保健食品毒理

保健食品平安性毒理学评价1.主要内容一、审评根本要求二、毒理学试验工程的选择三、实验动物的选择四、样品的预处理原那么五、各试验工程应注意的要点六、审评结论七、毒理学平安性评价时应考虑的问题2.一、审评根本要求1.配方原〔辅〕料、用量、理化性质2.剂量食用方法及用量3.工艺规格化产品符合配方、工艺、质量标准4.批号注意批号是否一致,益生菌、奶制品等保质期短的除外3.二、毒理学试验工程的选择1.毒理学评价的四个阶段2.普通食品及药食同源的原料3.可用于保健食品的原料4.新原料4.1.毒理学评价的四个阶段第一阶段：LD50,联合急性毒性，一次最大耐受量试验第二阶段：遗传毒性试验、30天喂养试验、传统致畸试验其中，遗传毒性试验的组合应该考虑原核细胞与真核细胞、体内试验与体外试验相结合的原那么。第三阶段：亚慢性毒性试验——90天喂养试验、繁殖试验、代谢试验。第四阶段：慢性毒性试验〔包括致癌试验〕5.2.以普通食品及药食同源的原料生产的保健食品分以下情况：以下情况免做毒理学试验〔1〕以传统工艺加工而成，食用方法与传统方式相同。〔2〕以水提物配制，服用量与常规用量相同，有关资料未提示其不平安。〔3〕列入营养强化剂或营养补充剂名单的化合物，其原料来源、生产工艺、质量符合国家相关要求，配方中含量也符合有关规定。在生产加工过程中用水提工艺以外的需做毒理学试验〔1〕服用量与常规用量相同急性毒性、三项致突变试验〔2〕服用量大于常规用量还需加做30天喂养试验，必要时进行传统致畸试验和第三阶段毒性试验

6.3.可用于保健食品的原料一般只要求做急性毒性、三项致突变试验、30天喂养试验，特殊情况除外。特殊情况：孕妇、乳母单一成份，人参、西洋参、蜂王浆等4.新原料〔1〕定义：以普通食品和可用于保健食品范围以外的动植物或提取物、微生物、化学合成物等物品的原料简称新原料。〔2〕毒理学试验原那么：对新原料及该原料生产的保健食品分别进行毒理学平安性评价，单一新原料生产的保健食品可替代。

7.〔3〕试验工程选择①无食用史需做四阶段试验②局部地区有食用史需做三阶段试验其中，100倍<摄入量<300倍需做第四阶段试验③有食用史需做二阶段试验经评价后下一阶段试验④广泛食用的原料二阶段试验

食用史包括地区、年代、人群、食用量、频率等情况

确定8.⑤化学物已有权威机构进行系统的毒理学平安性评价有资料证明所用原料与其一致如试验结果与权威机构进行的评价不一致，需进入下阶段的试验⑥有新原料的保健食品根据试验结果综合分析。

二阶段试验9.三、实验动物的选择及给样量1.根据各项实验的具体要求，合理选择实验动物常用大鼠和小鼠，品系不限，推荐使用近交系。2.动物应符合?实验动物管理条例?清洁级或清洁级以上动物合格证号及动物实验室合格证号3.灌胃量大鼠：10ml/kg•BW〔假设以水为溶剂，推荐20ml/kg•BW〕小鼠：20ml/kg•BW10.四、样品的预处理原那么1.介质的选择应选择适合于受试动物的溶剂、乳化剂、助悬剂，要求无毒、与受试物不发生反响、稳定性好。常用的介质有：蒸馏水、食用植物油、淀粉、明胶及羧甲基纤维素等。2.液体类受试物浓缩倍数应符合试验要求。浓缩方法不应破坏其有效成份，常用的有60℃～70℃减压或常压蒸发、冷冻枯燥。按工艺要求。3.袋泡茶类处理方法与产品推荐饮用方法相同推荐用：80℃～90℃浸泡30min水量为受试物的10倍，提取2次，2次提取液合并浓缩至所需浓度标明该浓缩液与受试物的比例常压，用水11.4.含乙醇类〔1〕不需浓缩的受试物乙醇浓度<15％直接进行试验乙醇浓度>15％乙醇浓度应调至15％〔2〕需浓缩的受试物乙醇浓度<15％浓缩后调至原乙醇浓度乙醇浓度>15％浓缩后调至15％乙醇浓度在进行乙醇浓度调整时必须用原酒基5.膨胀系数较高的受试物选择可溶性介质给受试物的方法：灌胃其最高浓度最大灌胃量时达不到人体推荐量的100倍，按实际到达的倍数标明受试物的膨胀系数

