11级食科-食品酶学-实验指导书

食品酶学试验指导书食品科学与工程学院2023年试验一

唾液淀粉酶的催化性质试验〔4学时〕一、试验目的对酶活性的重要影响。二、试验原理糖和果糖，但不能催化淀粉的水解。可用班氏试剂检查糖的复原性。50-60℃。偏离此最适环境时，酶的活性减弱。pH不同。本试验观看pHpH6.8。颜色的不同来推断。三、试剂和器材1、试剂2%蔗糖溶液。0.3%1%淀粉溶液。0.3%氯化钠溶液调成糊状，再用100mL，煮沸至溶液变为澄清透亮。200倍数的颖唾液。0.3%0.5%淀粉溶液。0.3%氯化钠溶液调成糊状，再100mL，煮沸至溶液变为澄清透亮。⑤班氏试剂1.74g100mL150mL，取柠檬酸钠850mL150mL硫酸铜溶液注入。本试剂为天兰色，澄清透亮，可长期保存。-2g1g20mL水中，混匀后定容至100mL。⑦0.1mol/L柠檬酸溶液。0.2mol/L磷酸氢二钠溶液。2、器材四、操作步骤1、酶的专一性1淀粉酶专一性试验表管号1234561%淀粉溶液/滴4－4－4－2%蔗糖溶液/滴－4－4－4稀释唾液/mL－－11－－煮沸过的稀释唾液/mL－－－－11蒸馏水/mL11－－－－3715min班氏试剂/mL 1 1 1 1 1 12~3min现象煮沸过的稀释唾液”2min以上，〔盛有肯定量的水〕，37℃。③班式试剂与复原糖作用，会产生橘黄色混浊。2、温度对酶活力的影响淀粉酶水解的程度，可由其遇碘呈现的颜色来推断。32参加试剂。表2 温度对酶的活力影响试验表管号1231%淀粉溶液/mL1.51.51.5稀释唾液/mL11－煮沸过的稀释唾液/mL－－11号、337℃水浴中，2号试管放入冰水中。〔2号试管参加稀释唾液后，必需马上放入冰水中〕10min后取出，〔将2号管内液〕，用碘化钾-1、2、3管内淀粉唾液淀粉酶水解的程度。记录并解释结果。10min后，再用碘液试验，推断记录。3、pH值对酶活力的影响30.2mol/L磷酸0.1mol/LpH5.0~8.04种缓冲液。表3 pH值对酶的活力影响试验表锥形瓶号1234

0.2mol/L磷酸氢二钠溶液5.15mL6.05mL7.72mL9.72mL

0.1mol/L柠檬酸溶液4.85mL3.95mL2.28mL0.28mL

pH值5.05.86.88.0注：可以多组同学共同配制上述4个缓冲液，使用移液管，要准确移取。支编好号的试管中，随后于2002mL1min37℃恒温水浴中保温。42min1min31滴混合液，置于-1滴碘化钾-碘溶液时间间隔，从第一管pH对唾液淀粉酶活性的影响。五、试验要求什么试验现象呢？为什么？”中有如下描述“0.3%氯化钠的1%0.3%的氯化钠呢？-碘溶液后，3根试管皆消灭蓝色，是什么缘由造成的？请帮解决该问题。试验二卷心菜中过氧化物酶活的测定〔2学时〕一、试验原理果蔬中的往往存在过氧化物酶，过氧化物酶催化的典型反响为：H2O2+AH2→A+2H2OA，那么反响体二、试剂和仪器1、试剂0.05mol/LpH7.01.0mol/LNaC〔Buffer0.1mol/LpH7.〔Buffer、1邻苯二胺乙醇溶液、0.3过氧化氢溶液2、仪器721分光光度计〔含比色皿、秒表、常规玻璃仪器三、试验步骤1、从卷心菜中提取过氧化物酶125mL缓冲液Ⅰ，均质〔20,000rpm，2min〕后抽滤，滤过液为粗酶液。2、过氧化物酶活力测定将从卷心菜中萃取得到的过氧化物酶粗酶液置于试管中，取适量酶液稀释10-15倍左右，过滤后测定酶活。向比色皿中参加2.6mL缓冲液Ⅱ，0.1mL邻苯二胺-乙醇溶液，0.2mL过氧化氢溶液，然后参加0.1mL酶液，并马上搅匀计时，在430nm下测OD值随时间的出OD值-时间曲线，从曲线最初的直线局部斜率计算POD的活力，以每分钟OD值增加1个单位定义一个酶活单位〔U〕。四、数据记录与处理试验三卷心菜中过氧化物酶热稳定性的争论〔2学时〕一、试验原理比例取决于果蔬的品种和热烫处理的温度。二、试剂和仪器1、试剂0.05mol/LpH7.01.0mol/LNaC〔Buffer0.1mol/LpH7.〔Buffer、1邻苯二胺乙醇溶液、0.3过氧化氢溶液2、仪器721分光光度计〔含比色皿、秒表、常规玻璃仪器三、试验步骤1、从卷心菜中提取过氧化物酶承受试验二的方法提取过氧化物酶。2、过氧化物酶热处理将从卷心菜中萃取得到的过氧化物酶粗酶液置于试管中。稀释10倍后分别分别处理0.5min、1min、1.5min、2min、3min、5min、7min和10min