定所5.7.1.2验证用菌株：大肠埃希菌<Escherichiacoli><CMCC<B>44102>金黄色葡萄球菌<Staphylococcusaureus>[CMCC<B>26003]枯草芽孢杆菌<Bacillussubtilis><CMCC<B>63501)白色念珠菌<Candidaalbicans)(CMCC(F)98001)黑曲霉<Aspergillusniger><CMCC<F>98003>以上菌种的冻干菌均购自中国药品生物制品检定所5.7.2实验方法：5.7.2.1菌液制备1大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌取新鲜培养物接种至营养肉汤培养基中,置30~35℃培养18～24小时；培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～l00cfu的菌悬液。2白色念珠菌取新鲜培养物接种至改良马丁培养基中,置23~28℃培养24～48小时；培养物用0.9％无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数为50～l00cfu的菌悬液。3黑曲霉取新鲜培养物接种至改良马丁琼脂斜面培养基中,置23~28℃培养5~7天,加入3~5.7.2.2供试液的制备取样品10g,加入pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液至100ml,45℃水浴溶解，摇匀，制成1：10供试液。5.7.2.3验证试验1细菌、霉菌及酵母菌计数：平皿法在确定适合的检查方法后,验证试验至少应进行3次独立的平行试验,并分别计算各试验菌每次试验的回收率。〔1试验组：各取1：10供试液1ml、0.5ml、0.2ml,分别和试验菌液1ml注入同一平皿中,立即倾注相应琼脂培养,待凝,在相应温度倒置培养,每株试验菌各稀释级平行制备2个平皿,按平皿法测定其菌数。〔2菌液组:取试验菌液1ml注入平皿中，〔3）供试品对照组:各取1：10供试液1ml、0.5ml、0.2ml，按试验组操作，不加菌液，测定样品本底菌。培养、点计菌落数,计算各试验菌株的回收率。各菌株回收率〔%=〔试验组平均菌落数-供试品对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数,结果见表7。表7计数验证菌各菌株回收率〔%结果验证菌株大肠埃希菌金黄色葡萄球菌枯草芽胞杆菌白色念珠菌黑曲霉验证次数方法1231231231231231ml/皿7589997797906584899894867287840.5ml/皿759899961008473911000.2ml/皿8198999610090849092由表中可见,白色念珠菌和黑曲霉2个菌株的回收试验,用常规法1ml/皿供试液时,3次试验的回收率均可达到70%以上,表明本品霉菌及酵母菌计数可用常规平皿法。而大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽胞杆菌3个菌株的回收率试验,要稀释至0.5ml/皿,3次验证的回收率才能均达到70%以上,因此本品的细菌计数可用培养基稀释法检查。〔细菌计数用0.5ml/皿。2控制菌检查法的验证本品为口服中药材制剂。控制菌应检查大肠埃希菌和大肠菌群。〔1大肠埃希菌查法的验证取1︰10供试液10ml及1ml大肠埃希菌菌液加入100ml的BL增菌培养基中,按大肠埃希菌的检查法进行验证。〔2大肠菌群查法的验证取1︰10供试液1ml及1ml大肠埃希菌菌液加入不少于15ml的乳糖胆盐发酵培养基中,按大肠菌群的检查法进行验证。表8控制菌验证结果控制菌验证菌种名称菌种代数验证加菌数〔CFU方法结果结论大肠埃希菌大肠埃希菌387常规法〔100ml检出方法成立大肠菌群大肠埃希菌387常规法〔15ml检出方法成立由上表可见,均检出试验菌大肠埃希菌,表明本品可用常规法检查大肠埃希菌和大肠菌群。6浸出物照醇溶性浸出物测定法项下的热浸法〔《中国药典》20XX版一部附录XA测定,用70%乙醇作溶剂。实测样品3批,结果为39.7%～41.2%,平均值为40.6%〔见表9。参考《中国药典》20XX版一部,暂定本品浸出物不得少于30.0%。表9醇溶性浸出物<乙醇>序号批号取样〔g浸出物〔%平均值〔%1200902012.000741.3941.22.001441.112200902022.000541.2041.02.001540.793200902032.002039.1139.72.001440.34平均值〔%40.67特征图谱照高效液相色谱法〔《中国药典》2010版一部附录VID测定。色谱条件色谱柱：AcquityBEHC18<2.1mm×150mm,1.7μm>；以乙腈为流动相A,以水为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为0.5ml/min；检测波长为203nm；柱温为30℃。时间〔分钟流动相A〔%流动相B〔%0～817838～2217→4083→60参照物溶液的制备取人参皂苷Rg供试品溶液的制备取本品粉末〔过三号筛约1g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入水饱和的正丁醇50ml,称定重量,置水浴中加热回流提取1.5小时,放冷,再称定重量,用水饱和正丁醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密量取续滤液25ml,置蒸发皿中,蒸干,残渣加50%甲醇适量使溶解,转移至10ml量瓶中,加50%甲醇至刻度,摇匀,滤过,取续滤液,即得。测定法精密吸取参照物溶液与供试品溶液各5µl,注入超高效液相色谱仪,测定,记录色谱图,即得。特征图谱中,应有7个特征峰,其中3个峰应分别与相应的参照物峰保留时间相同。对照特征图谱峰1：人参皂苷Rg1峰2：人参皂苷Re峰3：人参皂苷Rb1对照特征图谱峰1：人参皂苷Rg1峰2：人参皂苷Re峰3：人参皂苷Rb1西洋参破壁饮片人参皂苷Rg1人参皂苷Re人参皂苷Rb18含量测定本方法参照《中国药典》20XX版一部西洋参项下[含量测定]方法制定,由于本品实质为药材破壁粉,方法验证考察其重复性和回收率,结果重复性RSD%≤2.0%,回收率99.7%～101.8%,RSD%＜1.8%；十批样品含量见表10,结果表明该方法基本可行。表10十批样品含量批号总量〔%平均值〔%200902012.52.9200902022.4200902032.4200902043.3200902053.3200902063