黄体酮透皮给药系统的体外经皮渗透特性研究

黄体酮透皮给药系统的体外经皮渗透特性研究

外源性黄酮（pgt）是从墨西哥红薯中提取的红薯甾醇，与卵黄素分泌的内源性pgt相同。安全可靠，无副作用。这是激素替代治疗的理想激素。PGT肝脏首过效应比较大,不宜口服,临床上常用的肌肉注射又给病人带来疼痛和感染的危险。透皮给药系统是药剂学中的一个新兴领域,它具有避免胃肠道及肝的首过作用、保持血药水平稳定在治疗有效浓度范围内、改善病人的耐受性、提高用药的安全性等方面的特点和优点。本研究以聚丙烯酸酯为压敏胶骨架材料制备PGT透皮给药贴剂(PGT-TDS),经体外经皮渗透试验筛选出含有合适的透皮促进剂和主药含量的处方,为进一步开发PGT透皮给药系统打下基础。1材料和方法1.1甘油酯gmlPGT由浙江仙居制药厂提供;睾丸素由浙江仙居制药厂提供;聚丙烯酸酯购自美国3M公司;单月桂酸甘油酯(monolaurin,GML)购自日本东京化成;棕榈酸乙酯(ethylpalmitate,EPM)购自上海化学试剂一厂;聚乙二醇400(PEG400)为分析纯,购自杭州常青化工有限公司;甲醇为色谱纯,购自浙江临海浙东特种试剂厂;人皮由浙江大学医学院解剖教研室提供。1.2ths-84与cs501型超级恒温器Waters高效液相色谱仪购自美国Waters公司;THZ-82恒温振荡器购自重庆试验设备厂;CS501型超级恒温器购自重庆试验设备厂;恒温磁力搅拌器购自南通科学仪器厂;Valia-Chien扩散池自制。1.3pgt-tds的制备称取一定量的PGT、促进剂以及交联剂,放入盛有一定量聚丙烯酸酯压敏胶的容器中,加入有机溶剂,振荡混匀,形成含PGT的压敏胶溶液。将此压敏胶液均匀铺在一定面积的铝塑膜背衬层上,自然干燥后放入烘箱内,120℃固化3min,冷却后盖上防粘纸,得到PGT-TDS。另同法制备不含PGT的空白TDS作为对照品。1.4单位面积皮肤累积渗透量的测定剥离离体人皮皮下组织,取750μm厚度的皮肤,于-45℃冰箱保存。实验前,置生理盐水中浸泡45min后,将皮肤固定在Valia-Chien双室扩散池之间,皮肤真皮层面向接受室。将面积为0.50cm2的贴片揭去防粘纸后贴于皮肤上,接受室内定量加入40%PEG400生理盐水溶液3.5ml。通过恒温循环水浴,使上述两室温度维持于32±0.5℃。启动磁力搅拌器并计时,于预定时间取出200μl接受液,同时补充新鲜的40%PEG400生理盐水溶液200μl。取出的接受液中,等量加入睾丸素内标液混合离心后,用高效液相色谱法(HPLC)测定药物浓度,按以下公式计算单位面积皮肤累积渗透量Q:Q=Cn×3.5+∑i=1n−1Ci×0.2A(Q1=3.5C1‚i,n=1,2,3⋯)Q=Cn×3.5+∑i=1n-1Ci×0.2A(Q1=3.5C1‚i,n=1,2,3⋯)式中,Cn为第n个取样点测得的药物浓度(μg·ml-1);Ci为第i个取样点测得的药物浓度(μg·ml-1);A为渗透面积(cm2)。以达稳态时所得的不同时间Q对渗透时间t作线性回归,求得渗透速率和时滞,增渗倍数为含透皮促进剂组与无透皮促进组渗透速率之比。1.5pgl广告剂对pgt的渗透的影响将含不同浓度GML促进剂的PGT-TDS(表1),按1.4的实验方法进行体外经皮渗透实验,考察GML对PGT经皮渗透的影响。1.6体外经皮渗透实验将含不同浓度GML和EPM促进剂的PGT-TDS(表2),按1.4的实验方法进行体外经皮渗透实验,考察GML和EPM不同配比时对PGT经皮渗透的影响。1.7浓度对pgt的渗透将含不同浓度PGT的PGT-TDS(表3),按1.4的实验方法进行体外经皮渗透实验,考察PGT浓度对经皮渗透的影响。1.8线性范围与检出限色谱条件:色谱柱为shimadzuC18柱(250mm×4.5mm,5μm),柱温为室温,检测波长为241nm,流动相组成为甲醇:水=83.5ue5fe16.5(v/v),流速为1.0ml·min-1。标准曲线制备:精密吸取以40%PEG400生理盐水配制成的系列浓度的PGT溶液200μl,等量加入含有睾丸素内标物的甲醇液混合离心后,取20μl上清液进样。