WatersevoTQS液相色谱质谱操作

编写日期李秀琴2009.1审核人编写日期李秀琴2009.1审核人批准人文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11716页TQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)操作指南适用范围：WatersXevoTQ-S液相色谱/质谱联用仪(三重串连四级杆质谱)。仪器设备的主要技术指标：梯度性能：保存时间标准偏差〔SD〕≤0.047min。ESI正离子灵敏度和周密度：测试样品：磺胺二甲基哒嗪(Sulfadimethoxine)，浓度：0.1pg/μl准偏差〔%RSD〕≤3.0%；保存时间标准偏差〔SD〕≤0.047min%RSD：2.5；保存时间标准偏差〔SD：0.00min，均符合指标要求。ESI负离子灵敏度和周密度：(chloramphenicol)，浓度：0.05pg/μl偏差〔%RSD〕≤3.0%；保存时间标准偏差〔SD〕≤0.047min测试结果：信噪比〔S/N〕:520psi1500；峰面积相对标准偏差%RSD：2.8；保存时间标准偏差〔SD：0.00min，均符合指标要求。系统周密度〔TUV/PD峰面积相对标准偏差%RSD%；峰高相对标准偏差〔%RSD〕≤0.9%。NanoFlow正离子灵敏度指标要求：峰强〔m/z=785.8〕≥1×107，Glu-FibrinopeptideB，浓度：100fmol/μl测试结果：峰强度〔m/z=785.8：1.48107；符合指标要求。TRIZAICMS说明：测试样品：ADHT19,PHOT33,ENLT4,BSAT59,ENLT43,ADHT17,BSA文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11726页T10,PHOT88≤0.25%测试结果：ADHT190.02%(23.77min)；PHOT33：标准偏差0.03%(24.81min)系统性能测试一维保存时间重复性(PDA)指标：保存时间标准偏差(SD):≤1.0s；一维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD):≤0.5%；一维峰高重复性(PDA)指标：峰高相对标准偏差(%RSD):≤0.9%；(PDA)指标：保存时间标准偏差(SD):≤1.0s；二维峰面积重复性(PDA)指标：峰面积相对标准偏差(%RSD):≤0.5%；二维峰高重复性(PDA)(%RSD):≤0.9%；全部检测方式的回收率指标：≥90.0%仪器设备的使用环境要求：压电源，防止意外停电。25℃，保持恒温。3)相对湿度：50%-70%操作程序：开机UPLC各电源，各部件通过自检后，双击工作站图标进入Masslynx工作站。选择Instrument＞MSTune进入调谐界面。从调谐界面选择Vacuun＞文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11736页pump，翻开真空泵，开头抽真空。机械泵和涡轮分子泵开头工作。质谱上的真空灯开头闪耀，当系统到达真空状态，灯变为绿色，不再闪烁，同时观看调谐界面Diagnostics→TurboSpeed泵转速到达100%即可，到达试验状态大约要抽真空4小时〔留意：真空规，测量工具，无特别状况通常无需翻开，尤其在刚开头抽真空时不要翻开。〕90-100psi。氩气：0.05Mpa，不超过0.1Mpa〔试验前确认氩气瓶压力，低于1Mpa时需更换氩气。〕预备UPLC系统0.22μm2mM-5mM之间，不要超过10mM〔注：假设流淌相含有缓冲盐，用完需使用大比为0.01%-0.1%，进样器高压密封垫要求PH≥2，不能使用三氟乙酸、七氟丁酸等离子对试剂〕。有机相要使用原装进口的色谱纯。〔2〕SW+Purge〔弱洗：纯水或者与流淌相梯度初始比例一样用于清洗泵头和密封清洗；相初始梯度比例的溶剂来溶解，并用0.22μm的膜过滤。初始化UPLC泵：在Masslynx主页面上点击MSConsole，进入系统掌握界面，点击左边QuaternarySolventManager选择CONTROL＞PrimeA/B/C/Dsolvent，选择A/B/C/D输入1min，假设更换了流淌相则输入3min，按start。初始化UPLC自动进样器：UPLC掌握台上选择SampleManager，选择Control＞PrimesyringSamplesyringeandNumberofcycles一般选1，但在更换洗针溶液后选3。完成后，UPLC自动进样器预备好。UPLC预备好。建立一个ProjectProject下进展试验，此步可以不做。文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11746页MasslynxFile＞ProjectWizardYes，输入Createusingexistingprojectastemplate.Browse选择project的模板。预备质谱Project下进展试验，此步可以不做。〔红色表示高压已关，绿色表示高压已开〔肯定要翻开氮气和高压才能开流淌相，关闭流淌相后才能关高压和氮气。ES+Source.输入以下各参数:Capillary(kV):3；Cone(V):30；DesolvationTemp℃550；Desolvation(L/hr):800；Cone(L/Hr):50；以下参数最HMResolution1:15；IonEnergy1:0.5；LMResolution2:3；HMResolution2:15；IonEnergy2:0.5；Collision:2。ESI调谐调出目标化合物的最正确质谱参数。敏度调整样品浓度。0.2ml/min1:1。点击Tune依据灵敏度可适当调整。设置FlowState模式〔Infusion:直接进样；Combined:液相和样品混合进样；LC:Waste:废液。选择XevoTQ-SMSDetector下面的IntelliStart：SampleTuneand合物的质谱参数。建立质谱的MRM方法。MRM，按调谐结果输入以下参数：离子模式、化合物名称、母离子质量文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11756页数、子离子质量数、离子驻留时间、锥孔电压、碰撞能量和MRM运行时间等。UPLC方法。MethodUPLC方法编辑界面。逐一编辑泵的方法、UPLC的方法命名保存。建立样品运行序列表，运行采集数据。方法、液相方法、瓶号、进样体积等参数，最终把编辑好的序列表命名保存。处理数据。关机Standby状态下即可。但假设长时间不用，或是对仪器进展清洗和修理时需要关机。从质谱移开到废液瓶。点击MSTune进入调谐窗口，点击Standby，关闭高压，让MS进入待机状态时，指示灯会由绿色变成红色。等脱溶剂气温度降到常温，关闭氮气。Option＞Vent，这时质谱开头泄真空，待机械泵停顿运行，同时观看调谐界面Diagnostics→TurboSpeed泵转速为0时即可关闭质谱电源。仪器根本维护与使用留意事项：仪器室要保持干净、干净、无尘；配套设施布局合理。开高压之前肯定要先开氮气，关氮气之前肯定要先关高压。前配，并不得超过两天。样品必需使用0.22μm的滤膜过滤。ESI离子化与溶剂亲热相关，在使用某些溶剂和添加物需要留意以下几个文件类型文件类型争论所作业指导书化学所文件编号NIM-ZY-HX-0000-YJ-11766页在正离子ESI条件下的离子化，也有可能会增加某些碱性化合物在负离子ESI强酸强碱、不挥发性酸及相应的盐〔如磷酸盐、硼酸盐、柠檬酸盐等、外表活性剂、离子对试剂。定期清洗样品锥孔：关闭隔断阀，取下样品锥孔，先用甲醇：水：甲酸〔45:45:10〕的溶液超声清洗20min，然后分别用超纯水和甲醇各溶液超声清洗10IonBlock、二级锥孔和RFlens。试验完毕要清洗进样针