dc-cik细胞治疗中晚期恶性肿瘤的临床疗效分析

dc-cik细胞治疗中晚期恶性肿瘤的临床疗效分析

肿瘤是中国的常见病和常见病，严重威胁着人们的健康和生活。治疗的主要方法是手术、放疗、化疗和生物治疗。在生物治疗中,DC-CIK细胞,即树突状细胞(Dendriticcell,DC)与细胞因子诱导的杀伤(Cytokineinducedkillers,CIK)细胞共培养联合治疗肿瘤,是疗效较好的过继性免疫细胞治疗方法,为预防肿瘤复发、消除患者体内残留的肿瘤细胞、改善晚期肿瘤患者的生存质量提供了新的治疗途径,目前临床应用愈来愈广泛。我中心与辽宁三早肿瘤医学研究院合作,自2001年12月至2009年12月,采用该方法治疗手术及放、化疗后的中晚期恶性肿瘤531例,取得了一定疗效,现报道如下。1数据和方法1.1手术及放疗期间ag-nors评分本组531例均经影像学、细胞学及病理学等确诊为恶性实体瘤,并根据国际抗癌联盟(UICC)分期标准进行临床分期。其中男性237例,女性294例。年龄35~80岁,平均年龄56.89岁肺癌126例(SCLC89例,NSCLC37例),乳腺癌119例,大肠癌79例,胃癌68例,肝癌41例,胰腺癌22例,肾癌18例,卵巢癌16例,前列腺癌11例,宫颈癌10例,子宫内膜癌9例,膀胱癌及鼻咽癌各6例Ⅱ期173例(32.6%),Ⅲ-Ⅳ期358例(67.4%),其中术后312例、化疗后426例、放疗后289例。Ⅳ期89例中,分别转移至肝、肺、脑、肾上腺、卵巢等脏器KPS评分80分以上62例,60~80分364例,60分以下105例。531例Ag-NORs值均<6%,其中4%~5%之间者129例,5%~6%之间者402例。局部疼痛98例,体重减少187例,胸水56例,腹水33例所有病例于手术及放、化疗后1~3个月后来院。所有患者或法定代理人知情并签署《知情同意书》,通过医院伦理委员会同意后接受细胞治疗。1.2方法1.2.1细胞培养及转染DC细胞培养COBESpectra6血细胞分离机分离健康人外周血单个核细胞,分离体积为0.3~0.4倍血容量。经Ficoll淋巴细胞分离液从单个核细胞分离淋巴细胞。用RP-MI1640培养液洗涤2次,用BTN无血清培养基混悬于培养瓶中,置37℃5%CO2孵育箱中,2小时后将悬浮细胞移出,加入IL-4(500U/ml),GM-CSF(1000U/ml)继续培养,每隔2~3天换液1次,第6天加入TNF-α(500U/ml)。CIK细胞培养:分离后淋巴细胞加入重组人IFN-γ(1000U/ml)和10%AB型人血清的RPMI1640培养液,24小时后更换成含100ng/ml小鼠抗人CD3单克隆抗体、IL-1α(1000U/ml)和IL-2(1000U/ml)的RPMI1640完全培养液继续培养,2天后换含IL-2(1000U/ml)的完全培养液隔日换液维持培养。DC-CIK细胞培养:收获第7天的DC细胞及CIK细胞,经活细胞计数后按1∶5混合培养,3天后开始应用。DC-CIK质量控制标准:流式细胞术检测CD3+CD56+NKT≥50%,CD3+CD8+≥30%。细胞存活率≥95%,不含细菌和内毒素。1.2.2客观缓解率or静脉输注DC-CIK细胞5×109/次,4次为一个疗程,每例至少治疗2个疗程,一般治疗4个疗程,最多者治疗8个疗程。1.2.3.1可测量病灶的客观缓解率(OR)参照WHO对实体瘤近期疗效判定标准,以病人治疗前及治疗后1个月MRI、CT测量病灶大小(双径测量),进行对照比较,分为完全缓解(CR)、部分缓解(PR)无变化(SD)和进展(PD)。以CR+PR统计客观缓解率(OR)。1.2.3.2临床受益率(CBR)生活质量及体力改善状况采用国际通用的卡氏评分(Karnofsky)评价,提高≥20分;疼痛程度评估采用数字分级法,疼痛程度减轻≥50%;胸腹水减少≥50%;体重量增加≥7%。1.2.3.3免疫学评价分别于治疗前、治疗后15日测定患者外周血T淋巴细胞rDNA转录活性—以细胞核仁形成区嗜银蛋白(Ag-NORs)酸性非组蛋白表达活性检测值为参考,即对T淋巴细胞银染染色,通过KL-Ⅱ免疫图像分析系统,计算淋巴细胞AgNORs面积与核面积的比值(IS%),对治疗前及治疗后的检测值进行统计学分析。1.2.3.4考察Ⅲ-Ⅳ期病人3年生存率。1.2.3.5安全性评价本组评价标准主要为WHO的抗肿瘤药急性及亚急性毒性反应分度标准,同时参考加拿大国家癌症研究所的常见毒性标准(NCIC-CTC)。