实验九 人ABO血型鉴定

实验九人ABO血型鉴定目的要求学习鉴定血型的方法。观察红细胞凝集现象，掌握ABO血型鉴定的原理。基本原理血型是指血细胞膜上特异抗原的类型。在人ABO血型系统中，红细胞膜上有A、B两种凝集原，其血清中存在能与红细胞膜上的凝集原发生反应的两种凝集素（抗体），即抗B凝集素和抗A凝集素。根据红细胞膜上有无A、B凝集原而将人的血型分为A、B、O、AB四种基本类型：红细胞膜上只有A凝集原者为A型血，其血浆中有抗B凝集素；红细胞膜上只有B凝集原者为B型血，其血浆中有抗A凝集素；红细胞膜上既没有A凝集原又没有B凝集原者为O型血，其血浆中有抗A和抗B两种凝集素；红细胞膜上既有A凝集原又有B凝集原者为AB型血，其血浆中既没有抗A凝集素也没有抗B凝集素。若将含A凝集原的红细胞与含抗A凝集素的血浆（或血清）混合，就会出现红细胞聚集成簇，这种现象称为红细胞的凝集反应（实质是抗原-抗体反应）。血型鉴定的方法就是根据这一原理设计的，将受试者的血液（主要是红细胞）分别加入标准A型血清（含抗B凝集素）和标准B型血清（含A凝集素）中，观察有无红细胞凝集现象发生，从而判断受试者的血型。ABO血型之间输血原则：材料与器械显微镜、离心机、采血针、玻片、滴管、1ml吸管、小试管、试管架、牙签、标准A型和B型血清、生理盐水、75%酒精、棉球、消毒棉签。实验步骤玻片法75%酒精棉球消毒耳垂或指端，待酒精挥发干后，以刺血针刺破皮肤，滴1~2滴血于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液。取洁净玻片一块，用蜡笔在玻片背面左右两端作好标记（A、B或抗A、抗B）。将标准的A型（抗B）和B型（抗A）血清分别滴在玻片左右两端。用滴管吸取红细胞悬液分别滴在玻片左右两端。用滴管吸取红细胞悬液分别滴1滴于玻片两端的血清上，再用两支牙签分别混匀。10min后肉眼观察有无凝集现象。如无凝集现象，等30min后再观察，并根据凝集情况对受试者的血型作出判断（图1-50）。试管法取小试管2只，分别标明A、B，再加入A型或B型标准血清与受度者红细胞悬液各1滴，混匀后立即离心（1000r/min）1min，取出后用手指轻弹试管底，使沉淀物被弹起，在良好的光源下观察。若沉淀物成团漂起，表示发生凝集现象；若沉淀物边缘呈烟雾状逐渐上升，最后使试管内液恢复红细胞悬液状态，表示无凝集现象。注意事项试管法较玻片法结果准确。肉眼看不清凝集现象时，应在低倍显微镜下观察。红细胞悬液和血清应新鲜，因污染可产生假凝集现象。凝集反应的强度因受检者抗体效价而异。在肉眼看不到凝集现象是否发生时，应在显微镜下观察并加以核实、注意是否有溶血现象，切勿把溶血当作不凝集（此处溶血和凝集均提示配血不和）。判断红细胞凝集，要有足够的时间。如室温过低，可延长观察时间，或将载玻片保持载37℃培养箱中。注意区分红细胞的叠连和凝集现象。前者经滴加1～2滴生理盐水并混匀后，现象消失，而后者则不消失。在操作中，应严格分离各种检测用品，注意吸取标准血清的滴管和搅拌用的竹签等用品绝对不能混用；用玻棒蘸血时，也都是只蘸一次，避免交叉污染。玻棒蘸血切勿过多或过少，以免影响判断结果。思考题已知某人为A型（或B型）血，在无标准血清的情况下，可否对其他人进行ABO血型鉴定？如何进行？答：行.可将已知血型的血液分离出红细胞和血清，再与未知血型的红细胞和血清进行交叉配血实验，根据交叉配血的结果得到未知血型的肝细胞抗原肝细胞抗原和血清凝集素，即可判定。同型血相输时，是否需要做交叉配血试验？为什么？也要做交叉配血试验。即使在ABO系统血型相同的人之间进行输血，在输血前必须进行交叉配血试验（corss-matchtest），即不仅把供血者的纸细胞与受血者的血清进行血清配合试验（这称为试验主侧）；而且要把受血者的红细胞与供血者的血清作配合试验（这称为试验的次侧）。这样，既可检验血型测定是否有误，又能发现他们的红细胞或血清中，是否还存在一些其它的凝集原或凝集素，足以引起红细胞凝集反应。在进行并叉式配血试验时，应在37℃下进行，以保证可能有的凝集反应得以充分显示。不同血型的人是不能相互输血的，AB血型的人并不是万能受血者。AB血型人的血清中虽不含有抗A抗B抗体，但其红细胞内含A.B.抗原。如果输用其他血型血时，极易引起输血反应。所以，AB血型不能接受其他血型的血液。

