生物化工试题与参考答案

生物化工试题与参考答案(仅供参考)1.简述生物工业下游技术的特点及其重要性.答:(1)生化分离技术：是对生物界自然产生的或由微生物菌体发酵的、动植物细胞组织培养的、酶反映等多个生物工业生产过程获得的生物原料，经提取分离、加工并精制目的成分，最后使其成为产品的技术，普通也称为下游技术(DownstreamProcessing)或下游工程。该技术是生物技术转化为生产力不可缺少的重要环节，其技术的进步程度对于保持和提高各国在生物技术领域内的经济竞争力是至关重要的。(2)特点：生物产品涉及传统的生物技术产品(如发酵生产的有机溶剂、氨基酸、抗生素、有机酸)和当代生物技术产品(如基因工程生产的疫苗、干扰素、活性肽等)。它们的生产不同于普通的化学品，有其本身的特点：A：发酵液或培养液中欲提取的生物物质浓度很低B：培养液是多组分混合物C：生化物质稳定性差D发酵或培养大多是分批操作E对最后产品的质量规定很高(3)重要性：A生化分离技术是生物产品工业化的必要手段，含有不可取代的地位。生物产品普通是从多个杂质中制备的，只有通过分离和纯化等下游加工过程才干制得符合使用规定的高纯度产品。B生化分离的实施十分艰难且需要很大代价。特稀的水溶液原料和高纯度产物之间的巨大差别造成的。产物稳定性差，造成起回收率不高，如抗生素产品普通要损失20%左右。C分离纯化的办法十分复杂和昂贵，产品成本中，分离与纯化部分占总成本的40-80%，精细、药用产品更高；生产过程中，下游加工的人力、物力占全过程的70%-90%。2.简述生物工业下游技术的普通环节和操作单元。答：(1)由于工业生物技术产品众多，原料广泛，产品性质多样，用途各异，因而分离与纯化环节可有不同的组合，提取和精制的办法也多个多样的，但大多数下游加工过程按生产过程的次序分为4个阶段。A预解决。B提取(初步纯化)。C精制(高度纯化)。D成品加工(2)生物工业下游技术的普通环节和单元操作图解：发酵液→预解决→细胞分离→细胞破碎→细胞碎片分离→初步纯化→精制→成品加工加热过滤匀浆离心沉淀结晶浓缩调pH离心研磨双水相吸附离子交换无菌过滤絮凝膜分离酶解溶胞膜分离萃取色谱分离干燥3.简述生物工业下游的选择原则.超滤超滤结晶电泳答:(1)采用环节数最少:产品收得率和质量控制是贯穿生物工业下游技术过程的根本。下游技术的环节越多，提取收得率也越低。如整个下游过程涉及6步操作，每步操作的分步收率为90%，则总收率仅为(0.9)6×100%=53.1%.(2)采用环节的次序要相对合理:在生物技术下游加工过程的四大环节中，固液分离、精制和成品加工选用技术范畴窄，次序不是问题。而初步纯化时，对于不同特性的产品，含有不同的纯化环节，普通的次序是：匀浆(或细胞破碎)、沉淀、离子交换、亲和吸附、凝胶过滤。(3)产品规格(4)生产规模(5)进料构成(6)产品的稳定性(7)产品的物性：涉及溶解度(受pH、盐的影响)、分子大小、功效团、稳定性(受pH值、温度等影响)、分子电荷(受pH影响，对离子交换的选择有影响)、危害性等(8)分派或持续过程(9)废水4.为什么要对发酵液进行预解决？预解决发酵液的办法有哪些？答:(1)发酵液中杂质诸多，不仅影响产品质量和收得率，对后续提取和精制也有很大影响。