细胞培养准备 细胞培养准备2培养器皿准备

细胞培养准备2

培养器皿准备2023/10/2712023/10/272细胞培养常用器材及处理方法一、玻璃器材培养皿滴流瓶培养板刻读吸管、离心管等培养瓶烧杯、量筒等三角烧瓶2023/10/2722023/10/2732023/10/2732023/10/2742023/10/2742023/10/2752023/10/2752023/10/2762023/10/2762023/10/2772023/10/2772023/10/2782023/10/2782023/10/2792023/10/2792023/10/2710玻璃器材要求耐酸、耐高压、中性硬质使用时：干净、透明、无油迹及有毒有害物质。2023/10/27102023/10/2711玻璃器材的处理方法浸泡初次使用：水洗=>5%盐酸过夜=>自来水冲洗数遍用后：立即浸入清水，冲洗数遍刷洗洗涤剂/洗衣粉、毛刷（软毛），冲净、晾干。清洁液浸泡（浓硫酸、重铬酸钾、蒸馏水）24hr氧化性、去污力强，几乎清除所有杂质冲洗自来水冲10次，单蒸水洗2-3次，三蒸水漂洗1次，烘干。以后操作，手不能接触器材的使用端。2023/10/27112023/10/2712清洁液配方中等强度：蒸馏水1000ml；浓硫酸200ml重铬酸钾120g配制方法（做好防护）1、重铬酸钾溶解于蒸馏水，可加热熔解；2、倒入耐酸塑料桶/酸钢，缓慢、搅拌加浓硫酸；2023/10/2712头脑风暴2023/10/2713注意事项全部浸没，不能留有空气；新配制的棕红色，由于水、有机物掺入，变成墨绿色，失效；强腐蚀性，注意安全。2023/10/27132023/10/2714二、塑料器材多孔培养板培养皿培养瓶2023/10/27142023/10/272023/10/276384964824122023/10/272023/10/272023/10/2719塑料器材的处理方法自来水冲洗纱布、棉签、洗液刷洗，流水冲15-20遍；晾干，浸于清洁液15min，自来水冲洗；去离子水泡2次，每次24hr；75%乙醇浸泡过夜；三蒸水浸泡3次，每次10min；紫外线1hr；基础培养液浸泡。2023/10/27192023/10/2720三、橡皮器材橡皮制品:塞子、盖子。橡皮器材的消毒处理方法2%NaOH煮10-20min，水洗；1%盐酸浸泡30min；自来水洗8-10次；单蒸水洗三次、三蒸水洗一次。2023/10/272023/10/2721四、金属器材剪刀、镊子、手术刀、血管钳、组织镊、眼科镊及各种型号针头等2023/10/27212023/10/2722金属器材的处理方法纸擦去表面的油脂；洗衣粉/1%碳酸氢钠煮沸15分钟；水洗；95%酒精纱布擦干；包装、灭菌。2023/10/27222023/10/2723五、其他物品

滤器清洗水洗=>洗涤剂刷洗=>自来水冲洗=>蒸馏水冲洗=>三蒸水冲洗=>干燥安装滤膜、包扎滤器放滤膜=>润湿=>放滤纸=>润湿=>安装包扎、灭菌包扎出液口=>整体包扎（纱布）=>高压灭菌2023/10/27232023/10/2724包装、灭菌包装：消毒前包装，便于消毒、保存，防止落入灰尘和再次污染。消毒灭菌物理方法湿热、干热、紫外线、过滤、离心化学方法化学消毒剂、抗生素等2023/10/27242023/10/2725干热灭菌适于玻璃器皿，160度90-120min。湿热灭菌（高压灭菌器）

121℃，1.034×105Pa15-20min布类、金属、玻璃20min;液体15min2023/10/27252023/10/2726紫外线（可以穿透玻璃吗？）空气、台面、桌椅要求房间内安装不高于2.5m;各处有0.06uW/cm22023/10/2726杀菌强波段为240nm-280nmUVA，波长400nm～320nm，长波，穿透玻璃，对人体伤害大。UVB，波长320nm～280nm，中波，不被臭氧层吸收，不能穿透一般的玻璃。UVC，波长280nm～100nm，短波，被臭氧层吸收。EUV，100nm～10nm，超高频2023/10/2727过滤除菌细胞培养用液不能用高压灭菌，否则活性物质失活；方法负压（抽吸/抽滤）；正压微孔滤膜滤器滤膜：★0.22um,可滤除细菌和霉菌（支原体除外）2023/10/27272023/10/27282023/10/27282023/10/27292023/10/27292023/10/2730消毒剂75%酒精：手、台面等0.1%新洁尔灭：器械、皮肤、台面及浸泡消毒；来苏儿（2%-3%）：地面；抗菌素青、链霉素=>100ug/mL★;2023/10/27302023/10/2731各种器材包装、灭菌方法培养瓶、试剂瓶、贮液瓶、烧杯、量筒等★包扎纸包扎瓶口，线绳系牢★培养瓶，硫酸纸包扎，四个一组牛皮纸捆扎。121度20min高压灭菌或160度1.5-2hr干热灭菌。2023/10/2731202