2015年南京市公共场所中央空调排水军团菌污染状况调查

2015年南京市公共场所中央空调排水军团菌污染状况调查

军团菌是一种广泛分布于自然界的放射性菌。它主要通过饮用水系统、空调饮料和淋浴喷嘴，与人们紧密接触水体，并以空气干燥剂的形式通过呼吸道传播，导致严重的军团菌病。军团菌病是一种以肺炎为主要表现常伴多系统损害的急性细菌性传染病,病程进展快,其临床症状不典型,常被误诊误治,病死率高达20%,常易爆发流行。自1976年军团菌正式命名以来,目前军团菌属已分离出42个种,60多个血清,引起人类疾病的主要是嗜肺军团菌种(Legionellapneumophila,LP)。我国自1982年首次证实军团菌病例以来,上海、北京、广州等地陆续有在中央空调系统的冷却塔水中检出军团菌的报道,检出率为30%~84%。随着中央空调普及率增大,军团病的防治日渐重要。2003年卫生部颁布的《公共场所集中空调通风系统卫生规范》中明确规定空调冷凝水、冷却水中不得检出军团菌。为了解我市公共场所空调冷却水中军团菌的污染情况,2008年7~8月随机抽样对我市8家酒店和1家机场集中式空调冷却塔水进行军团菌检测。1材料和方法1.1组患者的军团菌检测检测随机抽取我市现有中央空调的8家星级酒店和1家机场,在冷却塔正常运行的情况下,每家酒店采集水样1份,机场采集3份,共11份,对其进行军团菌检测。1.2试剂培养基GVPC、BCYE、军团菌乳胶凝集试剂盒均购英国OXOID,血平板,明胶,尿素,均购自北京陆桥公司。1.3试验方法1.3.1测试基础《公共场所集中空调通风系统卫生规范》附录B卫生部2006版1.3.2发酵菌种的筛选将水样摇匀后,静止15min,取200ml水样,用装有0.45孔径滤膜的滤器过滤,然后取下滤膜并剪碎,与15ml灭菌水混合洗脱并振荡5min,将洗脱液分成三份,每份5ml,分别做热处理、酸处理和不处理。做热处理:取5ml洗脱液置50℃水浴加热30min;酸处理:取5ml洗脱液加同等量的酸缓冲液处理,充分吹打摇匀放置5min;不做任何处理:直接取洗脱液接种培养基。1.3.3样品的检验各取上述三种处理液0.1ml,用灭菌L棒均匀涂抹接种GVPC平板、37℃5%CO2保湿培养7d,3d观察结果,挑取可疑菌进行鉴定。1.3.4军团菌鉴定:在GVPC平板上生长成白色、灰色、蓝色或紫色的,湿润光滑,挑起似牙膏状粘稠,呈毛玻璃状,新鲜菌落边沿有紫色光泽,定为可疑菌,分别接种BCYE、无半胱氨酸BCYE平板和血平板,37℃5%CO2保湿培养2天,在BCYE平板上生长,无半胱氨酸BCYE平板和血平板不生长,在波长360mm紫外线灯下观察有荧光。再进行革兰氏染色,镜检为革兰氏阴性杆菌,生化试验:氧化酶阴性、产生明胶酶、过氧化氢酶阳性、尿素酶阴性、不发酵葡萄糖、不还原硝酸盐、不分解马尿素盐。最后用军团菌乳胶凝集试剂盒做凝集试验,进行血清分型。2结果2.1不同嗜肺军团菌检出情况抽检的11份冷却水中共检出军团菌6株,检出率为54.5%,分别检出4株嗜肺军团菌,检出率为36.4%,2株非嗜肺军团菌,检出率为18.2%。在9家单位场所中4家单位检出嗜肺军团菌,2家单位检出非嗜肺军团菌。2.2过滤后，这些样品在干净的条件下通过三种方法处理热处理后检出军团菌5株,检出率为55.6%,酸处理检出2株,未处理检出2株,检出率均为22.2%。2.3细菌分布2株LP1、2株LP2---14,和2株军团菌属其他种,送北京流研所鉴定,结果均符合。3水样的热处理和消毒处理技术的应用我国各地报道空调系统中检出的嗜肺军团菌菌型存在地域差异,上海以LP1和LP5为主,北京以LP1、LP5和LP6,武汉以LP1为主[1.2],我市此次检出结果2株LP1、2株LP2--14,2株其他种,说明我市的优势菌型不明显。对冷却水的军团菌检验,有的省市主要采取酸处理,本次对水样的三种处理方法的检测发现,对水样的不同处理方法,检出结果不同,热处理检出率高,为55.6%,酸处理和未处理检出率均为22.2%。说明水样经热处理可提高军团菌的检出率。由于本市有集中式中央空调的公共场所有限,采集样本有限,嗜肺军团菌阳性率达到36.4%,低于其它省市。嗜肺军团菌的菌型LP1型是引起军团病的主要病原菌,一旦冷却塔水中LP1型达到一定浓度,通过气溶胶、空气形成交叉污染,极有可能引起人群感染,甚至可能引起军团病爆发。我市公共场所集中式中央空调冷却水嗜肺军团菌的首次检出,表明我市公共场所空调卫生状况令人担忧。为了预防军团菌污染的危害,应加强中央空调通风系统的卫生管理,定期组织人员清理冷却塔,去掉底部沉淀物