如高价无机离子对离子交换能力产生影响；可溶性蛋白在有机溶剂萃取和双水相萃取时易产生乳化现象，影响两相分离。(2)A减少液体粘度B调pH值。C凝聚与絮凝。D加入惰性助滤剂.E加入反映剂5.什么是凝聚和絮凝？它们在发酵液预解决时的作用是什么？答：(1)凝聚：在投加的化学物质作用下，由于胶粒之间双电层电排斥作用减少，电位下降，胶体脱稳使粒子互相聚集成1mm大小的聚集体的过程。絮凝：使用某些高分子絮凝剂将胶体粒子交联成网，形成较大(10mm)絮凝团的过程。其中絮凝剂重要起架桥作用。(2)它们是现在工业上最惯用的预解决办法之一。此法将化学药剂预先投加到悬浮液中，变化细胞、细胞碎片、蛋白质等胶体离子的分散状态，破坏其稳定性，使它们聚结成可分离的絮凝体方便分离。6.如何去除发酵液中的杂蛋白？答：一、沉淀法：(1)等电点沉淀(不完全)：运用蛋白质是两性电解质的特点，其在等电点溶解度最小的原理。(2)盐析：在酸性溶液中与阴离子如三氯乙酸盐、水杨酸盐、鞣酸盐、过氯酸盐等形成沉淀；在碱性溶液中与阳离子如Ag+,Cu2+,Fe3+,Pb2+等形成沉淀。二、变性法。(1)加热法：最惯用；不仅使蛋白质变性，同时减少液体粘度，提高过滤速率；(2)调pH值：以酸性条件去除蛋白质较多；(3)有机溶剂变性沉淀：适于解决液体量较少的场合。三、吸附法。加入某些吸附剂或沉淀剂使杂蛋白去除。如在枯草芽孢杆菌发酵液中加入氯化钙和磷酸氢二钠，两者形成庞大的凝胶，把蛋白质、菌体和其它不溶性粒子吸附并包裹在其中而除去，从而加紧过滤速率。7.影响过滤速率的因素有哪些？答：过滤速度与菌种、发酵条件(培养基构成、未用完培养基数量、削泡剂、发酵周期等)有关。(1)菌种：对过滤速率影响很大。真菌菌丝粗大，重力比阻小，发酵液容易过滤，常不需特殊解决；放线菌菌丝细而有分叉，交错成网状，重力比阻较大，过滤较困难，普通需经预解决来凝固蛋白等胶体；细菌菌体更小，过滤十分困难，必须预解决后才干过滤。(2)培养基构成：对过滤速率影响也很大。用黄豆粉、花生粉作氮源、淀粉作碳源会使过滤困难；发酵后期加入削泡剂或剩余大量未用完培养基，也会使过滤困难。(3)对的选择发酵终了时间，在菌丝自溶前必须放罐，当细胞自溶后分解产物过滤困难。8.什么是错流过滤？其优点是什么？答：(1)错流过滤：使悬浮液在过滤介质表面作切向流动(平行)，运用流动的剪切作用将过滤介质表面的固体(滤饼)移走，在整个过滤中能保持较高的滤速(滤速近似恒定)。(2)优点：过滤收率高(97-98%)；滤液质量好；解决环节少(普通用清水冲洗即可)；对染菌罐批易于解决也容易进行扩大生产。9.什么是离心机的离心因数？按照离心因数可将离心机分为哪几类？答：离心分离因数：用于评价悬浮液中固液分离的程度。Fr=ω2r/gFr表达粒子在离心机中产生的离心加速度与自由下降的加速度之比；Fr越大，越有助于分离。(2)普通按离心因数的大小对离心机分类：a.Fr＜3000，为常速离心机；b.Fr＝3000-50000，为中速离心机；c.Fr≥50000，为高速离心机；d.Fr＝2×104-106，为超速离心机。10.用碟片式离心机分离大肠杆菌基因工程菌悬浮液，已知大肠杆菌的最小颗粒为d=1.0μm,离心机的角速度ω=880rad/s,碟片数n=72，倾斜角度θ=38，碟片内径r1=0.036m，外径r2=0.081m；固体密度ρs=1050kg/m3，液体密度ρL=1020kg/m3，液体粘度μ=1.02×10-3Pa·s。