褐藻多糖硫酸酯对慢性肾衰模型大鼠的保护作用

褐藻多糖硫酸酯对慢性肾衰模型大鼠的保护作用

慢性肾衰竭（crf）是由于各种原因引起的慢性肾衰竭，无法保持其基本功能。临床上，这些综合征以代谢产物和毒素的积累、水、电解质和养分平衡紊乱为特征。以及一些异常的内脏器官。目前,晚期慢性CRF患者只能依赖肾脏替代疗法(透析、肾移植)来延长生命。在CRF治疗过程中,尤其是对早、中期CRF,中医药(特别是利用海带、昆布等海洋药物)有着自身的特殊优势和丰富的临床经验。据文献报道[1~3],褐藻多糖硫酸酯(Fucoidansulfate,FS)具有改善肾功能、延缓病情进展的功效。但目前临床上应用的FS仅是粗提物,由岩藻糖、半乳糖、木糖、葡萄糖醛酸、阿拉伯糖等单糖和硫酸基组成,总有效成分含量仅50%左右;其精提物(Refinedfucoidansulfateextraction,RFSE)为高纯度的单一组分,由岩藻糖、半乳糖和硫酸基组成,总有效成分含量可达90%以上。本研究通过复制腺嘌呤所致大鼠CRF模型,探究RFSE对CRF的疗效,为临床用药提供理论参考。1设备和材料1.1仪器ALCYON300型全自动生化测定仪(美国雅培公司);MEK-6108K型血液分析仪(日本光电公司)。1.2津天药药房有限公司腺嘌呤(新乡拓新化工厂,批号:060504);醋酸地塞米松片(天津天药药业股份有限公司,批号:20050545);RFSE、FS(北京世纪博康医药有限公司);尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、总蛋白、白蛋白、考马斯亮蓝试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。1.3动物标准scxk清洁级SD大鼠88只,♂,体重180~240g,由重庆医科大学实验动物中心提供(动物使用合格证号:SCXK(渝)20070001)。2方法和结果2.1统计方法各组数据均以表示,以SPSS11.5软件处理数据。计量资料采用t检验,计数资料采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。2.2血清scr和bun、fs和fpss的检测取SD大鼠88只,随机抽取10只作为正常对照,其余大鼠ig365mg·kg-1腺嘌呤复制CRF模型,每天1次,连续20d。于复制模型结束后,根据血清Scr和BUN的含量,选取复制模型成功的大鼠60只,参考文献随机分成6组,即模型(1%羧甲基纤维素钠)、地塞米松(0.1mg·kg-1)、FS(100mg·kg-1)和RFSE高、中、低剂量(100、50、25mg·kg-1)组。ig给药,给药容量为1mL·100g-1,每天2次,连续25d。2.3对大鼠一般资料的影响观察大鼠的精神状态、活动状况、体重、体毛、大小便、摄食和饮水状况。于末次给药后,将大鼠分别置于代谢笼中收集24h尿量,并以考马斯亮蓝法检测尿蛋白。结果,正常对照组大鼠体毛呈白色、有光泽、顺滑,无脱毛现象,饮食正常,反应灵敏。模型组大鼠毛色日渐变灰、无光泽、不顺滑,脱毛现象严重,精神萎靡,活动缓慢且减少,饮食、尿量减少,体重进行性下降。各用药组较模型组上述情况有不同程度的改善,其中以RFSE高剂量组的一般状况最好。与正常对照组比较,模型组24h尿量、24h尿蛋白均显著升高(P<0.01)。与模型组比较,RFSE高、中、低剂量组24h尿量均显著降低(P<0.05),高剂量RFSE作用尤为显著;RFSE高、中、低剂量组24h尿蛋白均显著减少(P<0.01)。与FS组比较,RFSE高剂量组24h尿蛋白显著减少(P<0.01)。