以往曾经把O型的人称为“万能供血者（universaldonor）”,认为他们的血液可以输给其他血液的人。但目前认为这种输血是不足取的，因为，虽然O型的红细胞上没有A和B凝集原，因而不会被受血者的血浆凝集，然而O型人的血浆中的抗A和抗B凝集素能与其它血型受血者的红细胞发生凝集反应。当输入的血量较大时，供血者血浆中的凝集素未被受血者的血浆足够稀释时，受血者的红细胞会被广泛凝集。基本原则是同型血相配，紧急情况下O型血可以给任何人输血，AB型可以用任何型血如何区别血液的凝集与凝固？其机理是否一样？A血液的凝集血液是由血细胞和血浆组成的悬浮液，在正常人体的心脏和血管流动过程中，红细胞均匀地分布于血浆中。在一定条件下，悬浮的红细胞集合成团，这种现象叫做凝集。血液凝集是一种血清免疫反应，当含有某一种凝集原的红细胞和抗该凝集原的凝集素相遇时，就会发生血液凝集现象。如在ABO血型系统中，含A凝集原的红细胞与含抗A凝集素的血清相混合时，红细胞就会集合成团，即发生了凝集反应。B血液的凝固血液凝固是血液从溶胶状态变成凝胶状态的过程。它的最基本的变化是血浆中溶解性的纤维蛋白原变成不溶性的纤维蛋白。然后纤维蛋白丝互相交织成网，把血细胞网罗在中间，使血液逐渐变成胶冻样的血块。最后血小板内所含的收缩性蛋白在Ca2+作用下，回缩变硬，同时析出血清。血液凝固是复杂的生物化学过程，现已发现参与凝血的因素（称凝血因子）有13种之多。目前认为凝血有如下三个步骤：C血液的沉降从人体内抽出2～3ml，放在量筒或试管里，在血液中加少量抗凝剂（如柠檬酸钠）后，血液不会凝固，但血细胞会缓慢下沉。过了一段时间后，血液主要分为上下两层，上层是淡黄色半透明的液体为血浆（约占总血量的55％），上下层之间还有薄薄的一层为白细胞。象这种血细胞与血浆的分离叫做沉降。D溶血（hemolysis）红细胞破裂，血红蛋白逸出称红细胞溶解，简称溶血。可由多种理化因素和毒素引起。在体外，如低渗溶液、机械性强力振荡、突然低温冷冻（-20℃～-25℃）或突然化冻、过酸或过碱，以及酒精、乙醚、皂碱、胆碱盐等均可引起溶血。人血浆的等渗溶液为0.9％NaCl溶液，红细胞在低于0.45％NaCl溶液中，因水渗入，红细胞膨胀而破裂，血红蛋白逸出。在体内，溶血可为溶血性细菌或某些蛇毒侵入、抗原-抗体反应（如输入配血不合的血液）、各种机械性损伤、红细胞内在（膜、酶）缺陷、某些药物等引起。溶血性细菌，如某些溶血性链球菌和产气荚膜杆菌可导致败血症。疟原虫破坏红细胞和某些溶血性蛇毒含卵磷脂酶，使血浆或红细胞的卵磷脂转变为溶血卵磷脂，使红细胞膜分解。ABO血型系统有无因母子血型不合而导致新后儿溶血的情况？血型的抗原、抗体并非同时产生。在胚胎上的RBC可检测到抗原A和抗原B，但抗体却在出生后2～8个月开始产生，8～10岁时达高峰。迄今为止已发现了人类有29个血型系统，与临床输血关系最为重要的是ABO、Rh这两个血型系统，按照红细胞膜上抗原不同，ABO血型分为A、B、O、AB四种血型，在人群中血型分布是A、B、O三种血型各占30%左右，AB型约占10%。Rh血型系统内有45种不同的抗原，D抗原最为重要。根据红细胞上D抗原的有无，可分类为Rh阳性或Rh阴性，大约85%白种人为Rh阳性，其余15%为Rh阴性，中国人约99.6%为Rh阳性，约0.4%为Rh阴性。Rh系统的其他主要抗原有C、c、E及e。从市中心血站对无锡地区调查结果来看RhD阴性人群的ABO血型所占比例是A＞O＞B＞AB。在临床输血的实践中因ABO、Rh血型不合的妊娠或输血可发生输血反应和新生儿溶血病。