⑴求上述分离条件下离心机的最大生产能力。⑵若细胞破碎后离心，此时料液粘度升至μ=8.0×10-3Pa·s，其它条件不变。如果分离的最小细胞碎片为d=0.2μm，拟定其离心机的最大生产能力。Q＝υω2Z其中：υ＝d2(ρs-ρL)g/18μZ＝2πn(r23-r13)cosθ/3g11.为什么说细胞破碎是提取胞内产物的核心环节？答：细胞破碎：用物理、化学、酶或机械办法破坏细胞壁或细胞膜的过程。破坏细胞外围使细胞内物质释放出来。工业上运用微生物生产的大多数化学物质是胞外型的，但有的目的产物存在于细胞内，如大多数酶蛋白、类脂和部分抗生素，称为胞内产物。基因重组技术生产的胰岛素、干扰素等都是胞内产物。在提取胞内产物时，首先必须将细胞破碎，使产物得以释放，才干进一步提取。因此，细胞破碎是提取胞内产物的核心环节。12.简述高压匀浆法的工作原理及其优缺点。答：是大规模细胞破碎的最惯用办法。(1)工作原理：运用高压使细胞悬浮液通过针形阀，由于忽然减压和高速冲击撞击环使细胞破裂。在高压室内压力高达几十兆帕，细胞悬浮液喷出时速率可达几百米。细胞在一系列高速运动中通过剪切、碰撞及高压到常压的变化，造成细胞破碎。破碎动力学方程：ln[1/(1-x)]=kNpax细胞破碎率k与温度等有关的速率常数。N悬浮液通过匀浆器的次数。p操作压力a有机体抵抗破碎能力的一种量度，与微生物种类有关，啤酒酵母为2.9,大肠杆菌为2.2。由上式可知，影响破碎的重要因素是压力、温度和通过匀浆器的次数，提高压力和次数都可提高破碎率，但压力增大到一定程度对匀浆器磨损加大。工业上惯用的压力为55-70MPa。(2)优点(与珠磨法比较)：操作参数少，易于拟定，适合于大规模操作；(3)缺点：不能持续冷却；破碎时需要循环2-4次(珠磨法1次操作)；珠磨法适合于多个微生物细胞的破碎，而高压匀浆不适合与丝状真菌及含有包含体的基因工程菌。13.简述外加酶法破碎细胞的原理及其特点。答：酶法溶胞：运用酶促反映分解细胞壁上特殊化学键，从而达成破坏细胞壁的目的。优点：A产品释放的选择性高B产品破坏少C抽提速率和收率高D细胞外形完整，碎片少缺点：价格高，限制了大规模应用；通用性差，不同菌种需选用不同的酶；存在产物克制。14.什么是膜的浓差极化？答：浓差极化：指在超滤过程中，由于外源压力迫使分子量较小的溶质通过薄膜，而大分子被截留于膜表面，并逐步形成浓度梯度的现象。浓度梯度使水和溶质向相反方向扩散，变化膜的透过作用15．简述影响膜使用寿命的因素。答：是由于膜本身的不可逆转的质量变化引发的膜性能变化，造成的因素有以下三类。(1)化学性劣化，水解、氧化等因素造成。(2)物理性劣化，挤压造成透过阻力大的固结和膜的干燥等物理性因素造成。(3)生物性劣化，由供应液中微生物引发的膜的劣化和由代谢产物引发的化学性劣化16.什么是膜的截留率和截断分子量？影响膜截留率的因素有哪些？答：(1)超-微滤膜截留一给定溶质的能力可用体现截留率δ表来表达：δ表＝(cb－cf)/cbcb、cf分别是主体溶质浓度和透过溶质浓度。在膜分离中，如果有浓差极化现象，使膜表面的浓度比主体浓度高，那么截留率为：δ＝(cm－cf)/cm。(2)截断相对分子质量(MWCO)：含有一定截留率(普通为90％或95％)的相对分子质量，由制造厂商而定。(3)影响因素：A溶质分子的大小。B溶质分子的形状。C