12.6.益生菌等微生物类保健食品在进行Ames试验或体外细胞试验时需将受试物灭活。需浓缩的应采用低温枯燥法或由企业提供所需浓度的受试物〔附方法、技术参数〕。7.以食品为载体的受试物〔1〕有营养价值按设计量进行饲料的营养成份调整，提供详细的说明。〔2〕大豆蛋白、乳清蛋白如质量、工艺等符合食品标准和平安要求，允许去除。如仅以该原料生产的，可申请免做毒理学试验。8.详细说明受试物处理方法，浓度配制情况，核对受试物的给予剂量

13.五、各试验工程应注意的要点1.急性毒性试验动物：大鼠或小鼠体重：大鼠180～200g，小鼠18～22g适应环境3～5天试验前应空腹〔一般禁食16h左右，不限制饮水〕剂量：一次性给予受试物或一日屡次给予〔间隔4～6h，24h不超过3次，合并1次剂量计算〕，设计剂量应到达人体可能摄入量100倍以上。14.2.骨髓细胞微核试验〔1〕动物：一般选用小鼠7～12周龄，体重25～30克，两种性别，至少各5只，环境适应3～5天。〔2〕剂量设计：能求出LD50，高、中、低剂量分别为1/2,1/4,1/8LD50，低剂量组不应该出现任何毒性表现。求不出LD50，高剂量10g/kg•BW人可能摄入量的100倍一次最大灌胃剂量再下设中、低剂量组，另设溶剂对照、阳性对照组〔3〕阅片：盲法阅片，计算微核率应计数1000个以上PCE，同时计算PCE/RBC的比值。PCE/RBC：是评价细胞毒性的指标，它的比值不低于阴性对照组的20％。15.3.小鼠精子畸形试验〔1〕实验动物：成年雄性小鼠6～8周龄，体重25～35克，适应环境3～5天，每组至少5只存活动物。〔2〕剂量：剂量设计原那么同微核试验〔3〕时间：动物的处死一般在首次给样量后第35天〔3〕试验结果：应详细列出畸形类型畸形类型：无钩、香蕉形、胖头、无定形、尾折叠、双头、双尾等阴性对照组的精子异常率为0.8～3.4％16.4.哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验〔1〕实验动物、剂量设计同微核试验〔2〕每只动物分析100个中期相细胞，每个剂量组不少于1000个中期相细胞。〔3〕观察工程：染色体数目的改变非整倍体、多倍体、内复制染色体结构的改变断裂、微小体、有着丝点环、无着丝点环、单体互换、双微小体、裂隙等。17.

5.小鼠睾丸染色体畸变试验〔1〕实验动物、剂量设计同精子畸形试验。〔2〕各组均于第一次给予受试物后的第12～14天将受试动物处死、制片。注意：性染色体早熟别离、常染色体早熟别离、细胞染色体结构畸变必须分别列表计算，其中细胞染色体结构畸变是最重要的观察指标。6.Ames试验(1)试验菌株TA97TA98TA100TA102自发回变菌落数(+S9)90～18030～50120～200240～320(2)剂量设计：要求有5个剂量组，外加阳性对照、阴性对照、溶剂对照。最高剂量组5mg/皿、饱和浓度、对细菌产生最小毒性浓度。对最高剂量组5mg/皿的正确理解最低剂量组0.2μg/皿每剂量组间隔<5倍

