实验报告 之 果蝇及其他物种的遗传分析

果蝇及其他物种的遗传分析班号：周二上午组号：一组组员：风英邓洁201011202942塔吉尼沙姑丽尼格尔专业：生物科学实验日期：2012年10月-11月摘要：本综合实验以果蝇杂交实验为基础，将同工酶分析实验和遗传分子标记实验有机的相结合，利用果蝇实验中获得的材料，进一步从基因组和蛋白质水平上对不同的物种或者同一物种不同个体之间的差异以及遗传性亲缘关系和进化关系进行分析。首先通过经典的果蝇杂交实验，利用野生型和黑檀体残翅果蝇两对性状来验证非等位基因的自由组合定律。接下来通过对小鼠、鱼、大果蝇以及亲代果蝇和子代果蝇同工酶的分析进行探究种群的基因结构的变化和种内、种间的亲缘关系。最后，通过对于油松的亲子代遗传标记分析，检验油松的种子来源是否可靠，并分析其潜在父本和具体的位置。关键词：果蝇杂交非等位基因自由组合同工酶遗传分子标记SSR分析Abstract:Thiscomprehensiveexperimentindrosophilahybridizationexperimentasthefoundation,willisozymeanalysisexperimentandgeneticmolecularmarkersexperimentoforganiccombination,theuseofdrosophilaobtainedfromtheexperimentmaterial,furtherfromthegenomeandproteinleveltodifferentspeciesorthesamespeciesdifferencesbetweendifferentindividualsandinheritedgeneticrelationshipandevolutionaryrelationshiptocarryontheanalysis.Firstofallthroughtheclassicaldrosophilahybridizationexperiment,theuseofwildtypeandebonybodyresidualwingfruitfliestwocharactertoverifynonallelicfreecombinationlaw.Nextthroughthemice,fish,bigfruitfliesandparentalfruitfliesandprogenydrosophilaisozymeanalysistoexplorethechangeofpopulationgeneticstructureandkindofinside,theinterspecificrelationship.Finally,throughtheforpinustabulaeformisfilialgenerationsofgeneticmarkeranalysis,inspectionofpinustabulaeformisseedsourcesisreliable,andanalyzesitspotentialmaleparentandthespecificposition.【原理】1.1果蝇杂交实验本实验中教师提供给学生多种突变类型的果蝇，学生经过小组的讨论决定使用哪些类型和具体实验方案。因此整个实验过程是在完全开放状态下进行的，实验过程涉及到基因的显隐性、连锁、上位等多种关系，同时也会出现一些与期望值不同的结果。要求学生在一段时间内安排好实验进程，如实记录实验中出现的现象和问题，并做出分析和判断。果蝇（Drosophilamelanogaster）是双翅目昆虫，属果蝇属，约有2500种。通常用作遗传学实验材料的是黑腹果蝇。它的生活史从受精卵开始，经历幼虫、蛹、成虫阶段，因此是一个完全变态过程，1,。其作为实验材料有许多优点：1.体型小，在瓶内容易人工饲养2.易饲养。在常温下，以玉米粉等作饲料就可以生长，繁殖。3.