人教版2017年高中生物第1部分专题5课题1DNA的粗提取与鉴定(选修一)课件

第1部分专题5课题1理解教材新知把握热点考向应用创新演练知识点一知识点二考向一考向二1.DNA在0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低。2．DNA不溶于酒精，但是细胞中的某些蛋

白质溶于酒精，可利用酒精将DNA和蛋

白质分开。3．DNA对蛋白酶、高温和洗涤剂有耐受性。4．在加热条件下，DNA遇二苯胺会被染成蓝色。5．哺乳动物成熟的红细胞不含细胞核，不能作为提取DNA的实验材料。若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。6．实验中加入柠檬酸钠的作用：作为抗凝剂，防止血液凝固。

[自读教材·夯基础]1．原理(1)DNA和蛋白质等其他成分在

溶液中溶解度不同，利用这一特点，选择适当的

就能使DNA充分溶解，而使

沉淀，或者相反，以达到分离目的。(2)DNA不溶于酒精溶液，但是细胞中的某些蛋白质溶于酒精，这样可将DNA和蛋白质进一步分离。不同浓度的NaCl盐浓度杂质(3)DNA的鉴定：DNA＋

。二苯胺蓝色2．DNA的耐受性(1)蛋白酶不能水解

，能水解

。(2)DNA在

变性，大多数蛋白质在

就可以变性。(3)洗涤剂不能分解

，但可以瓦解

。DNA蛋白质80℃以上60℃～80℃DNA细胞膜如何将DNA进一步提纯？提纯后是否能得到纯净的DNA?提示：利用DNA不溶于冷酒精，而蛋白质溶于冷酒精的原理进一步提纯DNA。提纯后的DNA中仍含有一定量杂质。[跟随名师·解疑难]溶解规律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液DNA溶解析出蛋白质NaCl溶液浓度从2mol/L降低的过程中，蛋白质溶解度逐渐增大部分发生盐

析沉淀溶解DNA的溶解度溶解规律2mol/LNaCl溶液0.14mol/LNaCl溶液总结①DNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同。在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时，DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低；在0.14mol/L时，DNA溶解度最小；当NaCl溶液浓度继续增加时，DNA的溶解度又逐渐增大②选择适当的盐浓度就能使DNA充分溶解，而使杂质沉淀，或者相反，以达到分离目的[自读教材·夯基础]DNA含量相对较高蒸馏水洗涤剂NaCl溶液嫩肉粉60℃～75℃木瓜蛋白1．可否选用哺乳动物成熟红细胞作实验材料，为什么？提示：不可以，因为哺乳动物成熟红细胞无细胞核。2．提纯时，为什么要选用体积分数为95%的冷酒精？提示：冷酒精提纯效果更好。

[跟随名师·解疑难]1．实验材料的选取(1)鸡血适宜作为实验材料的两个原因：一是因为鸡血细胞核中的DNA含量丰富，材料易得；二是因为鸡血细胞易吸水涨破。(2)材料的处理(以鸡血为例)：2.实验过程中的几点注意事项(1)两次使用蒸馏水的作用：第一次用蒸馏水是使鸡血细胞吸水涨破，提取核DNA；第二次用蒸馏水稀释NaCl溶液，使DNA析出。

(2)实验中三次过滤操作的比较：过滤次数过滤目的第一次过滤核外物质，除去不溶的杂质第二次过滤除DNA外的其他核内物质，尤其是核蛋白第三次过滤DNA滤液(3)用玻璃棒搅拌时，动作要缓慢且沿同一方向进行，目的是防止DNA被破坏。(4)实验过程中最好使用塑料的烧杯和试管，可减少提取过程中DNA的损失。3．结果分析及评价(1)现象是否明显及可能原因：若实验结果不明显，可能的原因是：①材料中核物质没有充分释放出来，如研磨不充分或蒸馏水的量不够。②加入酒精后摇动或搅拌时过猛，DNA被破坏。③二苯胺最好现配现用，否则二苯胺变成浅蓝色，影响鉴定效果。④析出含DNA的黏稠物时，蒸馏水要沿烧杯内壁慢慢地加入，不能一次快速加入，否则会影响实验结果。⑤实验中有多次搅拌，但是其目的及操作方法是不同的，要注意区分，否则也会影响结果。(2)分析DNA中的杂质：本实验提取的DNA粗制品中有可能仍然含有核蛋白、多糖等杂质。[特别提醒]①若选取肝脏细胞或植物细胞，则必须充分研磨。②柠檬酸钠的作用是作为抗凝剂，防止血液凝固。③吸去上清液的原因是DNA主要存在于细胞核中。[例1]关于“DNA的粗提取与鉴定”的实验，该实验依据的实验原理不是 (

