高压和微波修复在免疫组织化学染色中的应用

高压和微波修复在免疫组织化学染色中的应用

随着免疫组织化学在病理诊断中的应用和发展，免疫组化染色已成为现代病理诊断中不可或缺的检测技术。它在评估肿瘤的来源、分类以及优良肿瘤的识别和诊断方面发挥着重要作用。免疫组织化学染色操作中每一个细小的环节都有可能影响染色结果,导致假阴性或假阳性的发生,其中以抗原修复影响较大,不同的抗原修复方法直接影响免疫组织化学染色结果的表达。因此,抗原修复方法的选择显得尤其重要。笔者结合本院病理科的实际情况,对高压修复和微波修复在免疫组织化学染色中的应用效果进行了对比分析,现将结果报道如下。1临床数据1.1苏泊尔单台法GalanzWP750微波炉,功率750W;苏泊尔家用高压锅,内径20cm;耐高温塑料切片架1个,金属切片架1个,电炉1只。1.2材料的材料本院2007年1—6月手术切除标本,组织均经10%甲醛固定,石蜡包埋,其中乳腺癌15例、胃癌15例、肺癌10例。1.3酸-柠檬酸盐清洗法采用新s-p法所用抗体购自福州迈新公司,即用型试剂。加热缓冲液为0.01M柠檬酸-柠檬酸盐(pH6.0),清洗液为PBS缓冲液(pH7.4),采用迈新S-P法,4℃冰箱过夜。抗体标记为乳腺癌ER、PR、C-erbB-2,胃癌Ki-67、Top-2,肺癌TTF1。1.4组织切片的制备载玻片先用洗洁精清洗,然后无水乙醇浸泡5min,捞出晾干后,用L-多聚赖氨酸1∶9稀释液处理防脱片。常规组织切片至二甲苯脱蜡,梯度乙醇水洗后,用PBS冲洗3次,每次约3min。修复方法:①微波修复法。将0.01M柠檬酸-柠檬酸盐缓冲液放入微波盒中加热至煮沸,然后将脱蜡水化后的组织切片置于耐高温的塑料切片架中,放入已沸腾的缓冲液中,微波4档96～98℃20min,视缓冲液蒸发减少情况,加适量的蒸馏水,继续恒温10min,取出置室温下后自然冷却。②高压修复法。将0.01M柠檬酸-柠檬酸盐缓冲液放入高压锅内,再将脱蜡水化后的组织切片置于金属切片架,放入高压锅内,盖紧盖子,放在电炉上加热,至盖子喷气开始,控制时间为2min,关闭电源,将高压锅拿至水龙头处冲至冷却,打开高压锅的盖子,自来水洗。然后均用PBS冲洗,按S-P法步骤,滴加A→B,自选抗体,4℃冰箱过夜,第2天滴加C→D,每次滴加试剂前均用PBS液冲洗3次,DAB显色,苏木素复染。1.5+ER、PR、Ki-67、Top-2、TTF1均定位于细胞核,肿瘤细胞阳性细胞数<25%为(+),25%～50%为(++),>50%为(+++)。C-erbB-2定位于细胞膜,肿瘤细胞阳性细胞数>10%的不完整膜阳性为(+),>10%的较弱但完整膜阳性为(++),>10%的连续完整的膜强阳性为(+++),阳性着色为棕黄色。1.6统计处理采用χ2检验。2微波和微波对er、pr、c-erbc-2、ki-97+阳性表达率高压修复的比较采用高压修复染色阳性率显著高于微波修复(P<0.05),染色强度也有不同程度提高。其中ER、PR、C-erbB-2、Ki-67(++)阳性表达率高压修复显著高于微波修复(P<0.05);Top-2和TTF1(++)阳性表达率高压修复略高于微波修复,但无显著性差异(P>0.05)。具体结果见表1。3免疫组织化学染色常规情况下,病理送检标本多采用10%甲醛固定,在固定过程中,组织中的蛋白质分子交联增加,抗原被封闭。热修复抗原其原理是加热使抗原性物质分子运动加剧,最终打破封闭的抗原决定簇的化学键和蛋白质分子间的交联,使抗原暴露,达到修复的目的,从而提高免疫组织化学反应的阳性率。通过本实验对比分析,说明高压锅加热比微波炉加热修复抗原效果好,无论在阳性率,还是在阳性强度方面均有不同程度的提高,而且染色阳性定位清晰,非特异性着色弱,背景着色浅,值得推广。另外,笔者认为在进行免疫组织化学染色中需注意以下问题:①玻片的预处理。免疫组化所需玻片在涂胶前要彻底清洗干净,这样可以大大减少脱片的发生。②选择正确的抗原修复方式,如有些抗原需要消化酶消化修复。③建立阳性和阴性对照,有助于实验结果的正确评判。④确保试剂的覆盖均匀,当出现空泡时,滴加后最好轻微晃动下,使气泡排出,确保试剂均匀覆盖,避免阳性不均。⑤显微镜下控制显色的程度,可防止背景的非特异性着色和着色过深等。⑥苏木素复染的控制,过深容易把核阳性覆盖,过浅又会导致染色对比不佳,最好在镜下观察。免疫组织化学染色结果的好坏,将直接影响结果的正确判断,从而在一定程度上影响病理诊断的正确与否,特别是一些有鉴别诊断价值的抗体,如果免疫组织化学染色失败,有导致误诊的可能