精子保存液在长江中下游亲鱼繁殖中的应用

精子保存液在长江中下游亲鱼繁殖中的应用

江苏省和浙江省广泛分布于长江和淮河流域。该鱼味道鲜美,市场价格高,养殖前景好。安徽省已经开始长吻鮠的养殖,但人工繁殖苗种的规模仍有限,制约了规模养殖的发展。2005年,我们分别在长江边的无为县小老海长江特种水产有限公司和地处淮河流域的滁州市南谯区特种水产良种基地进行长吻鮠人工繁殖,使用精子保存液进行人工授精,以保持精子活力,减少解剖雄鱼数量,提高受精率,现将试验结果报告如下。1材料和方法1.1红鲤鱼种放养无为县小老海长江特种水产有限公司亲鱼来自长江,选留时间为2004年9-12月,选活力好、体表无损伤的个体,用3%～5%的食盐或3～5mg/L的土霉素进行浸泡消毒,下池后用硫醚杀星0.15mg/L泼洒,3～5d后用恩诺杀星0.2～0.5mg/L泼洒。共选雌鱼20尾,体重2.5～5.0kg,雄鱼14尾,体重2.8～5.5kg,放入100m2的水泥池中进行培育,投喂鲜活泥鳅100kg,辅以水蚯蚓。刚入池时保持微流水,高温季节每天加水,定期进行药物预防。另2005年5月13～14日从长江捕获6尾雌鱼和2尾雄鱼立即催产。滁州市南谁区特种水产良种基地的亲本为经5～6年培育的亲鱼,体重3.5～5.5kg,14尾雌鱼,9尾雄鱼。放在面积600m2的土池中,投喂配合饲料和淡水克氏螯虾,加强水质管理,每周加水1次。1.2尾成虫的lrh-s1610g、pg24.b型混合激素治疗5月11日,在无为县小老海长江特种水产有限公司选择经培育的12尾雌鱼,6尾雄鱼进行催产注射,注射激素为9尾雌鱼注射LRH-A26～10μg+PG3～5mg/kg,3尾雌鱼注射LRH-A26～10μg+PG2～4mg+B型混合激素1IU/kg,雄鱼剂量减半,两次注射,针距12h,第1针为总剂量的1/5～1/6,第2针余量;5月21日,从长江中捕获6雌、3雄直接催产,激素剂量为LRH-A26～10μg+DOM4～5mg/kg,雄鱼减半,两次注射,针距12h,水温度24～25℃。5月24日,在滁州市南谯区特种水产良种基地催产雌鱼12尾,雄鱼3尾,剂量为LRH-A24～8μg+DOM3.5～5.0mg/kg,2次注射,针距12h,水温25～26℃。1.3mol2ho配制了精子保存液在生产中应用,配方如下:NaCl0.08mol/L,KCl0.05mol/L,CaCl2·H2O0.005mol/L,MgCl2-6H2O0.002mol/L,NaHCO30.05mol/L,pH值8.2。1.4小老海长江特种水产有限公司和南谯区特种水产有限公司生长性状在效应时间内先解剖雄鱼,将精巢在研钵内剪、磨后加入5～7倍的精子保存液保存备用,在无为县小老海长江特种水产有限公司繁殖场将其放入加冰的保温桶内,在滁州市南谯区特种水产良种基地为常温下阴凉保存。将雌鱼卵挤入盆中进行干法授精,将受精卵粘在用纱窗做成的附卵板上,每尾雌鱼可粘5～10块板。1.5特种水产有限公司的孵化环道采用流水、充气人工孵化,在无为县小老海长江特种水产有限公司繁殖场使用的是孵化桶孵化网箱,在滁州市南谯区特种水产良种基地使用的是直径8～9m的孵化环道。在孵化中均使用充气泵。1.6溶解氧气孵化水中的溶解氧为6.3～8.7mg/L。2结果2.1产率与精致率结果见表1。2.2催产4日催化剂脱膜5月11日在无为县小老海长江特种水产有限公司催产的第一批鱼在5月15日发现脱膜,孵化时间约69h,其中在5月14日有一次降温,水温降到了22～23℃。5月23日催产的发现在5月26日脱膜,孵化时间约60～62h。5月24日在滁州市南谯区特种水产良种基地催产的亲鱼在28日发现脱膜,孵化时间约56～58h。2.3精子保持活力对在5月12日保存在保温冰桶精子保存液内的精子活力情况进行观察,5月13日下午15:00,用显微镜进行观察,将精子原液滴在载波片上,精子并不活动,用水刺激后剧烈活动,剧烈活动时间约14～16s,后活力减弱,至此已经保存20h。5月14日上午9:00观察,仍然有50%～60%的精子保持活力,至此已经保存38h。冰桶内的冰已经融化,没有再加冰。下午16:00观察,精子仅有少量可以活动,至此已经保存42h。2.4繁殖、养殖无为县小老海长江特种水产有限公司基地两批共出苗约40万尾,滁州市南谯区特种水产良种基地出苗32万尾,按常规方式进行培育,出膜6～7d开始喂蛋黄水,后捞轮虫和枝角类投喂,无为县小老海长江特种水产有限公司基地的苗8d后转入网箱培育,滁州市南谯区特种水产良种基地在孵化环道培育15d后转入直径10m圆形产卵池培育,投喂经过消毒、切碎的水蚯蚓,后过渡到整条水蚯蚓,最后驯化吃鳗鱼饲料。3讨论3.1亲鱼的催产和人工利用技术亲鱼培育是人工繁殖成功的关键之一,催产结果表明,经过强化培育的亲鱼有较高的催产率,在滁州点的催产率达到了100%,而从长江直接捕获的亲鱼因受伤等情况催产率仅有66.67%,在获取和选择上都有难度,不能够获得稳定的亲本来源,催产后死亡率较高,几乎全部死亡。经多年培育的亲鱼对环境的适应能力明显增强,要大规模生产长吻鮠鱼苗必须大量培育后备亲鱼,可从子一代中培育选择,为保持种质资源的质量,应定期从长江等天然水域进行补充。而使用人工饲料和天然鲜活饵料相结合的方法是可行的。3.2lrh-2c用量单因素实验本次催产选择了几种激素组合模式,结果表明都是有效的,但脑垂体获取较为麻烦,成本也较高,本次催产光为获取鲤鱼脑垂体就购买了数百尾鲤鱼。而LRH-A2加DOM的注射效果好,作用稳定,应注意如亲鱼培育良好时,第一针剂量不宜过高,否则难以准确把握效应时间,提高受精率。如情况正常,效应时间应维持在20h左右。催产时间应选择在5月中旬为好,如果亲鱼培育不好可稍推迟。而长江野生亲鱼的产卵期则开始早,持续时间也较长。3.3精子的保存和使用本次人工授精中使用了精子保存液,取得了良好的效果,精子保存液大大延长了精子的存活时间,使人工授精操作更加从容,保持了精子活力,减少了精子浪费,提高了受精率,也减少了雄鱼的解剖。在无为试验点,用保温桶加冰用保存液保存精子在20～30h内都可以用于人工授精,而在滁州点没有加冰保存,在2h内完成了操作,效果仍很好。建议在生产规