牡丹籽油对高脂血症大鼠的作用及对糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影响

牡丹籽油对高脂血症大鼠的作用及对糖尿病小鼠及小鼠糖耐量的影响

牡丹是毛科的一种落叶灌木，广泛分布于河南、山东、安徽等地。自古以来，他就用自己的根皮来服药，称之为“丹皮”。牡丹籽是生产丹皮的副产品,且产量丰富,但目前牡丹籽多用作育种,并没有发挥其药用价值。牡丹籽油系从牡丹籽仁中提取的金黄色透明油状液体,含有大量的不饱和脂肪酸,如亚油酸、亚麻酸和油酸等。亚油酸和亚麻酸是人体必需脂肪酸,具有降血脂、降胆固醇和促进脂肪代谢、增强免疫、预防冠心病等生理活性。在国外已将亚麻酸及其衍生物作为药物或食品强化剂,用来预防和治疗心血管疾病。目前,对于牡丹籽油的研究仅限于分离、提取、保存、理化性质及组成等,对其深入研究较少。鉴于牡丹籽油含有大量活性成分不饱和脂肪酸,本实验通过对牡丹籽油调节血脂、降低血糖作用的研究,为牡丹籽油的开发利用及其产业化奠定基础,对于提高牡丹籽油的综合利用价值和新品种的植物油开发和利用提供依据。1材料表面1.1动物SD大鼠,雄性,体质量(200±20)g;昆明种小鼠,雄性,体质量(20±2)g,由安徽长临河医药科技有限公司提供。1.3血糖检测仪器AU640型全自动生化分析仪,日本奥林巴斯;强生稳步倍加型血糖仪及血糖试纸,美国强生;BS-110S精密电子天平,北京赛多利斯天平有限公司;TDL-16C台式高速离心机,上海安亭科学仪器厂。2方法2.1高脂饲料及牡丹花籽油的单次给药SD雄性大鼠60只,在实验环境下基础饲料适应性饲养1周后,根据体重随机分成6组,基础饲料对照组(空白组)、高脂饲料对照组(模型组)、高脂饲料+辛伐他汀(1mg·kg-1)组、高脂饲料+牡丹籽油高、中、低剂量(6.0、3.0、1.5g·kg-1)组,每组10只。高脂饲料由93.8%基础饲料、1%胆固醇、5%猪油、0.2%胆盐组成。除空白组外,各组开始给予高脂饲料喂养,同时进行灌胃给药,空白组和模型组给予等容积的蒸馏水,每5d称量体重1次,根据体重变化调整给药容积,连续灌胃30d。实验第30天,大鼠禁食不禁水12h后,腹主动脉采血,静置,常规制备血清,全自动生化分析仪检测血清TC、TG、HDL-C、LDL-C水平。2.2牡丹籽油的降血糖作用研究2.2.1给药、饲养及给药剂量昆明种小鼠100只适应性饲养1周后,随机分为空白组10只,模型组90只,小鼠均禁食不禁水18h后,模型组小鼠尾静脉注射四氧嘧啶(给药体积10mL·kg-1,剂量90mg·kg-1,临用前用生理盐水配制成浓度为0.9%的四氧嘧啶溶液,放于棕色瓶中,2h内用完),复制实验性糖尿病模型,空白组给予等体积的生理盐水,常规饲养。尾静脉注射四氧嘧啶72h后,小鼠眼眦毛细血管采血,血糖仪检测血糖值,取血糖值>11mmol·L-1的小鼠,按平均血糖值分为模型组、盐酸二甲双胍组(0.30g·kg-1),牡丹籽油高、中、低剂量(7.80、3.90、1.95g·kg-1)组,每组10只。除空白组和模型组外,各给药组开始灌胃给药,空白组和模型组给予等容积的蒸馏水,每5d称量体重1次,根据体重变化调整给药容量,连续灌胃30d。实验第30天,小鼠禁食不禁水12h后,眼眦毛细血管采血,血糖仪检测血糖值。2.2.2动物分组及给药剂量昆明种小鼠72只适应性饲养1周后,随机分为空白组、模型组、盐酸二甲双胍组(0.30g·kg-1),牡丹籽油高、中、低剂量(7.80、3.90、1.95g·kg-1)组,每组12只。除空白组和模型组外,各给药组开始灌胃给药,空白组和模型组给予等容积的蒸馏水,每5d称量体重1次,根据体重变化调整给药容量,连续灌胃30d。实验第31天,小鼠禁食不禁水8h后,眼眦毛细血管采血检测血糖值,记为0min的血糖值,除空白组外各组动物灌胃葡萄糖溶液(2.5g·kg-1,20mL·kg-1体重),空白组给予等容积的蒸馏水。于给糖后30、60、120min眼眦毛细血管采血,血糖仪检测血糖值。2.3统计方法实验数据均以均数±标准差(ue0af±s)表示,使用SPSS17.0统计软件对数据进行单因素方差分析,任意两组间比较采用t检验。