第5章细菌形态学检查

医学微生物学实验室规则：学生进微生物实验室必须穿好工作服，离室需脱下反折，要经常清洗消毒；进实验室时随带书包、衣物等与实验无关物品一律存放指定的储物柜内；严禁在实验室进食、饮水和抽烟；手拿培养物后或出实验室前要洗手，必要时用消毒液泡手；实验过程中避免一切不良的个人习惯；操作中产生的垃圾不得随意抛掷，要扔在指定的桶内细菌

形态学检查

形态学检查分类一、不染色标本检查(活体）

悬滴法压滴法二、染色标本检查

单染法：简单染色，一种染料（美兰染色）复染法：复杂染色，两种以上染料（革兰染色、抗酸染色）染色标本检查法的一般步骤

一、涂片制备涂片干燥固定

二、染色初染媒染脱色复染

注：固定的目的1、杀死细菌,保持细菌原有的形态和结构2、增加细菌的通透性，使细菌易于着色3、使细菌牢牢地黏附在玻片上，不至于在染色过程中被水冲掉革兰染色(Gramstain)1884年由丹麦医师Gram创立革兰染色是最常用的一种染色方法，可以将细菌初步分为革兰染色阳性菌和革兰染色阴性菌，在临床上具有非常重要的意义一、目的1、掌握细菌涂片的制备及革兰染色的方法2、了解革兰染色的原理和临床意义

1、通透性学说2、等电点学说3、化学学说二、原理

通透性学说G+菌细胞壁结构致密，肽聚糖层厚且交联度高，脂质含量少，乙醇不易进入G-菌细胞壁结构疏松，肽聚糖层薄且交联度低，含大量脂质，乙醇易渗入。

等电点学说G+菌等电点（pI2~3）G-菌等电点（pI4~5）在相同pH条件下G+菌所带负电荷比G-菌多，所以与带正电荷的结晶紫染料结合较牢固，不易脱色。化学学说G+菌菌体内含有大量核糖核酸镁盐，可与碘、结晶紫等染料牢固结合，使已着色的细菌不易被乙醇脱色G-菌菌体内含核糖核酸镁盐很少，故易被脱色

1、菌种

葡萄球菌大肠杆菌

2、试剂革兰染色液

初染液结晶紫媒染液卢戈氏碘液脱色液95%乙醇复染液稀释石碳酸复红

3、其它

载玻片染色盘接种环酒精灯等三、器材和试剂冲洗染色完成之后，在涂片区滴上香柏油使用油镜观察实验结果四、方法与步骤

1min1min30s30s冲洗冲洗冲洗1、细菌涂片的制备

涂片干燥固定

2、染色

初染（结晶紫）媒染（卢戈氏碘液）脱色（95%乙醇）复染（稀释石碳酸复红）

吸水纸吸干

无菌操作（接种环灭菌和取菌）涂片的厚度要适中染色的时间控制，一一半半冲洗的方法，不要对着涂片区冲洗五、注意事项一一半半G+菌G-菌结晶紫卢戈氏碘液95%乙醇石碳酸复红初染

媒染

脱色复染六、结果图一图二七、临床意义1、鉴别细菌2、研究与致病性的关系3、指导临床用药G+G-G+致病外毒素G-致病内毒素G+青霉素、头孢菌素等G-链霉素、庆大霉素等细菌的特殊结构（示教）

（二毛荚一胞）从细胞质的基础颗粒长出，伸到细胞外面的细长呈波状弯曲的丝状物。功能：鞭毛运动可鉴定、与致病性有关、具有抗原性（H抗原）菌发出比鞭毛更更细、短、直、硬和多的丝状蛋白附属物，与运动无关，菌毛中空，可分为普通菌毛和性菌毛功能：普通菌毛附黏膜，性菌毛传递遗传物质荚膜细菌细胞壁外包绕的一层粘液性物质，厚度≥0.2μm边界明显者称为荚膜，厚度＜0.2μm者称为微荚膜功能：荚膜护菌强致病---抗吞噬作用、抗有害物质损伤、抗干燥作用、黏附作用菌体内部物质缩水（60％）形成圆或卵圆形小体。功能：芽胞形态辨细菌，灭菌标准抗力强。

实验报告一、目的二、原理（主要）三、材料四、方法五、结果（2+3幅图）六、意义七、注意事项实验结果1、绘制所涂片染色的G+及G-菌的形态图并注明放大倍数2、绘制示教片中各细菌特殊结构形态图并注明放大倍数

透镜折光率油1.5151.0空气玻1.52璃

空气

油镜原理示意图油镜的使用方法寻找视野：在使用油镜之前，必须先经低、高倍镜观察，然后将需进一步放大的部分移到视野的中心。增大光照强度：将聚光器上升到最高位置，光圈开到最大。转高倍镜头、滴加镜油、换油镜头：转动转换器，使高倍镜头离开通光孔，在需观察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢转动油镜，在转换油镜时，从侧面水平注视镜头与玻片的距离，使镜头浸入油中而又不以压破载玻片为宜。调试观察：观察目镜，并慢慢转动细调节器至物象清晰为止。［如果不出现物象或者目标不理想要重新寻找，在加油区之外重找时应按：低倍→高倍→油镜程序。在加油区内重找应按：低倍→油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。］清洗镜头：油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上和标本上的香柏油，再用擦镜纸沾少许二甲苯（或乙醚）擦去残余的香柏油，最后再用干擦镜纸擦干净。油镜的使用方法革兰染色临床意义临床意义1、鉴别细菌2、研究与致病性的关系3、指导临床用药G+G-G+致病外毒素G-致病内毒素G+青霉素、头孢菌素等G-链霉素、庆大霉素等《医学微生物学》实验一细菌的形态学检查实验报告书写1.实验题目2.实验目的3.实验原理4.实验材料5.实验方法6.实验结果7.结果分析8.实验意义[实验内容]一、光学显微镜油镜的使用和保护法二、细菌的革兰染色检查法三、细菌基本形态和特殊结构的观察实验一细菌的形态学检查实验一细菌的形态学检查[目的要求]1.掌握显微镜油镜的使用和保护。2.掌握细菌的基本形态和特殊结构。3.掌握细菌涂片标本的制备及革兰染色的步骤，判断革兰染色性及明确其临床意义。一、显微镜油镜的使用和保护显微镜的构造图显微镜的使用方法油镜头的辨认显微镜的维护油镜加香柏油的原理玻璃折射率：

n=1.52香柏油折射率：

n=1.515二、细菌标本染色检查法细菌个体微小，无色半透明，染色后能在显微镜下识别其各种不同结构，并鉴别细菌。细菌染色法:细菌特殊染色法芽胞鞭毛丹麦细菌学家Gram于1884年发明的一种鉴别细菌的染色法。可将细菌鉴别为革兰氏阳性G+菌和革兰氏阴性G-菌两大类。革兰染色法1.通透性学说革兰氏阳性菌细胞壁的通透性比阴性菌低，进入细胞的染料和