溶质分子的吸附作用。D其它高分子溶质的影响。E温度升高、浓度减少使吸附作用减小，膜截留率减少；F错流速率增大使浓差极化作用减小，膜截留率减少；G：pH、离子强度会影响蛋白质分子的构象而变化截留率。17:简述超滤-微滤的三种工作模式。答：(1)浓缩：溶质被膜系统截留在料液罐中，从而浓缩悬浮颗粒或大分子。(2)透析过滤：在悬浮颗粒或大分子的透析过滤中，产物被膜截留，低相对分子质量溶质则通过膜。(3)纯化：用于纯溶剂或低分子量溶质的纯化，它们被回收到透过液中。18.什么是纳米过滤？纳米过滤含有什么特点？它在工业中的应用状况如何？答:(1)纳米过滤(NF)：以压力差为推动力，介于超滤和反渗入之间，从溶液中分离有机小分子(300~1000)物质的膜分离过程。(2)纳米过滤的特点：A.能截留小分子有机物并可同时透析出盐，集浓缩与透析一体；B.操作压力小，节省动力能源。(3)它在制药工业,化学工业,食品工业,纯水工业,染料工业,废水解决等发面都有应用.19.什么是萃取剂的分离因数？如何的溶剂易使A、B两种溶质分离？答:(1)定义:溶剂萃取：液-液萃取，运用物质在两个互不相溶的液相分派性质不同而进行分离的过程，萃取过程中以有机溶剂为萃取剂，因而又称溶剂萃取(2)分离因数：萃取剂对溶质A和B分离能力的大小可用分离因数(β)来表征：若原料中除溶质A外尚有溶质B，由于A、B的分派系数不同，萃取相中A和B的相对含量就不同于萃余相。如果A的分派系数较B大，则萃取相中A的含量较B多，这样A和B就得到一定程度的分离。β=KA/KBβ越大，A、B的分离效果越好，即产物与杂质越容易分离。如果分离因数等于1，则A、B两种溶质在两种溶剂中的分派系数相似，不能达成分离的目的。20.萃取法选择溶剂的根据是什么？良好的溶剂应含有哪些特点？答:(1)溶剂应含有两个特性，即对产物的高容量和与水相比对产物含有高的选择性。A萃取过程的选择性：B萃取溶剂的选择C弱电解质的萃取过程与水相特性(2)A萃取容量大，单位体积的萃取溶剂能萃取大量的产物；B选择性好，抱负状况是只萃取产物而不萃取杂质；C与被萃取的液相(普通是水)互溶度小，且粘度低、界面张力小或适中，这样利于相的分散和两相分离；D溶剂的回收和再生容易；E化学稳定性好，不易分解，不腐蚀容器设备；F价格低廉；G溶剂对生物催化剂、酶或活细胞无毒性H安全性高，对人体无毒或毒性低。21.赤霉素二级错流萃取时，K为35，第一级用1/2体积乙酯，第二级用1/10体积乙酯，赤霉素的理论萃取率是多少？如果是二级逆流萃取，K为35，乙酯用量为1/2体积，赤霉素的理论萃取率又是多少？错流萃取的萃余率：φ=1/[(E1+1)(E2+1)(En+1)]总理论收得率为1-φ=1-1/[(E1+1)(E2+1)(En+1)]=1-1/[(17.5+1)(3.5+1)]E=K*VS/VFE1=35*(1/2)=17.5E2=35*(1/10)=3.5多级逆流萃取的萃余率和理论收得率分别为：φ=(E-1)/(En+1-1)1-φ=(En+1-E)/(En+1-1)E=35×(1+2)/1=17.5n=21-φ=(17.53-17.5)/(17.53-1)=99.7%22.