)A．DNA在NaCl溶液中的溶解度，随着NaCl溶液浓度的不同而不同B．利用DNA不溶于酒精的性质，可除去细胞中溶于酒精的物质而得到较纯的DNAC．DNA是大分子有机物，不溶于水而溶于某些有机溶剂D．在沸水中DNA遇二苯胺会出现蓝色反应[解析]

本实验依据的原理是A、B、D项三个方面。必须明确的是NaCl的浓度为0.14mol/L时，DNA的溶解度最小，具体操作时用2mol/L的NaCl溶液，再加水稀释至黏稠物(主要是DNA)不再增多时，此时该溶液浓度即为0.14mol/L。C项是DNA的性质，不能作为该实验的原理。[答案]

C(1)甲基绿染色法：DNA＋甲基绿染液―→绿色。(2)紫外灯照射法：用蒸馏水配制质量分数为0.05%的溴化乙锭(EB)溶液，将玻璃棒上缠绕的白色絮状物抹到蜡纸上，再滴1滴EB溶液染色。将蜡纸放在紫外灯(260nm)下照射(暗室中)，可呈现橙红色的荧光(DNA的紫外吸收高峰在260nm处)。(3)电泳法：此方法适合鉴定纯度较高的DNA。[例2](2010·江苏高考)某生物兴趣小组开展DNA粗提取的相关探究活动，具体步骤如下：材料处理：称取新鲜的花菜、辣椒和蒜黄各2份，每份10g。剪碎后分成两组，一组置于20℃、另一组置于－20℃条件下保存24h。DNA粗提取：第一步：将上述材料分别放入研钵中，各加入15mL研磨液，充分研磨。用两层纱布过滤，取滤液备用。第二步：先向6只小烧杯中分别注入10mL滤液，再加入20mL体积分数为95%的冷酒精溶液，然后用玻璃棒缓缓地向一个方向搅拌，使絮状物缠绕在玻璃棒上。第三步：取6支试管，分别加入等量的2mol/LNaCl溶液溶解上述絮状物。DNA检测：在上述试管中各加入4mL二苯胺试剂，混合均匀后，置于沸水中加热5min，待试管冷却后比较溶液的颜色深浅，结果如下表：材料保存温度花菜辣椒蒜黄20℃＋＋＋＋＋＋－20℃＋＋＋＋＋＋＋＋＋注：“＋”越多表示蓝色越深。分析上述实验过程，回答下列问题：(1)该探究性实验的课题名称是________________________。(2)第二步中“缓缓地”搅拌，这是为了减少________。

(3)根据实验结果，得出结论并分析。①结论1：与20℃相比，相同实验材料在－20℃条件下保存，DNA的提取量较多。结论2：_________________________________________。②针对结论1，请提出合理的解释：

。

(4)氯仿密度大于水，能使蛋白质变性沉淀，与水和DNA均不相溶，且对DNA影响极小。为了进一步提高DNA纯度，依据氯仿的特性，在DNA粗提取第三步的基础上继续操作的步骤是：_______________________________，然后用体积分数为95%的冷酒精溶液使DNA析出。[解析]

如果DNA断裂，就不容易被提取出来；温度主要是通过影响酶的活性来影响生理过程。粗提取得到的DNA中含有少量的蛋白质，可以通过氯仿的特殊功能来去除蛋白质，提高DNA纯度。[答案]

(1)探究不同材料和不同保存温度对DNA提取量的影响(2)DNA断裂(3)①等质量的不同实验材料，在相同的保存温度下