以已知PGT浓度(μg·ml-1)对PGT与睾丸素的峰面积比A进行线性回归,标准曲线方程为A=0.2557C-0.0075,线性范围为0.10～5.0μg·ml-1(r=0.9999),最低检测限为2ng·ml-1。0.10,0.80,5.0μg·ml-1低、中、高三个浓度的方法回收率为100.27%～103.29%,日内精密度小于0.91%,日间精密度小于0.87%(n=4)。PGT溶液室温放置72h后RSD为1.58,稳定性良好。色谱图见图1,由图1可见皮肤中可溶性成分对PGT和内标睾丸素测定均无干扰,PGT保留时间为7.087min,内标为5.410min。1.9统计方法数据均用均数±标准差(x¯±s)(x¯±s)表示,用t检验统计各组数据间的差异,P<0.05表示差异有统计学意义。2pgt的渗流试验由表1可见,17%～23%GML对PGT的经皮渗透有促进作用,其经皮渗透速率依次增大,当GML浓度达到23%以上时,PGT的渗透速率不再增加,显然GML对PGT产生最佳渗透作用的浓度为23%,增渗倍数达到了4.00,与PGT-TDS组相比,时滞无显著性差异(P>0.05)。由表2可见,GML和EPM合用具有协同作用。当GML浓度保持不变,EPM浓度在11%～15%范围内时,PGT的渗透速率与EPM浓度成正比。当EPM浓度保持不变,GML浓度在19%～23%范围内时,PGT的渗透速率与GML浓度成正比,而时滞变化不明显(P>0.10)。当GML浓度为23%、EPM浓度为15%时,对PGT的促渗效果最理想,经皮渗透速率达到1.50±0.64μg·cm-2·h-1,增渗倍数达到了21.43,而时滞只延长了2.3h。由表3可见,PGT含量由0.75mg·cm-2增至1.0mg·cm-2时,其经皮渗透速率增加;当含量增至1.25mg·cm-2时,PGT的渗透速率不再增加(P>0.10)。PGT时滞变化在5.2～5.7h之间,无显著差异(P>0.05)。3透皮吸收促进剂用量的研究透皮给药系统按结构基本可分为两大类:储库型和骨架型。储库型TDS是药物或经皮吸收促进剂被控释膜和其它控释材料包裹成储库,由控释膜或控释材料的性质控制药物的释放速率。骨架型TDS是药物溶解或均匀分散在聚合物骨架中,由骨架的组成成分控制药物的释放。与储库型TDS相比,骨架型TDS生产更容易,使用更舒适、方便。本研究采用聚丙烯酸酯压敏胶作为骨架材料制备PGT-TDS,该透皮给药系统只有三部分构成:(1)不含药物的背衬层;(2)含有活性成分的压敏胶骨架层;(3)保护防粘层。其压敏胶既能容纳一定量的药物和透皮促进剂,又具有足够强的粘附力和内聚强度,适合于PGT透皮给药,值得进一步开发。临床用药中PGT每天透过皮肤2～5mg,可获得有效血药浓度。但是PGT透皮速率比较低,溶液中透过皮肤的速率为0.01～0.1μg·cm-2·h-1,本研究中PGT-TDS1.0mg·cm-2体外皮肤渗透速率只有0.07±0.01μg·cm-2·h-1,远远不能达到治疗剂量。因此提高PGT的透皮速率是开发TDS的关键。文献报道,一定的浓度梯度会使药物透皮能力增强,而一些溶解度小的药物表现并不明显。本研究显示PGT含量在0.75～1.25mg·cm-2时,对其透皮时滞并无显著影响(P>0.05),含量增至1.25mg·cm-2时,PGT的渗透速率不再增加(P>0.10)。表明含量的增加对PGT经皮渗透速率有一定的促进作用。目前研究应用较多的促透剂主要有:萜类、精油及内酯、吡咯烷酮类、磷脂及磷酸盐类、有机酸及酯类和酰胺类等。透皮吸收促进剂种类不同,其作用机制和效果也不同。氮酮作为一种新型渗透促进剂,其有效用量少,毒性和皮肤刺激性均很低,是目前公认较好的促进剂之一。但文献报道氮酮对于脂溶性很强的PGT,促进效果远不如癸基甲基亚砜(增渗倍数为11.04)。GML作为一种透皮促进剂和乳化剂,在国外应用较广。GML无味,对皮肤及机体无毒,无刺激性及无过敏反应,加入给药系统传递药物时,皮肤无灼热、刺痛的感觉。本研究显示GML对PGT有良好的促渗作用,最佳促渗浓度为23%,这与文献报道的GML的最佳浓度在15%～25%结果一致。GML的促渗作用可能与其作用于角质层细胞间脂质,改变脂质排列的致密性,增加脂质流动性有关。研究还显