生长迅速，繁殖能力强。十二天左右就可完成一个世代，每个受精的雌蝇可产卵400～500个，因此在短时间内就可获得大量的子代，便于遗传学分析。4.染色体数少。只有4对。有巨大染色体，并且遗传背景清楚。5.突变性状多，而且多数是形态突变，便于观察。2果蝇生活史果蝇在25℃时，从卵到成蝇需10天左右，成虫可活26～33天。果蝇的生活史如下：雌蝇→减数分裂→卵受精雄蝇→减数分裂→精子第一批成虫羽化（第八天）（可活26～33天） 产第一批卵蛹（第四天）第二次蜕皮 第一批卵孵化（第二天） （第零天）第一次蜕皮幼虫（第一天）果蝇的生活周期和各发育阶段的经过时间3果蝇的性别及突变性状的鉴别：果蝇的每一体细胞有8个染色体（2n=8），可配成4对，其中3对在雌雄果蝇中是一样的，称常染色体。另外一对称性染色体，在雌果蝇中是XX，在雄蝇中是XY。果蝇的雌雄在幼虫期较难区别，但到了成虫期区别相当容易。雄性个体一般较雌性个体小，腹部环纹5条，腹尖色深，第一对脚的跗节前端表面有黑色鬃毛流苏，称性梳（Sexcombs）。雌性环纹7条，腹尖色浅，无性梳。实验中选用的果蝇突变性状一般都可用肉眼鉴定，例如红眼与白眼，正常翅与残翅等。而另一些性状可在解剖镜下鉴定，如焦刚毛与直刚毛等。现列表如下：实验中使用的果蝇突变品系影响部分突变名称基因符号染色体上座位翅眼色体色刚毛翅形残翅白眼黑体焦刚毛小翅vgwbsnmIIR67.0X1.5IIR48.5X21.0X36.1焦刚毛的基因座为sn3,本文简写为sn。4雌雄果蝇的辨认个体大小雌大-雄小背面条纹雌5-雄3腹部形态雌尖-雄钝腹片数量雌6-雄4交配器官雌产卵器-交尾器性梳有无雌无-雄有5．果蝇杂交实验知识与原理黑体果蝇的体色为黑色（e），与之相对应的野生型果蝇的体色为灰色（E），灰色对黑色为完全显性，控制这对相对性状的基因位于第三号染色体上,果蝇的长翅为（VG）,残翅为（vg）长翅对残翅完全显性，控制这对形状的基因位于在二号。用具有这两对相对性状的两纯合亲本杂交，性状的遗传行为应符合自由组合定律。【实验目的】：1.掌握遗传学模式动物果蝇的特征与培养法2.学习杂交实验设置3.验证/分析遗传学规律【实验方法和步骤】2.1果蝇杂交实验1.设计杂交组合：F1代杂合子F2代出现性状分离①♀黑檀体长翅×♂灰体残翅；杂交自交F1代杂合子F2代出现性状分离②♀灰体残翅×♂黑檀体长翅。领取果蝇瓶后做好标记，放入相应的培养箱培养，以便挑选。2.收集处女蝇：①放飞生长好、接近羽化蛹多的成蝇；②清除成蝇后，连续地在间隔为10小时左右的时间点收集处女蝇，通常为早上7：00，下午4：00，晚上10：00。每次收集完都要保持培养瓶内无成蝇。3.杂交接种：分别取两种组合各10对亲本进行杂交，次日检查，如有死亡及时补。4.移出亲本蝇：当部分蛹变黑时进行，此时F1即将孵出。冻存亲本蝇：留正反交的雄雌蝇各40只（20只DNA实验、20只蛋白实验），储存于4个小管中，作为后续“遗传标记”实验的材料。为防止失败，可留存活蝇适当时间。配制新培养基，供F1同胞交配使用。5.移出亲本蝇：当部分蛹变黑时进行，此时F1即将孵出。冻存亲本蝇：留正反交的雄雌蝇各40只（20只DNA实验、20只蛋白实验），储存于4个小管中，作为后续“遗传标记”实验的材料。为防止失败，可留存活蝇适当时间。配制新培养基，供F1同胞交配使用。6.F1代果蝇的观察和交配：在第一只F1代果蝇出现后10天内，大约孵出7-9d时，观察统计F1的性别、性状及其对应的数量，并选10对再杂交于1个新瓶，同时取20对冻存。7.移出F1代果蝇：在F1杂交，我们F1代杂交过程中正交雌雄比例4：5，反交雌雄比列2：8一周后，放飞F1。8.观察、统计F2代的结果：在第一只F2代果蝇出现后10天内，观察统计F2的性别、性状及其对应的数量。正反交雌、雄果蝇均冻存20只用于后期的遗传标记实验。