18.(3〕受试物处理含有组氨酸的受试物：1〕根据测得的组氨酸含量，假设能诱发回复突变率增加，加设组氨酸平行对照组。2〕将受试物经XAD-Ⅱ过滤洗脱预处理。对可能抑菌的受试物根据预试验，假设在5mg/皿或以下开始抑菌，需将抑菌剂量、回变列入表中，在此剂量以下再设4个剂量。含有乙醇的受试物先将乙醇去除再进行试验。受试物除菌方法高压灭菌、滤膜除菌等，所选用的方法应根据工艺确定。〔4〕试验结果：阴性结果重复2次，阳性结果重复3次。19.7.30天、90天喂养试验〔1〕动物选择原那么上选用刚断乳的大鼠，体重不应超过100g具有特殊功能，如辅助降血脂、减肥功能、通便功能的受试物，大鼠的初始体重应适当大些。〔2〕剂量设计三个剂量组和一个对照组，每剂量至少20只动物，雌雄各半。能求出LD50的受试物：以LD50的10～25％作为最高剂量组，在此根底上下设几个剂量，最低剂量组至少是人的可能摄入量的3倍。不能求出LD50的受试物：应尽可能涵盖人的可能摄入量100倍。体重：成人以60kg，儿童〔3～7岁〕以20kg计。对于人体摄入量较大的受试物，高剂量可以按最大灌胃剂量或在饲料中的最大掺入量〔30天，10％；90天，8％〕进行设计。试验报告中应说明剂量设计的根据和计算方法。20.〔3〕受试物掺入：掺入不含营养的受试物且摄入量较大〔>5％〕或掺入糖类及其它营养素应考虑调整各剂量组饲料与对照在热量、营养素等方面一致，且各种营养素的含量应符合动物饲料的有关要求。对生理需要量与毒作用剂量相近的人体必需营养素〔如VA、硒等〕，在按其推荐量设计剂量时，如该物质的剂量到达的毒作用剂量，在原有剂量设计的根底上，增设去除该物质或降低该物质剂量〔如降至NOAEL〕，联合毒性作出评价。推荐量大的受试物可根据配方去除辅料或有资料证明平安的原料，说明处理方法、理由，且与生产工艺一致。〔4〕实验操作：严格按照?保健食品检验与评价技术标准〔2003年版〕?执行，首选饲料掺入法，单笼饲养。21.〔5〕观察指标：动物生长、活动的一般状况观察。动物的体重、增重、每周进食量、总进食量、每周食物利用率。体重、进食量、食物利用率三项指标密切相关，需综合分析与判断指标的改变是否为受试物的毒性表现。血液学和血生化指标血液学必测指标包括血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及分类，必要时测定血小板数和网织红细胞数等。血生化各项必测指标包括：谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、血糖、血清白蛋白、总蛋白、总胆固醇和甘油三酯。其中血糖受禁食时间的影响较大，动物应隔夜禁食；与人相比大鼠的白蛋白/球蛋白比值变异较大，以该指标判断产品的平安性需谨慎。22.〔6〕大体解剖及组织病理学检查大体解剖观察：应对所有动物进行大体解剖观察，观察异常表现。脏器重量及脏器相对重量:肝、肾、脾、睾丸的绝对和相对重量为必测指标；主要审查脏器的相对重量。绝对重量和相对重量均改变，那么有重要的生物学意义。应使用动物处死时的体重作为计算脏器体重比。组织病理学检查:报告中应该是描述性的，应包括正常组织和异常组织的详细病理学描述。其它指标观察：根据受试物的性质及所观察到的毒性反响，判定是否增加其它敏感指标，如增加神经毒性指标的观察。23.六、审评结论的判定1.认可毒理学试验：试验设计合理，操作标准，试验结果能够证明受试物的平安性。2.属以下几种情况之一，补充资料后建议〔1〕检验报告格式不标准，需要重新出具检验报告毒理学试验报告。〔2〕数据偏离历史对照较大，需检验机构做出解释。〔3〕未提供某些试验数据，需要补充提供。3.重做试验，大会再审，属以下几种情况之一：〔1〕由于实验操作不标准，根据提供的检验报告无法评价产品的平安性，需要做除30天/90天喂养试验以外的毒理学试验；〔2〕已有数据提示可能存在平安性问题，但难以下结论，需要重复试验。24.4.对产品的平安性不予认可的情况如下：〔1〕毒理学评价的结果说明产品在推荐剂量下对人体具有一定的毒性，存在平安性问题。〔2〕产品的原料、配方存在明显的平安性问题，如配方含有“可用于保健食品的原料〞名单以外的原料，且未进行新资源食品平安性毒理学评价。〔3〕选择平安性毒理学试验不符合程序规定，未完成相应阶段的毒理学试验。〔4〕毒理、功能、兴奋剂与卫生学、稳定性试验样品的批号不一致。〔5〕未按规定提供平安性毒理学评价资料的。〔6〕30天/90天喂养试验剂量设计不合理或某些指标异常，结果不可信。25.七、毒理学平安性评价时应考虑的问题

1.试验指标的统计学意义和生物学意义在分析试验组与对照组指标统计学上的显著性时，应根据其有无剂量反响关系及与本实验室的历史性对照值范围比较的原那么来综合考虑指标差异有无生物学意义。2.生理作用与毒性作用对实验中某些指标的异常改变，在结果分析评价时要