外周血象:白细胞及血小板治疗前及治疗后每周复查一次,对治疗前及治疗后第4周数据进行统计学分析。肝功能、肾功能及心电图治疗前及治疗后第4周检查,并对治疗前后数据进行统计学处理,考察治疗对上述指标是否有影响。观察患者在治疗过程中所出现的不良反应,如有无发热、皮疹呕吐腹泻等毒副反应1.3统计学学处理本组资料采用SPSS12.0统计软件分析,计量资料采用t检验,以P<0.05为标准判断差异有统计学意义;等级资料采用Ridit分析,以P<0.05为标准判断差异有统计学意义;计数资料采用χ2检验,以P<0.05为标准判断差异有统计学意义。2结果2.1客观缓解率或531例中126例有可测量病灶,其中CR6例,PR53例,OR为47.8%;SD62例(49.1%);PD5例(3.1%)。2.2须中小型企业以体重、体重增加显著性试验的总cbr390例患者可评价CBR:Karnofsky评分增加≥20分者占89.8%;疼痛减轻≥50%者占71.05%;胸腹水减少≥50%者占58.33%;体重量增加≥7%者占47.7%。总CBR为93.33%。对治疗前后患者Karnofsky评分进行统计学分析,治疗后Karnofsky评分为91.36±2.20,较治疗前(72.25±3.49)升高,并具有极显著性差异。2.3是临床疗效,培养抗病剂Ag-NORs为RNA聚合酶的亚单位,是rDNA转录的调节蛋白。Ag-NORs反映rDNA的转录效率,体现淋巴细胞活性,间接反映机体免疫状态,因此对肿瘤的诊断、疗效及预后具有重要意义。本组治疗前后测定外周血T淋巴细胞AgNORs结果表明,治疗后Ag-NORs的IS均值明显升高,由(5.16±0.12)%升高至(5.68±0.08)%,56例恢复正常,较治疗前具有极显著性差异。2.4生存率2.5治疗对外周血象及心功能的影响按照WHO关于抗癌药急性和亚急性分级标准统计,治疗前后对比,患者白细胞、血小板、谷丙转氨酶、胆红素、肌酐、尿素氮及心电图均无显著性差异(表略),说明治疗对外周血象及心、肝、肾功能均无不良影响。531例治疗期间,有6例患者输入DC-CIK细胞后有一过性发热反应(温度≤37.5℃),未做处置,24小时内即降至正常,不影响继续治疗。其余无其他不良反应。3dc-cik治疗的临床效果CIK细胞是将人外周血单个核细胞在体外多种细胞因子作用后获得的一群异质细胞,是一类非主要组织相容性复合物(MHC)和非T细胞受体(TCR)限制性的免疫活性细胞,兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞非MHC限制性杀瘤作用,对各种血液系统肿瘤及实体瘤均具有广谱的杀伤效应。DC细胞是机体重要的抗原提呈细胞,在介导免疫细胞的抗肿瘤活性中具有重要作用。与DC细胞共培养的DC-CIK细胞对肿瘤的识别和杀伤能力更强。有研究表明,DC-CIK细胞体外增殖量大,溶瘤作用强。单纯CIK细胞组溶瘤率为15%,而共培养的DC-CIK细胞组溶瘤率达71%,而且分泌IFN-γ水平高,能调节和增强机体的免疫功能,提高间接杀瘤作用。临床上,DC-CIK细胞特别适用于手术、放化疗后肿瘤负荷较小的病人,在清除微小残留病灶、预防肿瘤复发转移、提高治愈率方面发挥着重要作用;对于晚期已无手术和放化疗适应症的病人,DC-CIK细胞能控制癌性浆膜腔积液,改善晚期病人的生存质量,延长生存期。最近,李卿、张效东等报道DC-CIK细胞与分子靶向药物、微创技术等联合应用,显著提高了疗效,为肿瘤的综合治疗提供了新的方式。本组结果表明,DC-CIK细胞对多种实体瘤有治疗作用,531例患者总的客观缓解率(OR)达47.8%,总临床受益率(CBR)达93.33%,Ⅲ~Ⅳ期患者3年生存率61.2%,生存期显著延长。治疗后患者T-淋巴细胞rDNA转录活性明显升高,说明免疫功能得到显著增强,这有利于改善患者的生存质量和消除肿瘤细胞。本组观察DC-CIK细胞对患者外周血象、心、肝、肾功能无明显影响,不良反应少且程度轻,安全性很好。目前细胞免疫治疗尚无标准方案,作者认为细胞回输的总数应大于2×1010才能具有临床治疗效果,且疗效通常与输注的细胞数量成正相关,但也存在个体差异,这可能与患者体内免疫环境、肿瘤的免疫原性等有关。在治疗时机的选择上,DC-CIK细胞治疗应在手术及放、化疗后尽早进行,这样既有利于协同作用消除残存的肿