反胶束萃取的优点是什么？答:(1)反胶束萃取成本低、溶剂可重复使用、萃取率和反萃取率高(2)分离、浓缩可同时进行，过程简便；(3)能解决外源蛋白的降解，即蛋白质(胞内酶)在非细胞环境中快速失活的问题；(4)构成反胶束的表面活性剂往往含有溶解细胞的能力，因此可用于直接从完整细胞中提取蛋白质和酶23如何形成反胶束来萃取亲水性产物？ 答:略24:影响反胶束萃取蛋白质的重要因素有哪些？答:(1)与反胶束有关的因素:A表面活性剂的种类.B表面活性剂的浓度.C有机溶剂种类D助表面活性剂及浓度(2)与水相有关的因素:APH值.B离子种类C离子强度(3)与目的蛋白质有关的因素:A蛋白质的等电点B蛋白质的大小C蛋白质的浓度D蛋白质表面的电荷分布(3)与环境有关的因素:A系统的温度B系统的压力.25简要阐明影响双水相体系中分派平衡的因素有哪些？答:(1)聚合物构成的影响：(2)双水相系统物理化学性质的影响：(3)体系中无机盐离子的影响(4)体系pH的影响：(5)体系温度的影响：(6)体系中微生物的影响26如何提高双水相体系对蛋白质萃取的选择性？ 答:(1)亲和双水相分派：亲和作用的效应是从复杂的混合物中选择性分离蛋白质，其原理是通过蛋白质与辅酶、底物、产物、克制剂和抗体的生物特异互相作用，如在亲和层析过程中那样来实现。(2)双水相系统中引入液体离子交换剂，对界面电位有很大的影响，造成在分派系统上选择性的增加，该过程能与离子交换层析同样。27为什么超临界流体有较好的物质萃取能力？答:超临界流体萃取兼有蒸馏和液液萃取的特性，由于超临界流体萃取是运用临界或超临界状态的流体,依靠被萃取物质在不同蒸汽压力下所含有的不同化学亲和力和溶解能力进行分离、纯化的分离过程。28用CO2的p-T-ρ图阐明为什么普通将SC-CO2的萃取工作区选在临界点附近？答：29.为什么在超临界流体萃取过程中使用拖带剂？答:单一组分的超临界溶剂有较大的局限性，其缺点涉及：A些物质在纯超临界流体中溶解度很低，如SC-CO2只能有效萃取亲脂性物质，对糖、蛋白质、氨基酸等极性物质，在合理的温度和压力下几乎不能萃取；B选择性不高，造成分离效果不好；C溶质溶解对温度、压力的变化不够敏感，使溶质从超临界流体中分离出来时耗费能量增加。第二点:夹带剂影响溶解度与选择性的决定因素是夹带剂与溶质分子间的范德华力或其它特定的分子间作用，如氢键等。另外，在溶剂的临界点附近，溶质溶解度对温度、压力的变化最为敏感，加入夹带剂后，混合溶剂的临界点对应变化，如能更靠近萃取温度，则可增加溶解度对温度、压力的敏感程度。30.什么是超临界流体萃取？它与液液萃取的区别是什么？答:超临界流体萃取(Supercriticalfluidextraction)，气体萃取、流体萃取或蒸馏萃取，它是运用超临界流体，即温度和压力略超出或靠近临界温度(TC)和临界压力(pc)，介于气体和液体之间的流体作为萃取剂，从固体或液体中萃取出某种高沸点或热敏性成分，以达成分离和提纯的目的。(2)超临界萃取同时含有液相萃取和精馏的特点。A临界流体萃取的独特的优点是它的萃取能力取决于流体的密度,而密度很容易通过调节温度和压力来加以控制。B超临界流体萃取中的溶剂回收很简便，并能大大节省能源。被萃取物可通过等温减压或等压升温的方法与萃取剂分离，而萃取剂只需重新压缩便可循环使用。