动物支原体病的诊断与防治

动物支原体病的诊断与防治

动物流产的疾病主要是由朱立亚体那（cheriania）和反刍动物抗体（c.pecosu）引起的一过性疾病和人类疾病。衣原体所引起的病症复杂,给畜禽的生产带来了严重的损害。关于本病的诊断方法,国内外学者进行了较多研究,取得了很大进展。1精囊炎、公猪和东南角感染动物衣原体病症状的严重程度差异很大,这取决于易感动物的种类、年龄以及流行株毒力的强弱。羊、牛、猪等可表现流产、死产或产弱羔,一般流产发生于怀孕后期,流产率从20%~90%不等。分娩后胎衣滞留,有的继发感染细菌性子宫内膜炎而死亡。病畜体温升高1~2℃。年青公牛常发生精囊炎,其特征是精囊、睾丸呈慢性发炎,发病率可达10%;公猪发生睾丸炎、副睾炎、阴茎炎、尿道炎;绵羊可发生结膜炎,眼结膜充血、水肿,呈现混浊、溃疡和穿孔。犊牛、仔猪常表现为鼻流浆液黏液性分泌物,流泪,咳嗽及支气管肺炎,有时出现胸膜炎或心包炎;羔羊和犊牛也发生多发性关节炎,病初体温升高至41℃,食欲丧失,四肢跛行,关节肿大,弓背而立。幼畜感染常归于死亡。禽类感染衣原体后多呈隐性,尤其是鸡、鹅、野鸡等,仅能发现有抗体的存在。2纤维素性组织病流产病畜均有不同程度的胎膜水肿,腹腔积液;胎儿水肿,其皮肤上有瘀血斑,肝肿大,心内膜有出血点,脾肿大。患脑脊髓炎的动物病初常在腹腔、胸腔和心包有浆液渗出,以后浆膜面被纤维素性薄膜覆盖;脾和淋巴结肿大;脑膜和中枢神经系统血管充血。幼畜常表现为胃肠炎和淋巴结肿胀充血;肺有灰红病灶,有时见有胸膜炎;肝与大肠、小肠及腹膜发生纤维素性黏连;关节浆液性发炎,内有大量琥珀色液体,从纤维层一直到邻近肌肉发生水肿,充血、出血。禽类见脾肿大(只限于鹦鹉),肝肿大,有坏死灶;气囊发炎,呈现云雾样混浊或有干酪样渗出物;常有纤维素性心包炎;有些肌胃、腺胃出血。3诊断方法3.1材料的色谱分析sem无菌采集病料,包括血液、病变脏器、流产胎儿及各种分泌物制片,用Gimenez染色,包涵体中原生小体(EB)呈红色或紫红色,网状体(RB)呈蓝绿色。病理组织切片中能观察到组织细胞胞浆中衣原体包涵休,呈圆形或不规则形。3.2单层细胞培养与染色镜检用无衣原体抗体的胎牛血清和对衣原体无抑制作用的抗生素,如万古霉素、硫酸卡那霉素、链霉素、杆菌肽、庆大霉素和新霉素,制成标准组织培养液培养出盖玻片单层细胞,然后将病料悬液0.5~1.0ml接种于细胞,2~7d后取出感染细胞盖玻片,Gimenez染色镜检。3.3鸡胚卵黄囊血管活检将样品悬液0.2~0.5ml接种于6~7日龄鸡胚卵黄囊内,在39℃孵育。接种后3~10d内死亡的鸡胚卵黄囊血管充血。无菌取鸡胚卵黄囊膜涂片,若镜检发现有大量衣原体原生小体则可确定。3.4小鼠肝肾组织中渗出物和脾脏将病料经腹腔(较常用)、脑内或鼻内接种3~4日龄小鼠。腹腔接种小鼠腹腔中积累纤维蛋白渗出物,脾脏肿大。镜检时可取腹腔渗出物和脾脏;脑内和鼻内接种小鼠可制成脑膜、肺脏印片。3.5血清学诊断方法3.5.1水火鱼血清中的土地免疫指标CFT是一种特异性强的经典血清学方法,被广泛地应用于衣原体定性诊断及抗原研究上。此法要求抗原及血清必须是特异性的,补体血清必须来源于无衣原体感染动物。但血清与相应抗原结合后不能与补体结合,就会出现假阳性结果。国外已经有微量CFT检测火鸡及野禽血清中的衣原体抗体。改良CFT,即向补体中加人50ml/L新鲜的正常血清,如鸡血清,可用于检测来自不能正常与补体结合的抗体的血清,以提高其敏感性。3.5.2荧光抗体回顾性诊断若标记抗体的质量很高,可大大提高检测衣原体抗原或抗体的灵敏度和特异性,能用于临床定性诊断。微量免疫荧光法(MIF)是一种比较常用的回顾性诊断方法,但已证明仅提高诊断滴度标准并不能提高其特异性,多克隆抗体刺激或非衣原体交叉抗原可导致假阳性结果。国外研制了改良衣原体荧光检测法,即将标本涂于载玻片上,然后甲醇固定10min后将荧光抗体染液滴于标本上,置湿盒中37℃30min后冲洗、晾干,镜检。改良后用过氧化氢的氧化作用加速抗原抗体反应,缩短了试验过程。3.5.3间接血液凝试验ihaIHA是用纯的衣原体致敏绵羊红细胞后用于动物血清中衣原体抗体检测,此法简单快捷,敏感性较高。3.6类型识别3.6.1特异性片段检测试验证明,月桂酰十二烷基酸钠(SLS)和十二烷基磺酸钠(SDS)分步处理衣原体EB,是获取高浓度MOMP的理想程序。苗振川等利用衣原体的外膜主蛋白(MOMP)合成引物,以衣原体基因组为模板扩增出特异性片断以检测羊流产衣原体,特异性及灵敏度都很好。邱昌庆等通过PCR技术检测了鹦鹉热衣原体外膜主蛋白编码基因序列在不同菌株之间的差异,为今后的研究打下了分子生物学基础。最近国外建立了鹦鹉热种特异性(species-specific)PCR,用于检测衣原体的MOMP基因区中的靶序列,但要获得理想的敏感性,则要对样品进行前PCR(Pre-PCR)处理,以获得短的DNA片断进行扩增,或用套式PCR扩增,以提高其敏感性。据PCR建立的连接酶链式反应(LCR),是一种探针扩增反应,是依赖靶核苷酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。LCR由于使用两对引物,较PCR具有更高的敏感性和特异性。3.6.2血清型抗体的制备用禽源分离株血清型特异性单克隆抗体可鉴定鹦鹉热衣原体,