ABO血型不合的输血反应和新生儿溶血病输入因ABO血型不配合的红细胞，在血管内被受血者体内的抗A或抗B破坏而引起严重的输血反应。临床主要表现为休克、血尿、肾功能衰竭等一系列症状。如抢救不及时，死亡率很高，这主要是由于在发血前将患者血型写错或检测、核对等人为的错误造成的，发生率极低。

▲ABO新生儿溶血病是母子ABO血型不合所致。主要是由于胎儿红细胞A或B抗原与来自母体的抗A或抗B抗体反应的结果，O型人具有抗A（B）IgG抗体的人数比A型或B型人具有抗A或抗BIgG抗体的人数明显为多，所以ABO溶血病以母亲为O型，子女为A型或B型的发病率为最高。ABO新生儿溶血病在第1胎时就可以发病，虽然ABO血型不合的机会较多，但发病率还是较低的，据统计我国汉族人群中ABO溶血病的发病率大约只占总分娩数的不到1%（约0.7）。

Rh血型不合对输血反应和新生儿溶血病在Rh抗原中以D为最强，以下是E、C、c、e的次序。当Rh阴性者首次输入Rh阳性血后，在4周以前很少能查出抗-D抗体，即使存在效价也低。当患者再次输注阳性血后，一般在输血后1～5天，在抗原的刺激下产生回忆反应，IgG同种抗体大量迅速增加，破坏输入的不配合的红细胞。在大多数情况下，无症状或病情较轻微，很少需要治疗。但也有少数病例发生急性溶血性输血反应，导致DIC、少尿、无尿和肾功能衰竭，甚至死亡。因此，在输血中要经常警惕这种输血反应的可能性。

夫妇因Rh血型不合引起新生儿溶血病中，以D抗原不合为最多见，临床表现也最严重。除了Rh阴性，因抗-E、抗C、抗c或抗e也可以引起新生儿溶血病，但临床表现较轻。Rh不合新生儿溶血病一般在第二胎以后发生，第一胎Rh不合胎儿时常不受影响，但当Rh阴性妇女在孕前曾接受Rh阳性的输血或曾有过Rh阳性胎儿流产史（妊娠2个月以上），此时母体内已产生抗体，当这种抗体在再一次怀有Rh阳性胎儿时，通过胎盘进入胎儿血循环，使胎儿红细胞大量破坏而发生溶血。当然，在Rh阴性个体中约有1/3不会产生抗-D抗体，所以即使一个Rh阴性的产妇多次怀孕Rh阳性的孩子也不一定会产生Rh溶血病。