【实验结果与分析】果蝇杂交实验亲本类型和杂交组合亲本♀（EEvgvg）×♂（eeVGVG）♀（eeVGVG）×♂（EEvgvg）F1数量♂♀♂♀32262329果蝇杂交实验F2代性状数量统计表亲本：P正交：♀（eeVGVG）×♂（EEvgvg）F2性状灰体长翅（EEVGVG）黑檀体长翅（eeVGVG）灰体残翅（EEvgvg）黑檀体残翅（eevgvg）♂153496618♀162435711总数3159212329比例10.8：4：5.3：1果蝇杂交实验F2代性状数量统计表亲本：P反交：♀（EEvgvg）×♂（eeVGVG）F2性状灰体长翅（EEVGVG）黑檀体长翅（eeVGVG）灰体残翅（EEvgvg）黑檀体残翅（eevgvg）♂106473810♀119444312总数225918122比例10.2：4.1：3.6：1【果蝇杂交实验结果分析】：1.理论上F2代的形状符合灰体长翅：黑檀体长翅：灰体残翅：黑檀体残翅=9：3：3：1①反交：♀（EEvgvg）×♂（eeVGVG）时，F2 个体总数为419，对其进行适合度x2=(225-235.7)2/235.7+(91-78.6)2/78.6+(81-78.6)2/78.6+(22-19)2/19=2.99=此时0.25<P<0.5，说明与理论比数间没有显著差异；②正交：♀（eeVGVG）×♂（EEvgvg）时F2个体总数为559，对其进行适合度检验x2=(315-314.4)2/314.4+(92-104.8)2/104.8+(123-104.8)2/104.8+(29-34.9)2/34.9=5.72，此时0.25<P<0.1,说明与理论比数间没有极显著差异。通过对这次正反杂交实验的数据分析我们发现实验值理与论值之间没有极显著差异，可以证明自由组合定律并且可以证明两队相对形状都不是伴性遗传。2果蝇及其他物种的遗传标记分析（同工酶实验）【实验原理】同工酶：是指催化反应相同，但结构和理化性质不同的一族酶。是受遗传体系决定的酶的不同分子形式。根据分子量、电荷，可以利用电泳分离。酯酶（Est）：催化酯类化合物水解的酶系.乳酸脱氢酶(LDH)：催化乳酸脱氢反应的酶.应用：遗传育种、基因定位应用：遗传育种、基因定位。LDH染色原理：乳酸乳酸丙酮酸LDHNAD+NADHNBT(黄)NBTH(蓝紫)PMS（氢递体）【实验目的】1.掌握同工酶分析的方法技术2.理解同工酶分析的遗传学意义【实验方法与步骤】果蝇及其他物种的遗传标记分析（同工酶）（1）提取酶液：将5只蓝枪头口事先在酒精灯上烧圆，制成枪头杵子；取实验材料（普通果蝇30只、大果蝇10只、小鼠肝0.1g、鱼肝0.1g）置于1.5ml离心管；加入700μL液氮后，在冰上用枪头杵子捣碎至样品成粉末状且发白；在冰上，加入80μL组织匀浆液，充分悬浮样品，每静置7~8min吹打几次,如此重复3次；4℃，13000rpm离心5min；移上清于另一离心管，-20℃保存。（2）配制分离胶（7.5%），配方如下：双蒸水/mL4.94mL1.5mol/LTris·HCl（pH8.8）/mL2.50mLAcr/Bis（30%）/mL2.50mLTEMED/μL10μL10%Aps/μL50μL总体积/mL10mL注入两玻璃夹缝中（加到离短玻璃上缘2cm），胶面上加1cm蒸馏水（自然凝胶后倾出、除干净）。配制浓缩胶（4%），配方如下：双蒸水/mL2.21mL0.5mol/LTris·HCl（pH6.8）/mL1.25mLAcr/Bis（30%）/mL1.50mLTEMED/μL10μL10%Aps/μL25μL总体积/mL5mL 加入两玻璃夹缝中，并在两玻璃板夹缝中水平插入梳子（注意有棱一面在短玻璃侧），待凝胶后在缓冲液中小心拔出梳子。（3）样品制备：酶液10μL与上样缓冲液10μL（1:1）在PE手套上混匀。（4）加样：小心地向每个上样孔加入20μL的样品，加样顺序依次为小鼠、鱼、大果蝇、黑腹果蝇亲代、黑腹果蝇后代F2，再顺次重复一遍。（5）电泳：4℃冰盒中，180V电泳。