第16章细胞因子及其受体检测(免疫学)

细胞因子及其受体检测AssayforCytokineandCytokineReceptorINTRODUCTIONWhatarecytokines?KindsofcytokinesCytokine-mediatedeffectsCytokinereceptorfamiliesWhydowedetectcytokines?MethodsforcytokinesanalysisWhatarecytokines?由非神经—内分泌细胞产生的一大类与免疫应答活动密切相关的低分子蛋白与多肽。AcollectionofpolypeptidesusedforcommunicationsbetweencellsPlayrolesimilartohormones

－Hormonesusuallyactatadistance

－CytokinesactlocallyDifferfromgrowthfactorsthatareproducedconstitutively,whilecytokineproductioniscarefullyregulatedPlayanimportantroleinbothinnateandadaptiveimmunityKindsofCytokines(structureandfunction)Interleukins(IL-1….35)Colonystimulatingfactors(M-CSF、G-CSF)Interferons(a,b,g)TumornecrosisfactorsChemokines(IL-8、GROs、MCP-1)Growthfactors(EGF、FGF、IGF、PDGF)Cytokine–function(signaltransfer)CellgrowthCelldifferentiationCelldeathInducenon-responsivenesstoothercytokines/cellsInduceresponsivenesstoothercytokines/cellsInducesecretionofothercytokines1、旁分泌（paracrine）、自分泌（autocrine）性2、多源与同源性3、高效性4、多效性（pleiotropy）5、丰余性（redundancy）6、协同性7、拮抗性8、网络性细胞因子细胞因子细胞因子受体细胞因子受体细胞因子的自分泌与旁分泌性

IL-2IFN-TNF-细胞因子的同源性与多源性IFN-

T细胞T细胞NK细胞IL-4Th细胞肥大细胞Th细胞B细胞细胞因子的多效性Th细胞B细胞细胞因子的丰余性IL-2IL-4IL-5Th细胞B细胞细胞因子的协同性IL-4IL-5Th2细胞B细胞细胞因子的拮抗性Th1细胞IL-4

IFN-

细胞因子的网络性IL-3、IL-5、IL-4、IL-6、GM-CSFTNFTGFIL-1IFNIL-1IFNTNFIL-1TGFIFNIL2IL-4IFNIL2IL-4IL-5IL-6TNFIFNIL-1TGFTNFIL-1IFNIL-5GM-CSFG-CSFM-GSFTNFTNFIL-1TGFIL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSF

IL-1IL-6IL-1IL-6GM-CSFG-CSFM-GSFIFN内皮细胞成纤维细胞TBWhydowedetectcytokines?DiagnosisorassistantdiagnosisMonitoringimmunefunctionCytokinetherapymonitoringStudymechanismsofdisease细胞因子检测的特点免疫原性较弱样品含量低样品具有时效性生物效应特异性差MethodsforcytokinesanalysisBiologicalmethodImmunologicalmehtodMolecularmethod第一节生物学检测法根据细胞因子的生物学活性设计的检测方法。原理将细胞因子与指示系统如（细胞）相互作用，指示细胞发生增殖、死亡或分泌蛋白等变化来显示细胞因子的功能。一、细胞增殖法二、靶细胞杀伤或抑制法三、细胞病变抑制法四、趋化活性测定法方法一、细胞增殖法（一）原理细胞因子可促进相应指示细胞分裂、增殖，如IL-2。将不同浓度的细胞因子与指示细胞共同孵育一定时间，检测细胞的增殖情况，以确定细胞因子的量。（二）指示细胞对细胞因子的刺激可产生增殖、死亡、分泌蛋白等生物学性状改变的细胞直接从组织中分离，或采用体外传代的依赖细胞株。常见指示细胞株见表16-1。（三）技术要点

1．

依赖细胞株的准备(细胞因子解离)。2.细胞因子作用于依赖细胞株（对照）。

3．

测定细胞增殖程度。

4．细胞因子活性单位的计算。

1．3H-TdR掺入法2．

MTT比色法3.CFSE测定细胞增殖程度细胞因子的生物活性单位：指使相应指示细胞达到最大程度增殖的50％时，所需细胞因子的含量为一个活性单位。细胞因子活性单位的计算Forexample细胞因子活性单位（U/ml)＝样品50％最大程度增殖的稀释度标准品50％最大程度增殖的稀释度X标准品活性单位二、靶细胞杀伤或抑制法（一）原理主要用于肿瘤坏死因子（TNF）的测定TNF具有杀伤肿瘤细胞的作用；选择对TNF敏感的细胞系作为靶细胞；与标准品进行比较。（二）TNF敏感细胞株小鼠成纤维细胞株L929和WEHI164.13（三）技术要点1.

靶细胞的准备。2.

TNF作用于靶细胞(标准品、阴性对照)。3.

细胞毒反应程度测定。4.TNF活性计算。

可直接检测细胞的死亡情况，51Cr释放法。检测剩余活细胞的数量，3H-TdR掺入法、MTT比色法、结晶紫染色法。细胞毒反应程度测定结晶紫能使活细胞染色，死细胞不着色；着色的活细胞再经脱色，通过测定其光密度（OD值）间接推知细胞毒反应的程度。结晶紫染色法三、细胞病变抑制法（一）原理主要用于检测干扰素干扰素(IFN)可诱导细胞产生抗病毒蛋白，保护细胞不受病毒感染，抑制细胞病变。将指示细胞、病毒和IFN标准品或待测样品置同一反应体系中，进行培养。病变程度与IFN活性成反比关系。指示细胞Wish