因此，当夫妇ABO、Rh血型不合时，孕妇应定期做产前检测。如果发现了可以引起新生儿溶血病的不规则抗体，在妊娠初期应该每月作一次检查，在妊娠后期应每周作一次检查。

通过以上预防措施不仅提高临床安全输血，降低输血反应。同时对优生优育也起到了很好的保障作用新生儿溶血性疾病包括同族免疫性溶血、红细胞先天性的缺陷(红细胞膜、红细胞酶和血红蛋白异常)以及红细胞免疫(获得性)所引起的溶血。本节介绍的新生儿溶血病(hemo1yticdiseaseofthenewborn)是指母婴血型不合(ABO血型不合或Rh血型不合)所引起的同族免疫性溶血。

人类有26个血型系统，400多个血型抗原，产生新生儿同族免疫性溶血以ABO血型系统最多，Rh血型系统次之。

新生儿溶血的病因和发病机理

新生儿同族免疫性溶血是由于母体存在与胎儿血型不相容的血型抗体(1gG)引起。因胎儿红细胞进入母体循环，当母体缺乏胎儿红细胞所具有的抗原时，母体就产生相应的血型抗体，此抗体（由于此抗体分子较小，可以通过胎盘屏障）通过胎盘进入胎儿循环，则引起胎儿红细胞凝集、破坏。

ABO血型不合引起的溶血，多发生于O型血产妇所生的A型或B型血的婴儿。因为O型血孕妇中的抗A、抗B抗体IgG，可通过胎盘屏障进入胎儿血循坏。理论上母A型血，胎儿B型或AB型血，或母B，型血，胎儿A型或AB型血也可发病。但临床少见。主要是由于A型或B型血的产妇，其抗B、抗A的"天然"抗体主要为IgM，不易通过胎盘屏障进入胎儿血循环。

由于A，B抗原因子在自然界广泛存在，O型血妇女在孕前可能受血型物质的刺激，如寄生虫、感染、注射疫苗及进食某些含有A，B抗原的植物等，使机体产生抗A、抗B的IgG，妊娠期间这些抗体可通过胎盘进入胎儿体内而引起溶血。故本病约一半可发生在第一胎。

Rh血型不合引起的溶血，在Rh血型系统中有6种抗原(C，c；D，d；E，e)。其中以D抗原的抗原性最强。E，e，C，c次之，d目前尚未发现。国内多见于少数民族，因为少数民族妇女中Rh阴性较多。当Rh阴性妇女所怀胎儿为Rh阳性时，其D抗原通过胎盘进入母体血循环，刺激母体产生抗D抗体，此抗体通过胎盘进入胎儿，而发生抗原抗体反应，使胎儿红细胞发生凝集、破坏，出现溶血。红细胞上凝集原的类型受遗传基因的控制，血浆中的凝集素是怎样产生的？血型的遗传学特征血型是先天遗传的。出现在某一染色体的同一位置上的不同基因，称为等们基因（allele）。ABOA（H）系统中控制A、B、H抗原生成的基因即为等位基因。在染色体二倍体上只可能出现上述三个等们基因中的两个，其中一个来自父体，另一个来自母体，这两个等位基因就决定了子代血型的基因型（genotype）。这两种基因型首先决定了转糖酶的氨基酸组成和顺序，也即决定了生成的转糖酶的种类，后者转而决定表现血型抗原特异性的寡糖链的组成，也即这个人的血型表型（phenotype）。表3-7上显示了ABO系统中决定每种血型表型的可能基因型。从表上可以看出，A基因和B基因是显性基因，O基因则为隐性基因。因此，红细胞上表型O只可能来自两个O基因，而表型A或b由于可能分别来自AO和BO基因型，因而，A型或B型的父母完全可能生下O型的子女。知道了血型的遗传规律，就可以