各组大鼠24h尿量和尿蛋白比较见表1。2.4大鼠血液学指标的比较大鼠末次给药后禁食24h,取血5~6mL,抗凝血测定红细胞数(RBC)、血红蛋白(Hb),并测血清Ca2+、P3+、BUN和Scr含量。与正常对照组比较,模型组RBC和Hb的含量显著减少(P<0.05);Scr、BUN和P3+的含量显著增加(P<0.01)。与模型组比较,RFSE高、中、低剂量组RBC和Hb的含量略有增加,但无显著性差异(P>0.05);Scr、BUN和P3+的含量显著减少(P<0.01或P<0.05)。与FS组比较,RFS高、中、低剂量组RBC、Hb、Scr、BUN、Ca2+、P3+无显著性差异(P<0.05)。各组大鼠血液学指标比较见表2;各组大鼠血液生化指标比较见表3。2.5各组小鼠肝肾组织病理变化比较麻醉处死大鼠,取肾组织行病理形态学观察。参考文献,并结合观察情况,对肾小球、肾小管-间质病变进行半定量分级。“-”级:肾小球、肾小管、间质正常;“+”级:变性肾小球数目小于肾小球总数的1/3,肾小管坏死面积小于皮质面积的1/3,间质轻度水肿伴纤维组织增生;“++”级:变性肾小球数目占肾小球总数的1/3~2/3,肾小管坏死面积占皮质面积的1/3~2/3,间质中度水肿伴纤维组织增生;“+++”级:变性肾小球数目超过肾小球总数的2/3,肾小管坏死面积超过皮质面积的2/3,间质重度水肿伴纤维组织增生。与正常对照组比较,模型组大鼠肾脏组织病理改变显著。与模型组比较,RFSE高、中剂量组肾小管-间质分级情况显著降低(P<0.01)。与FS组比较,RFSE高、中剂量组病理情况显著改善(P<0.01)。大鼠肾脏组织病理改变比较见表4;肾脏病理切片见图1。3rfse对24h尿量、尿蛋白和肾病理改变的影响研究表明,通过腺嘌呤复制的CRF模型与人类CRF所表现出来的代谢紊乱十分接近。因此,本研究应用此模型来研究RFSE对CRF的保护作用。血清Scr、BUN作为CRF诊断及严重程度分级的主要指标,又与患者多种临床症状如恶心、呕吐、心悸、胸闷、皮肤瘙痒与各种出血的发生率呈正相关,故降低血中这些毒素成为缓解肾功能衰竭的重要任务。蛋白尿是预示肾病进展与预后的重要标志之一,其对肾小球上皮细胞与近曲小管细胞等都有损伤作用;且大量蛋白尿超过肾小管重吸收能力,在肾小管内形成管形尿,加重上皮细胞损害与间质炎症,故控制尿蛋白对CRF患者有重要意义。CRF在表现上除了肾脏功能有一定的改变,还存在不同程度的贫血,因为促红细胞生成素90%在肾脏分泌,肾功能减退必然会引起促红细胞生成素的分泌减少而导致贫血,故检测RBC和Hb是作为急慢性肾衰鉴别诊断的重要依据。另外,由于CRF还存在电解质紊乱以及不同程度的肾脏病理改变,故也应进行相应考察。RFSE是从海洋中药海带中制备获得的一种由岩藻糖、半乳糖和硫酸基组成的新结构高纯度的低分子硫酸多糖类药物。其研制依据就是根据传统中医理论以及中医文献古籍关于海带、昆布利水泻浊作用,针对湿浊内阻证肾病综合征肾功能衰竭的病因病机,突出中医治疗肾病的优势,结合海洋药物研究的最新进展和现代提取工艺而确立的。本研究结果表明,高、中、低剂量RFSE均可显著改善模型大鼠的精神状态、摄食等一般状况,能显著降低模型大鼠血清中Scr、BUN和P3+的水平,减少腺嘌呤所致的24h尿量和尿蛋白的增加;高、中剂量RFSE还可使模型大鼠的肾脏病理改变得到一定程度的改善;各剂量RFSE对RBC和Hb的含量降低也显示了一定的缓解作用。与同等剂量的FS比较,RFSE对24h尿量、尿蛋白和肾脏病理改变的影响作用较好。提示RFSE对腺嘌呤所致大鼠肾功能损害有较好保护作用,能较好的延缓肾衰的进展,但