（6）停止电泳:指示剂溴酚兰移至底部约0.5cm时，切断电源。（7）染色：在电泳过程中配染色液，在抽屉中避光保存；电泳结束后，小心从玻璃板中取下胶。去掉浓缩胶，将分离胶进行染色至酶带显色。Est和LDH染色约20min，P0染色约5-10min，染色中注意要避光。（8）脱色、固定、保存：染色后的胶置于7%乙酸。【实验结果和分析】EST染色结果结果分析：本次实验结果较为模糊，无法准确区分条带数和条带位置，但可大概看出黑腹果蝇后代和黑腹果蝇亲代的羧基酯酶（Est）大致相同，其酯酶应为二聚体；黑腹果蝇的条带比较清晰，大果蝇，小鼠和鱼的条带比较模糊；大果蝇中间的条带与黑腹果蝇亲代和子代的两个条带位置相近，可推测黑腹果蝇和大果蝇亲缘还是较近的。根据所学习的知识得二者都属于果蝇属。LDH染色结果结果分析：本实验基本未得到结果。根据实验结果图，染色后琼脂糖胶上只有小鼠和鱼处有模糊的条带，小鼠条带呈蓝紫色、鱼的条带呈较模糊的黄色，最下端的为溴酚蓝。没有出现预期的5条条带的酶谱。综合分析：Est染色原理：酯的水解产物与偶氮化合物（如坚牢蓝RR盐）结合产生红褐色物质。查文献可知，以萘乙酸酯（本实验中是醋酸α-萘酯和醋酸β-萘酯）为底物的同工酶属于羧基的酯酶类，一般为单链或二聚蛋白质[1]胡能书.同工酶技术及其应用。也即说明羧基酯酶（Est）具有多态性。另羧基酯酶是由同一基因座位的复等位基因控制产生的同工酶即等位酶，一般是由一个基因座位的少数几个突变而形成的等位基因控制产生；酶座位的多态性程度较高[2][1]胡能书.同工酶技术及其应用[2]同工酶分析技术[3]张贵生.镧暴露对鲤鱼脑和肌肉中酶和脂质过氧化水平的影响.水生生物学报,2008,32(4):602—605查阅文献知，酯酶的不同同工酶对醋酸—α萘酯和醋酸—β萘酯有不同的亲和力，而且这种亲和力是稳定的，即每次先于醋酸—α萘酯或醋酸—β萘酯作用的同工酶，每次都显褐色或红色，如果是醋酸—α萘酯和醋酸—β萘酯同时能作某些同工酶的底物，则该同工酶总是染成紫褐色。本实验中条带染色后颜色不尽相同，有的呈褐色，有的呈紫褐色，便是由于上述原因所致。查文献可知，制样对于材料没什么特殊要求，只需要根据实验工作的要求，通常是取新陈代谢比较活跃的部位。本实验中取材为鱼或小鼠的任何一组织，前面提到鱼的肝和肌肉中羧基酯酶（Est）酶谱条带数不同，试推测取材组织可能对酶谱分析有一定影响，但未查阅到相关文献解释这究竟是什么原因所致。LDH染色查文献可知，乳酸脱氢酶的几种同工酶都是四聚体，由两种不同肽链（亚基）α和β构成，至少受两个基因所控制。控制α亚基的叫做A基因，控制β亚基的叫做B基因。例如绝大多数硬骨鱼的乳酸脱氢酶就是由A和B两个基因控制的，如果用基因型来表示，则LDH1、LDH2、LDH3、LDH4和LDH5分别相当于B4、B3A1、B2A2、B1A3和A4五种基因型。认为B基因在生物进化的过程中由A基因突变而来。另外，在鱼类、鸟类和哺乳类中发现LDH还有第三个亚基，它的控制基因叫做C基因，由它控制的酶叫做C4LDH，在电场的分布明显趋于阳极。随后在鱼类肝中发现的这种C4LDH，在电场中的分布明显趋于阴极。后来证明C基因是由B基因突变而来。用分子杂交的方法证明无论是鸟类、鱼类或哺乳类中，决定它们LDH同工酶的A、B、C三个基因都是同源的。LDH1泳向阳极，对热、尿素耐受性强，LDH2、LDH3、LDH4按顺序泳动速率减慢，LDH5在原位，最易被热、尿素变性。本次实验中，LDH染色的结果十分不理想。造成这种实验结果的可能有多种原因，首先是实验中，SDS电泳时胶底部形成一个较大条带，导致部分区域导电不足，从而是电泳结果存在问题；另外，组织提取时也可能存在一些问题，因为液氮挥发性较高，而且加入液氮后组织块变成快状，很难研磨；实验结构不够理想的首要原因是染色效果不够理想。综上：查文献可知，酶带的产生既有它的遗传背景，也会受生理（发育阶段和存在的组织器官）、各种实验因素（染色方法、酶的浓度、电泳分辨率等）的影响。