Ig与基因工程抗体

一、Ig基本结构及其功能

四条肽链：重链（H）

轻链（L）

链间二硫键1功能区：链内二硫键可变区（VH+VL）：

特异性结合抗原不变区（CH+CL）CH1+CL：遗传标记CH2：补体结合位点

CH3：细胞结合位点铰链区2二、Ig的水解片段：IgF(ab’)2Ig2Fab+Fc胃蛋白酶木瓜蛋白酶36单抗的特点：特异性高异源蛋白----HAMA的产生#HAMA：humananti-mouseantibody7四、基因工程抗体鼠单抗的人源化改造小分子抗体抗体融合蛋白抗体库技术转基因小鼠8（一）鼠单抗的人源化改造恒定区人源化可变区人源化表位导向选择91、恒定区人源化----人鼠嵌合抗体(humanmousechimericAb)

10人鼠嵌合抗体：最大程度的保留了鼠抗的特异性和亲和力异源性较高主要用于肿瘤的治疗：1998首例人鼠嵌合抗体上市112、可变区人源化人改型抗体(reshapedantibody)表面残基人源化(venneering，镶边)12改型抗体----CDR移植抗体：仅保留鼠抗的抗原决定簇互补区（CDR）最大程度的减小了抗体的异源性亲和力下降13表面残基人源化仅改变鼠单抗可变区的表面残基最大程度的保留了鼠源性序列，亲和力高异源性强143、表位导向选择法(epitopeguidedselection)----通过抗体库技术进行人源化鼠B人B鼠VL基因库人VH基因库噬菌体抗体库技术共转染、配对

鼠-人抗体库鼠VL+人VH15鼠-人抗体库抗原筛选鼠VL+人VH可与鼠VL结合并具有活性的人VH人VL基因库配对人抗体库抗原筛选特异性与鼠单抗完全相同的人单抗16人源化抗体的特点（比嵌合

抗体）：血浆半衰期延长药物动力学较好更有实用价值#但是，技术难度大（要预先知道抗体基因序列）17应用抗肿瘤治疗抗类风湿关节炎抗移植免疫抗病毒抗过敏18（二）小分子抗体和抗体融合蛋白1920Fab段：重链V区、CH1区与L段通过链间二硫键连接1/3IgG单价结合能力木瓜蛋白酶水解

表达载体+E.coli等表达21Fv段：抗体中保留了抗原结合部位的最小片段VL/VH非共价连接表达载体，E.coli等表达22DsFv(二硫键固定的Fv段）通过点突变，在VL、VH间引入Cys，形成链间二硫键结合能力及稳定性增强23单链抗体（ScFv：singlechainFv）通过适当的寡聚核苷酸接头连接VL、VH——单链分子特异性良好单价结合分子量小（28kd），穿透力强用于疾病诊断、治疗24双链抗体----diabodyLinker变短(5—10aa）两分子间的VL、VH配对E.coli中表达亲和力强，同F(ab’)2稳定性增强

25双价双特异性抗体—bispecificantibody在双链抗体的两端引入不同的抗原结合位点在肿瘤的诊断和导向治疗中有广泛应用前景26小分子抗体的优点与应用优点：分子量小，穿透力强抗原性低体内半衰期短可在原核表达，易于基因工程操作应用：导向治疗疾病诊断27（三）噬菌体抗体库----利用噬菌体表面表达技术制备完全人源化的抗体噬菌体表面展示技术（phagesurface

display)：

——用噬菌体载体将抗体基因（Fab、ScFv）与噬菌体编码的外壳蛋白融合，并展现在单链噬菌体表面的技术。该噬菌体抗体即可特异性识别抗原，又能感染宿主菌再扩增。28

噬菌体抗体库技术的发展，依赖于

三项技术

PCR技术大肠杆菌能分泌IgG分子、片段（有活性）噬菌体展示系统逐步完善、更有效。特点：比传统的细菌筛选法更快、更有效29PCR扩增：抗体库—ScFv,Fab基因丝状噬菌体体外重组转染E.coli30噬菌体抗体库抗原吸附、洗脱特异性抗体重组的噬菌体扩增大量特异性完全人源化的抗体31（四）转基因鼠（XenomouseII）1997年美国Abgenix及CellGenesye公司人Ig轻、重链基因的1.8MbDNA转到只身Ig位点已灭活的小鼠基因组中，制备携带人Ig基因的转基因鼠32三、Ig多样性的遗传机制（一）Ig多样性遗传机制的揭秘

利根川：1976：抗体基因在个体发育过程中有重组1978：测定L链DNA序列，发现内含子1979：测定H链DNA序列，发现J区1980：证明H链中存在D区，证实有体细胞突变1983：Nature”抗体多样性的体细胞重组“-------1987年获诺贝尔奖33（二）Ig的编码基因轻链编码