3结果3.1牡丹花籽油对大鼠体重的影响各剂量组大鼠的初重、末重和增重与高脂饲料对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),说明在本实验条件下牡丹籽油对大鼠的体重无明显影响(表1)。3.2牡丹花籽油对小鼠血清hdl、tg、ldl-c、tg、ldl-c含量的影响大鼠给予高脂饲料喂养30d后,血清中TC、TG、LDL-C水平较正常组均明显升高(P<0.01),HDL水平显著减低(P<0.01)。牡丹籽油各给药组血清TC、TG、LDL-C值均有所降低,其中低剂量组对TC水平的降低较为明显,具有统计学意义(P<0.05);高剂量组TG水平与高脂饲料组相比,差异具有统计学意义(P<0.05),且HDL-C含量显著升高(P<0.05),见表2。3.3连续给药对牡丹花籽油高剂量和中剂量对牡丹花籽油糖含量的影响小鼠尾静脉注射四氧嘧啶后,血糖水平显著升高(P<0.01);连续给药30d后,牡丹籽油高剂量和中剂量组血糖含量均显著降低(P<0.05),且给药前与给药后血糖的变化值与模型组相比,具有统计学意义(P<0.01),见表3。3.4牡丹籽油对大鼠糖的抵抗力的影响4牡丹花籽油对高脂饲料的降血脂作用随着人们生活水平的提高和生活习惯的改变,高脂血症的发病率逐年上升,其进一步的发展会导致各种心血管疾病,对人类的健康造成极大的危害,严重影响人们的生活质量,所以预防和治疗高脂血症已成为国内外研究的重大课题。长期的血脂升高还会导致一些其它疾病的发生或加重,例如肥胖、高血压、糖尿病等。如果能寻求改善食物结构来减少高脂血症及其并发症的发生,将对高脂血症的预防和辅助治疗具有非常重要的意义。牡丹籽油的脂肪酸组成主要为亚麻酸、亚油酸、油酸等不饱和脂肪酸。亚油酸和亚麻酸是两种对人体健康特别重要的必需脂肪酸,摄入体内后可转变为EPA(Eicosapntemacniocacid)和DHA(docosahexaenoicacid)而发挥降低血脂和血压的作用。常见的食用油中亚麻酸含量都较低,如棉籽油亚麻酸含量为2%~3%、大豆油为6%、菜籽油为0.3%~1.3%,而牡丹籽油中的脂肪酸组成简单,并富含多种不饱和脂肪酸,特别是亚麻酸的含量高达35.7%。亚油酸、油酸具有降低血浆中胆固醇含量,减少胆固醇在血管壁的沉积,防止血栓形成、扩张血管等作用,亚油酸具有降低血压并减少血液黏附或形成血栓的能力,油酸可降低血液总胆固醇和有害胆固醇,却不降低有益胆固醇。大量研究表明油酸和亚油酸对心脑血管疾病有防治作用。研究表明亚油酸和n-3多不饱和脂肪酸在防治心脑血管疾病上具有协同增效作用。因此对牡丹籽油n-3多不饱和脂肪酸的开发利用及降血脂作用的研究,将为其进一步的开发奠定了理论基础。根据“保健食品功能学评价程序和检验方法”中辅助降血脂功能的结果判定规则:“动物实验在血清总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白——胆固醇三项指标检测中血清总胆固醇和甘油三酯二项指标阳性,可判定该受试样品辅助降血脂功能动物实验结果阳性”。本研究在给予大鼠高脂饲料的同时经灌胃给予牡丹籽油,结果显示,牡丹籽油对高脂血症大鼠血清中TC、TG、LDL-C水平均有降低作用,高剂量牡丹籽油可显著升高HDL-C水平。高脂血症是机体脂质代谢紊乱引起的血脂(TC、TG、LDL)水平升高,而HDL是高脂血症的保护因素,其含量越高则高脂血症的发病率越低。由于血液中的脂类主要以载脂蛋白的形式转运,所以血脂主要以脂蛋白形式存在,即LDL-C和HDL-C。牡丹籽油能降低TC、TG水平,升高HDL-C水平,提示牡丹籽油对高脂饲料引起的脂代谢紊乱具有一定调节作用。同时,牡丹籽油具有较好的降低四氧嘧啶诱导的糖尿病小鼠高血糖的作用,且呈现一定的量效关系,且对正常小鼠的糖耐量有一定的调节作用。实验结果表明牡丹籽油具有良好的食用保健价值。1.2给药剂量及降压药效果牡丹籽油:压榨工艺制备,由洛阳花瓣舞生物技术有限公司提供;利之舒(辛伐他汀片),哈药三精制药公司生产(批号:1202006);盐酸二甲双胍,上海医药集团有限公司信谊制药总厂(批号:120819B);血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)测定试剂盒均购于北京利德曼生化股份有限公司;葡萄糖注射液,海南中南科伦药业有