导致实验结果不理想的因素很多，情况较为复杂。前面提及，取的鱼和小鼠的组织器官具有随机性，且教师提供的鱼和小鼠材料已经处死，其发育阶段也不清楚；在加液氮研磨材料时，由于液氮极易挥发，可能研磨不充分，最终酶提取液中酶浓度较低，未达到聚丙烯酰胺凝电泳的分辨率，进而出现一片弥散或没有条带的现象；研磨及所有的步骤均由小组4人一起完成，各样品分别由不同的同学进行研磨及后续操作，不同人的操作能力、细心程度和实验状态等都有不同程度地差异，使得随机误差较大，也可能会造成不同样品间浓度、酶活性等存在显著差异；此外通过电泳将同工酶的不同亚基进行分开，胶块质量也会影响实验结果。3油松亲子代遗传标记分析（叶绿体SSR实验）【实验原理】1.油松基本知识：•叶绿体基因组为单倍型；油松叶绿体来自父本。•比较种子胚叶绿体与潜在父本叶绿体基因组，可进行父源(花粉供体)分析。（另从胚乳可获得母源基因）–胚叶绿体单倍型与采集种子的树的叶绿体单倍型：一致：可能为自交；不一致：可能为异交。•这种判断误差的大小与基因取样位点的多寡相关2微卫星DNA又称短串联重复，或简单重复序列SSR。基序长度为1~6nt，重复次数n=10~60；多位于基因组非编码区，可认为是中性标记；其变异丰富，称共显性特征。这些小的串联排列的重复序列经常是通过核苷酸链的滑动错配或者其它未知的过程来改变它们的长度，从而导致微卫星在数量上的差异。微卫星的突变率高：每代每个配子的每个位点有25×10-5～1×10-2突变，因此造成了它们的多态性。微卫星寡聚核苷酸的重复次数在同一物种的不同基因型间差异很大。微卫星通常是复等位的，代表每个微卫星位点的等位基因数目高度可变。3亲本分析亲本分析，是根据遗传定律和亲子代的形态、生理、遗传特征，判断亲本来源和特征的分析方法。根据松科植物的重要特点：（1）物种形成历程中经历了广泛的杂交与渐渗(两物种的杂交后代与亲本反复回交，把某一亲本的性状带至另一亲本，可使一个物种的基因插入到另一物种)。（2）两种质体基因遗传方式不同：线粒体基因为母系遗传（通过种子传播，基因流有限）；叶绿体基因为父系遗传（通过花粉和种子传播，基因流广泛）。本次实验的测序将两种不同引物的产物同时测定，基于如下原则（1~2个）：两种引物的大小尽量有较大差异，所以将pt4(150bp，黄)与pt9(88bp，黄)组合（均为黄色但大小不同）；两种引物的标记荧光颜色不同，所以将pt2(150bp，黄)与pt6(160bp，蓝)组合（大小相近但颜色不同）。【实验目的】1.比较种子胚叶绿体与潜在父本叶绿体基因组，进行父源分析2.熟识实验操作技能【实验方法与步骤】3油松亲子代遗传标记分析（叶绿体SSR）课前准备灭菌（具有石英砂和磁珠的Fastprep管，1.5ml指管，蓝枪头、黄枪头、白枪头），120℃，20min；确保DNA提取试剂盒中的PW和GDDNA提取（1）每组领取种子（1颗），并记录种子来源；（2）分装全班所需裂解液GP1（～700μL/管样品），65℃预热；（3）剥取油松种子胚和胚乳，分别置于Fastprep管中，做标记；（4）在Fastprep组织破碎仪中，以5级速度，破碎Fastprep管中样品（20sec）；（5）在通风橱中，向预热的GP1中加入巯基乙醇（终浓度为1%），取700μL含巯基乙醇GP1加入每管已破碎的样品中（破碎完的样品需迅速加入GP1，以防止DNA降解）；（6）在65℃水浴锅中水浴45min，期间每隔5-10min上下颠倒混匀一次；（7）水浴结束，取出晾2-3min，加入700μL氯仿，上下颠倒混匀。