注射用还原型谷胱甘肽配伍稳定性研究

注射用还原型谷胱甘肽配伍稳定性研究

血液中的原生动物糖苷（gsh）是由谷氨酸、甘氨酸和l-半胱氨酸组成的小三醇酸。它对人体生命的正常功能起着重要作用，如激活氧化还原系统、激活氨基酸酶、解毒等。临床主要用于酒精及某些药物(化疗药、抗肿瘤药、抗结核药等)导致中毒的辅助治疗。为了临床安全、有效、经济、适当地使用还原型谷胱甘肽,本文参考有关文献。并按中国药典2005年版二部规定的方法,建立了HPLC法测定注射用还原型谷胱甘肽及有关物质氧化型谷胱甘肽(GSSG)的含量,考察了不同厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽在2种溶媒中的稳定性。1还原型谷胱甘肽Agilent1100高效液相色谱仪(美国Agilent公司);ZWF-J6型激光注射液微粒分析仪(天津天河医疗仪器研制中心);pHS-3B酸度计(上海雷磁仪器厂);梅勒特万分之一电子天平(瑞士Mettler公司)。还原型谷胱甘肽对照品(中国药品生物制品检定所,批号:130896,按面积归一化法计算得含量为99.11%);氧化型谷胱甘肽对照品(Sigma公司,批号:07011304,按面积归一化法计算得含量为98.02%);3种不同厂家生产的注射用还原型谷胱甘肽(A药:中国**制药有限公司,规格:0.6g·支-1,批号:061201;B药:由***国家进口,规格:0.6g·支-1,批号:6062;C药中国**制药有限公司,规格:0.3g·支-1,批号:200605263);5%葡萄糖注射液(广东大冢制药有限公司,规格:100mL·瓶-1,批号:081005);0.9%氯化钠注射液(广东大冢制药有限公司,规格:100mL·瓶-1,批号:081103);甲醇(美国TEDIA公司,色谱纯);辛烷基磺酸钠(迪马科技有限公司,色谱纯);其他试剂为分析纯;水为娃哈哈纯净水。2方法和结果2.1支的配制模拟临床配制方法进行配制。取A药、B药各1支,C药2支分别加入到100mL的5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液溶解,每个配伍液平行配制5份,置于室温下。另取5%葡萄糖注射液和0.9%氯化钠注射液作为空白对照。2.2还原型谷胱甘肽与2种注射液配伍后溶液状态观察取“2.1”项下的溶液,置于室温(25℃)下,分别于5、10、15、30、45、60、90、120、180和240min观察溶液外观,结果注射用还原型谷胱甘肽与2种注射液配伍后呈无色澄明溶液,随着时间的延长未见有颜色变化、沉淀、气泡等现象。2.3ph值的测定取“2.1”项下的溶液,置于室温(25℃)下,并分别于5、10、15、30、45、60、90、120、180和240min测定pH值,结果在4h内pH的变化不大,符合临床使用要求。2.4静脉用注射液液相液按中国药典2005年版二部附录ⅨC依法进行测定,中国药典2005年版规定:标示量为100mL或以上的静脉用注射液,除另有规定外,每1mL中含有≥10μm的微粒不得超过25粒,含≥25μm的微粒不得超过3粒。从实验结果可以得出,进口与国产制剂配伍液在0～4h内微粒情况变化不大,均符合中国药典2005年版二部的要求。2.5在测定了各溶液的含量2.5.1酸二氢钠溶液l-1辛烷基磺酸钠安捷伦ZorbaxExtend-C18(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱;流动相:0.01mol·L-1磷酸二氢钠溶液(含5mmol·L-1辛烷基磺酸钠,用磷酸调节pH至3.5)-甲醇(98∶2,v/v);检测波长:210nm;流速:1.0mL·min-1;柱温:室温;进样量:10μL。在此色谱条件下,氧化型谷胱甘肽和还原型谷胱甘肽与其他杂质峰达到基线分离,保留时间分别为3.5min和5.0min,理论塔板数按还原型谷胱甘肽峰计算≥6000,见图1。2.5.2对照品溶液的制备精密称取还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽适量,加水制成含还原型谷胱甘肽600μg·mL-1,氧化型谷胱甘肽300μg·mL-1的溶液,作为对照品溶液。2.5.3还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的还原酶活性评定精密移取对照品溶液适量,依次稀释成还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的混合溶液,还原型谷胱甘肽浓度分别为300、100、50、20、10μg·mL-1,氧化型谷胱甘肽浓度分别为150、50、25、10、5μg·mL-1,精密吸取上述对照品混合溶液各10μL进样,按外标法以峰面积(Y)对还原型谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽浓度(X)进行线性回归,得回归方程分别为Y还=49.49X还-6.804(r=0.9993),Y氧=17.30X氧-10.21(r=0.9997)。结果表明,还原型谷胱甘肽在10～300μg·mL-1和氧化型谷胱甘肽在5～150μg·mL-1与峰面积线性关系良好。2.5.4还原型谷胱甘肽色谱峰面积的rsd吸取中间浓度的混合对照品溶液,连续进样5次,计算得氧化型谷胱甘肽色谱峰面积的RSD为0.82%,还原型谷胱甘肽色谱峰面积的RSD为0.17%(n=5)。2.5.5“2.5.1”进样测定取A药,加入到100mL的5%葡萄糖注射液中,并用5%葡萄糖溶液稀释数倍,按“2.5.1”项色谱条件依次进样测定5次。结果还原形谷胱甘肽平均含量为12.9μg·mL-1,RSD为0.45%(n=5),表明方法重现性良好。2.5.6还原型谷胱甘肽色谱峰面积的rsd吸取中间浓度的混合对照品溶液,在室温下放置1、2、4、6、8h后进样,计算得氧化型谷胱甘肽色谱峰面积的RSD为1.2%,还原型谷胱甘肽色谱峰面积的RSD为1.5%(n=5)。2.5.7氯化钠注射液精密量取“2.1”项下A药配伍液各0.2mL,分别置于2个100mL容量瓶中,各加入5%葡萄糖注射液、0.9%氯化钠注射液定容,摇匀。精密移取配伍液适量,加入同体积10、20、50μg·mL-1不同浓度的还原型谷胱甘肽对照品各5份,按“2.5.1”项色谱条件测定峰面积,计算加样回收率。还原型谷胱甘肽在5%葡萄糖中平均回收率为99.8%,RSD为1.3%,在0.9%氯化钠中平均回收率为97.2%,RSD为1.8%。结果表明本方法回收率良好,见表1。2.5.8测定峰面积的测定将“2.1”项下配伍液于0、5、10、15、30、45、60、90、120、180和240min时各精密量取适量,稀释成20μg·mL-1左右的溶液,摇匀,依法测定峰面积。以0min时还原型谷胱甘肽的含量为100%,计算各样品在不同时间的相对百分含量,结果见表2。3种大输液配伍的gsh和gssg王春等实验表明样品水溶液加热后产生GSSG及Cys-Gly等降解产物,但冻干样品本身经40℃高温加速试验及长期留样观察过程中产生的降解产物主要是GSSG,而甘氨酸、谷氨酸和半胱氨酸较少,故本试验以GSSG为样品有关物质检查的指标。采用二极管阵列检测器对GSH和GSSG进行峰纯度检查,结果表明所建立的RP-HPLC法能够使主峰与杂质和辅料峰分离,且检测灵敏度较高,操作简便,结果准确、可靠。从色谱图结果来看,国