CTP-OD-HA融合肽抑制BCR-ABL同源寡聚化逆转CML细胞恶性表型的开题报告

CTP-OD-HA融合肽抑制BCR-ABL同源寡聚化逆转CML细胞恶性表型的开题报告一、研究背景与意义慢性髓性白血病（CML）是一种由BCR-ABL基因突变引起的血液恶性肿瘤，存在同源寡聚化（oligomerization）的表型表现。BCR-ABL同源寡聚化导致信号传导通路的持续激活，进而促进细胞增殖和生存。目前广泛应用的靶向治疗药物伊马替尼（Imatinib）通过靶向BCR-ABL蛋白酪氨酸激酶活性来阻断信号传导通路，达到治疗效果。然而，近年来出现的伊马替尼耐药现象限制了其临床应用。因此，有必要寻求其他的治疗策略。研究表明，BCR-ABL同源寡聚化是CML细胞恶性表型的重要驱动力量，因此，研发针对BCR-ABL同源寡聚化的治疗策略具有重要的临床意义。以往的研究表明，融合肽是调控蛋白同源寡聚化的重要手段。CTP-OD-HA融合肽作为一种新型的抗同源寡聚化剂，已被证实具有很好的抑制BCR-ABL同源寡聚化的效果。因此，本研究旨在探究CTP-OD-HA融合肽抑制BCR-ABL同源寡聚化以逆转CML细胞恶性表型的能力。二、研究内容及方法1.研究内容本研究将探究CTP-OD-HA融合肽对CML细胞增殖和存活的影响，以及其对BCR-ABL同源寡聚化的抑制效果。具体实验内容包括：（1）通过MTT法检测CTP-OD-HA融合肽对CML细胞增殖的影响。（2）通过AnnexinV-FITC/PI双染法检测CTP-OD-HA融合肽对CML细胞凋亡的影响。（3）使用荧光共振能量转移（FRET）检测CTP-OD-HA融合肽对BCR-ABL同源寡聚化的抑制效果。（4）通过Westernblot法检测CTP-OD-HA融合肽对BCR-ABL信号传导通路相关蛋白的表达的影响。2.研究方法（1）细胞培养CML细胞系K562将在RPMI1640培养基中以10%FBS为补充，37℃、5%CO2的条件下进行培养。细胞的生长状态将通过激光显微镜和细胞计数来监测。（2）MTT法使用MTT法检测CTP-OD-HA融合肽对K562细胞增殖的影响。K562细胞将被分成不同的组，加入不同浓度的CTP-OD-HA融合肽，进行细胞培养。均等的DMSO将在每个组中用于处理。培养24小时后，MTT试剂将被加在每个孔位中，进一步培养4小时后，DMSO将被加入，以观察细胞对CTP-OD-HA融合肽的反应。（3）AnnexinV-FITC/PI双染法使用AnnexinV-FITC/PI双染法检测CTP-OD-HA融合肽对K562细胞凋亡的影响。将细胞分成不同组，加入不同浓度的CTP-OD-HA融合肽进行培养。在培养24小时后，K562细胞将被以PBS为基础液体作为洗涤，依照AnnexinV-FITC和PI双染操作步骤进行处理。待处理完成后，使用荧光显微镜观察细胞凋亡情况。（4）FRET法使用FRET法探究CTP-OD-HA融合肽对BCR-ABL同源寡聚化的影响。对K562细胞进行转染，包括A-K-Ras和B-Raf的突变序列来产生Raf是否异二聚体所需的条件。观察BCR-ABL蛋白复合物的形成。（5）Westernblot法使用Westernblot法观察信号传导通路相关蛋白的表达和CTP-OD-HA融合肽对其的影响。利用K5