12000rpm，离心5min；（8）小心从离心机中取出（防止破坏分层），吸取上层水相于一个新离心管中，加入700μLGP2，上下颠倒混匀；（9）将上一步混匀液体分两次移入吸附柱CB3中，静置3min，12000rpm，离心30s，弃掉废液；（10）加入500μL去蛋白液GD，12000rpm，离心30s，弃掉废液；（11）加入700μL漂洗液PW，12000rpm，离心30s，弃掉废液；（12）加入500μL漂洗液PW，12000rpm，离心30s，弃掉废液；（13）12000rpm，再次离心2min，充分去除漂洗液；（14）将吸附柱至于一个干净的离心管中，通风橱中晾10min，使吸附柱中酒精充分挥发；（15）加65℃预热的洗脱缓冲液TE，50μl（务必悬空加到吸附柱的中央），静置5min。12000rpm，离心2min；（16）将上一步离心产物吸出，重新加入到吸附柱中，静置5min，12000rpm离心2min，以提高DNA洗脱效率。（17）保留离心产物，做好标记；丢弃吸附柱。2.3.3PCR每组4对引物（pt2,pt4,pt6,pt9,各10μM），2个DNA样品。（1）配制反应液（20μL/每对引物）：•2μLbuffer（10mMTris·HClpH8.3，50mMKCl）•1.5μLMgCl2（1.5mM）•1.6μLdNTP（4种各0.2mM）•0.48μL前导引物（0.24μM，荧光标记）•0.48μL后置引物（0.24μM）•0.16μLTaq酶（0.8U）每对引物取19μL混合液，加1μLDNA模板，混匀。（2）反应条件：–95℃预变性5min•94℃1min•55℃50s•72℃–72℃后延伸8min2.3.4电泳及PCR产物量估算（1）制备电泳缓冲液（5×TAE）500ml：24.2gTris，5.71ml冰乙酸，3.72gEDTA，定容至1000ml）。使用前将5×TAE稀释成1×TAE用作工作液。（2）配制1%琼脂糖凝胶：称取琼脂糖0.5g，加入50ml1×TAE电泳缓冲液，用光谱炉加热煮沸至琼脂糖全部融化,即成凝胶液；待凝胶液温度降至60℃时，加入2.5μLGoldview，混匀后灌制凝胶板。根据电泳胶板大小决定配制/灌胶量，一般常温凝固30min内即成凝胶。（3）1%琼脂糖电泳：每样孔2μL6×LoadingBuffer+5μLPCR产物+5μLH2O；2μLMarker（DL2000）（点于左侧第一孔）；恒压120V，时间20min。2.3.5PCR（1）变性液：–0.5μLPCR产物pt2TAMARA（约5-10ng）+0.5μLPCR产物pt6FAM（约5-10ng）+0.3μLRox+7.7μL甲酰胺；–0.5μLPCR产物pt4TAMARA（约5-10ng）+0.5μLPCR产物pt9TAMARA（约5-10ng）+0.3μLRox+7.7μL甲酰胺；（2）变性程序：94℃,4min；取出置-20℃,3min。（3）测序（用3100测序仪测序）（4）数据读取(Genemapper软件）【实验结果与分析】3.3油松亲子代遗传标记分析（叶绿体SSR）100bP250bP100bP250bP图三：PCR产物聚丙烯酰胺凝胶电泳分析：1）.由于我们的梳子空太大了，点样的时候有部分点到了其他组的凝胶里面，因此造成了13,14,15,16四个孔的产物跑的不对称有点奇怪。2）.最左边为MarkerDL2000，从左往右上样顺序依次为胚（引物）pt2、pt4、pt6、pt9和胚乳（引物）pt2、pt4、pt6、pt9。凝胶下边为上样处。3）.胚的叶绿体基因以pt2和pt6为引物与胚乳叶绿体基因以pt2为引物进行PCR，聚丙烯酰胺凝胶电泳条带较弱。表三本组种子的胚及胚乳的单倍型Pt6pt2Pt6pt2结果分析对胚和胚乳引物扩增产物序列分析，可得本组胚和胚乳叶绿体的4种SSR的序列长度：胚：pt2pt4pt6pt9基因长度分别为：15216689胚乳：pt2pt4pt6pt9基因长度分别为本组种子胚乳的单倍体为149-153-166-88由于胚pt2在PCR过程中就出现了问题，PCR不是很好，因此未能得到结果。全班胚和胚乳引物扩增产物序列分析汇总标号Pt2Pt4pt6Pt9单倍型潜在父本母本杂交型114914916287149-149-162-87218_1421