C超临界流体萃取工艺能够不在高温下操作，因此特别适合于热稳定性较差的物质。同时产品中无其它物质残留。D超临界流体萃取的操作压力可极据分离对象选择适宜的萃取剂或添加夹带剂来控制，以避免高压带来的影响。31用示意图解释盐析法沉淀蛋白质的原理。答32.响蛋白质盐析的重要因素有哪些？答:⑴盐析剂的种类：惯用的盐有硫酸镁、硫酸铵、硫酸钠、磷酸氢二钠等.离子影响比较明显，含高价阴离子的盐效果比一价盐好，阴离子的盐析效果次序为：柠檬酸盐3->PO43->SO42->CH3COO->CL->NO3->SCN-⑵盐析的温度和pH：普通温度越低越不易形成沉淀；等电点处蛋白质最易发生沉淀⑶蛋白质浓度的影响：蛋白质浓度高，用盐量减少；但容易出现共沉淀；蛋白质浓度低，用盐量多，选择性好。⑷盐析剂的用量:同蛋白质沉淀需要盐浓度不同，如40%硫酸铵可沉淀淀粉酶，70%硫酸铵才干沉淀葡萄糖氧化酶。33阐明有机溶剂沉淀蛋白质的原理和影响因素。答原理:减少蛋白质溶液的介电常数，使蛋白质分子间的静电引力增大；(2)l 有机溶剂使蛋白质溶剂化，即蛋白质与水的结合被溶剂所取代，减少了蛋白质的溶解性；(3)l 有机溶剂可能破坏蛋白质的某种键如氢键断裂，使空间构造发生变化，某些原来包在内部的疏水基团暴露并与有机溶剂的疏水基团结合形成疏水层，使蛋白质沉淀。2.因素:温度,PH,浓度,机溶剂有机溶剂浓度34简述不同金属离子沉淀作用机理。答:沉淀作用是由于它们能与蛋白质分子中的特殊部位起反映造成的。金属离子沉淀分为三类：⑴Mn2+,Fe2+,Co2+,Cu2+,Zn2+能与羧基、氨基和含氮杂环的化合物结合；⑵Ca2+,Ba2+,Mg2+,Pb2+等能和羧基结合；⑶Ag+,Hg2+,Pb2+能与巯基结合。在上述离子中，较惯用的是Zn2+，Ca2+,Ba2+,Mg2+的硫酸盐，Mn2+对沉淀核酸特别有效。35什么是吸附作用？吸附作用分为哪几类？答(1)：物质从流体相浓缩到固体表面，从流体中分离的过程为吸附作用(2)A:理吸附：吸附物和吸附剂通过范德华力产生的吸附，是吸附中最常见的吸附现象。吸附热较小，吸附是可逆的且没有严格的选择性。范德华力是一组分子引力的总称，涉及定向力、诱导力、色散力。B:学吸附：由于在吸附剂与吸附物之间电子转移，发生化学反映而产生的。吸附热高，选择性强。吸附后较稳定，不易解吸。C:交换吸附：表面带电荷的吸附剂与溶液间发生离子交换，吸附离子后要同时放出等量的离子到溶液中。36什么是离子交换吸附？离子交换剂按照功效团的性质可分为哪几类？答:(1)离子交换剂：是一类能与其它物质发生离子交换的物质，分为无机离子交换剂(如沸石)和有机离子交换剂，有机离子交换剂是一种合成材料，又称离子交换树脂(2)离子交换树脂可交换的官能团中的活性离子决定树脂的重要性能，因此，树脂能够按照活性离子分类。如果活性离子是阳离子，即这种树脂能和阳离子发生交换，就称为阳离子交换树脂；如果是阴离子，则称为阴离子交换树脂。37什么是免疫吸附？答:免疫吸附：对于酶或蛋白质来讲，最优的吸附剂是专门针对蛋白质的固定化抗体，它能与单一表面性能的蛋白质发生特异作用，而非单纯的配位体结合，故不同于亲和吸附剂。运用免疫吸附的先决条件是制得目的蛋白质的抗体，诸多酶、受体蛋白、病毒等外源蛋白都可作为抗原，使动物产生抗体。