乳结平颗粒质量标准的研究

乳结平颗粒质量标准的研究

乳液平颗粒是一种新开发的中药制剂，由红芍、阴阳、柴胡等10多种中药组成。温阳肾阳，调拍冲任，舒肝解郁，软结硬结。动物实验显示乳结平可减少乳腺增生大鼠乳腺组织雌激素受体和孕酮受体的含量,从而有效治疗大鼠乳腺增生,具有重要的临床研究价值。临床上常用于乳腺增生病及乳瘤的预防和乳瘤的术后康复治疗。目前,作者还未见有对乳结平颗粒质量控制的相关研究报道。为有效控制产品质量,本文采用薄层色谱法对淫羊藿、赤芍进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对赤芍中的芍药苷进行含量测定。报告如下。1仪器和试剂盒1.1色谱仪和仪器高效液相色谱仪,SIL-HTA自动进样液相色谱仪(日本岛津);SPD-10AVP检测器;LC-10ADVP泵;N2000双通道色谱工作站(浙江大学智达信息工程有限公司)。1.2药品、试剂与仪器芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所;批号,110736-200422;规格,20mg)、淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所;批号,110737-200312;规格,20mg);乙腈(色谱纯),甲醇(优级纯),其他试剂均为分析纯,水为重蒸馏水;乳结平颗粒(张家口市第一医院提供,批号,050428,050429,050430)。2性别标记2.1阴性对照品溶液取本品5g,研碎,加乙醇25mL,浸渍30min,超声处理5min,滤过,滤液蒸干,残渣加乙醇lmL使溶解,作为供试品溶液。另取淫羊藿苷对照品,加甲醇制成每0.5mg/L的对照品溶液。取缺淫羊藿的阴性对照样品5g,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法《中国药典》(2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述3种溶液各6μL,分别点于同一硅胶H薄层板上,以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:1)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以三氯化铝试液,再置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱-相应的位置上,显相同的黄绿色荧光斑点。阴性对照液无相应斑点。结果见图1。2.2阴性对照品溶液取本品10g,研细,加乙醇30mL,超声处理20min,滤过,滤液蒸干,残渣加水10mL使溶解,用水饱和的正丁醇振摇提取3次,每次15mL,合并正丁醇液,用水洗涤2次,每次10mL,弃去水洗液,正丁醇液置水浴上浓缩至1mL,加适量氧化铝,拌匀,在水浴上干燥,装在中性氧化铝小柱(200目,1g,内径约1cm)上,用乙醇50mL洗脱,收集洗脱液,蒸干,残渣加甲醇0.5mL使溶解,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加甲醇制成1mg/L的溶液,作为对照品溶液。取赤芍的阴性对照样品10g,按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。照薄层色谱法《中国药典》(2010年版一部附录ⅥB)试验,吸取上述3种溶液各10μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出,晾干,喷以5%香草醛硫酸试液,加热至斑点显色清晰。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同的蓝紫色斑点。阴性对照液无相应斑点。结果见图2。3重量测定3.1流动相、柱温度色谱柱,Agilent-ZORBAXSB-C18,5μm;流动相,乙腈-水(15:85);流速,1.0mL/min;检测波长,230nm;进样量,10μL;柱温,40℃。理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3000。3.2标准曲线的绘制精密称取芍药苷对照品5mg,置25mL量瓶中,加流动相溶解并稀释至刻度,摇匀,即得对照品溶液。精密吸取该溶液3.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0μL按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积积分值为纵坐标,进样量为横坐标绘制标准曲线,计算回归方程为,Y=269785X-8499,相关系数为r=0.9998。结果表明芍药苷在0.592～4.998μg范围内呈良好线性关系。3.3仪器精密度试验分别吸取上述对照品溶液10μL,重复进样6次,记录峰面积,计算进样精密度,测得芍药苷峰面积积分值的相对标准差(relativestandarddeviation,RSD)为0.38%,表明仪器精密度良好。3.4稳定性试验精密吸取含量测定项下的供试品溶液,分别于0、1、2、4、6、8、12h测定峰面积,结果表明待测溶液在12h内稳定。3.5重复试验取同一批号(050429)的供试品,精密称取6份,按含量测定项下的方法进行处理及测定,测得芍药苷含量的RSD为2.7%。3.6加样回收率试验精密称取已知含量的乳结平颗粒供试品6份,分别添加芍药苷对照品溶液(浓度为0.1g/L的甲醇溶液)2.0、2.0、4.0、4.0、6.0、6.0mL按供试品溶液制备方法制备、测定,计算回收率,结果见表l,含量测定方法回收率良好。3.7不同含量的从乙酸乙酯-乙醇法制备pla-c-ms/ms液相色谱法取装量差异项下的本品内容物,研细,取约3.0g,精密称定,置具塞锥形瓶中加乙醇50mL,超声处理30min,滤过,残渣加乙醇15mL洗涤,滤过,合并2次滤液,置80℃水浴上浓缩至约1mL,加1.5g氧化铝,拌匀,在水浴上干燥,装在中性氧化铝柱(100～200目,2g,干法装柱,内径12～15mm)上。先用乙酸乙酯-乙醇(4:1)30mL洗脱(90滴/min),弃去洗脱液,再用甲醇50mL洗脱(90滴/min),收集洗脱液,置80℃水浴上蒸干,残渣加甲醇定容至5mL量瓶中,滤过,即得。分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液,按上述色谱条件,注入液相色谱仪,计算芍药苷含量。结果见表2,高效液相色谱法图谱见图2。4检测波长的选择淫羊藿薄层色谱鉴别中,温度在25℃以上,控制湿度在18%～47%范围内色谱效果较好,斑点清晰。检测波长的选择,芍药苷