可用变性剂、冷的蒸馏水，如2mol/L盐酸胍、0.6mol/LKCNS、稀氨水(pH10-11)等温和的洗脱剂来洗脱，对于带电的抗原，可用电泳解决。38为什么色层分离的效率是全部分离纯化技术中最高的？答:色谱分离：色层分离或层析分离，是一种物理分离办法，运用多组分混合物中各组分物理化学性质的差别，使各组分以不同程度分布在两个相中。色谱分离的基本构成是：固定相、流动相和待分离的的样品。39什么是色谱分离的阻滞因素和容量因子？容量因子的大小表达什么？答:(1)阻滞因数：溶质在色谱柱(纸、板)中的移动速率与流动相移动速率之比称为阻滞因数，用Rf表达，也称为Rf值。Rf=溶质的移动速率/流动相在色谱柱中的移动速率=溶质的移动距离/在同一时间流动相(前缘)的移动距离Rf=r/R=Vm/(Vm+Kd·Vs)=1/[1+Kd(Vs/Vm)](2)容量因子K：是衡量色谱柱对分离组分保存能力的重要参数，是溶质在固定相与流动相中的比例大小。(3)K=Kd[(1-ε)/ε]ε为床的空隙度容量因子是吸附剂对一种溶质亲和力的量度，溶质的容量因子越低，从柱中流出的越早。40多个色谱分离(共价、聚焦色层分离、凝胶过滤、亲和)的机理是什么？(家门不幸第六题)答:(1)共价作用色层分离法：是运用溶质分子与层析剂凝胶之间的共价吸附作用将目的产物与其它溶质分子分离开来的一种层析办法。首先要制备层析剂，含有共价反映活性的二硫键层析剂可用葡聚糖凝胶或琼脂糖胶作材料制得，有谷胱甘型二硫键层析剂和巯基丙基型二硫键层析剂等。(2)聚焦色层分离法：运用蛋白质分子或其它两性分子等电点的不同，在一种稳定的、持续的、线性的pH梯度中进行蛋白质的分离纯化。两性物质如蛋白质等混合物上好样后，用洗脱缓冲液淋洗，蛋白质随其下移至各自的等电点聚焦，移动速度明显减缓，最后按等电点次序流出柱外。(3)凝胶色谱：以凝胶为固定相，根据各物质分子大小不同而进行分离的色谱技术，因而又称为分子筛色谱、空间排阻色谱或尺寸排阻色谱。凝胶是一种不带电荷的含有三维空间的多孔网状构造的物质，凝胶每个颗粒的微细构造如一种筛子。(4)亲和色谱作为色谱分离的一种分支，对生物大分子化合物的分离纯化含有特别重要的意义。众所周知，生物体中许多大分子化合物含有与其构造相对应的专一分子可逆结合的特性。把与目的产物有特异亲和力的生物分子固定化后作为固定相，当含有目的产物的混合物(流动相)流经此固定相时，即可把目的产物从混合物中分离出来。41什么是正相层析和反相层析?那种层析法在生物物质的分离中经常使用？答:略42为什么晶体产品有较高的纯度？答:结晶过程含有高度的选择性，析出晶体纯度较高43从理论上解释为什么溶液浓度必须达成一定的过饱和度时才干析出结晶？答：用热力学办法能够得到关系式：ln(c1/c2)=[2Mσ(1/L1-1/L2)]/RTρR——气体常数；T——绝对温度；ρ——固体颗粒的密度；M——溶质的分子量σ——固体颗粒和溶液间的界面张力；c1、c2——等于半径为L1和L2的溶质的溶解度；若L2＞L1，则ln(c1/c2)=正数，因此c1>c2，即颗粒半径小，溶解度大。L2→∞，ln(c/c＊)=2Mσ/(LRTρ)=lns，得到颗粒大小与饱和度s的关系。若溶液中同时存在大小不同的诸多颗粒晶体，通过一段时间后，