柴胡疏肝散抗抑郁症作用的实验研究

柴胡疏肝散抗抑郁症作用的实验研究

抑郁与中医辨证分型几乎相似。主要治疗以肝脏为基础，通常采用平肝理气法。中药治疗抑郁症的作用是通过多途径、多靶点、多层次来实现的,并且副作用少,患者依从性好,复发率低,尤其重要的是,中药从整体观角度来治疗抑郁症,与抑郁症发病机制的多样性相吻合。柴胡疏肝散是疏肝理气代表方,具有疏肝理气解郁之功效。本文通过动物实验观察柴胡疏肝散抗抑郁症的作用,观察柴胡疏肝散对抑郁模型大鼠海马乙酰胆碱酯酶(AChE)与单胺氧化酶(MAO)活性的干预作用,探讨抑郁症的发病机制和柴胡疏肝散的抗抑郁症作用。1材料和方法1.1材料表面1.1.1实验动物与原料4~5月龄清洁级SD雄性大鼠60只,体重360~380g,由北京维通利华实验动物技术有限公司提供,许可证编号:SCXK(京)2007-0001。1.1.2胡疏肝散饮片免疫组化染色(SABC)试剂盒(武汉博士德生物工程有限公司);MAO与考马斯亮蓝蛋白测定试剂盒(南京建成生物工程有限公司);柴胡疏肝散饮片(黑龙江省中药材公司),饮片按柴胡:枳壳:白芍:川芎:炙甘草:香附:陈皮为6∶5∶5∶5∶3∶5∶6的比例,冷水浸泡药材2h,常规两煎,第一次1.5h,第二次1h,两次水煎液混合并过滤,经水浴蒸发浓缩成含生药0.7g/ml的浓缩药液,高压灭菌后冷藏备用;盐酸氟西汀胶囊(中美合资中化药品工业有限公司)。1.1.3x31rbsf光学显微及图像分析系统UV-2550型紫外分光光度计(日本岛津),CX31RBSF光学显微镜(日本OLYMPUS),图像分析系统(美国Alphaimager公司)。1.2方法1.2.1环境适应性放养动物在安静、温暖(18~20℃)、自然光照、通风良好、无噪音的环境中适应性喂养1w,自由进食水。通过敞箱实验将水平运动次数加垂直运动次数不足30次或超过120次的大鼠剔除,随机分为正常组、模型组、氟西汀组和中药组,每组15只。1.2.2中药组大鼠的一般情况模型组、西药组和中药组单笼饲养,进行21d慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS):电击足底(电流强度1mA,电压45mV,10s/次,间隔1min,共30次)、冰水游泳(4℃,5min)、摇晃(1次/s,15min)、夹尾(3min)、热应激(45℃,5min)、禁食+噪声、禁水+异物、昼夜颠倒、束缚(8h)、禁食+潮湿垫料(每100g垫料中加入200ml水)与禁水+倾斜鼠笼。每日随机安排1种刺激方式,每种刺激在实验过程中使用不超过3次。正常组大鼠不予任何刺激,每5只1笼。造模同时,中药组按2ml·kg-1·d-1灌胃给予柴胡疏肝散,每1次/d,共21d。氟西汀组按1.2mg·kg-1·d-1灌胃给予盐酸氟西汀,每1次/d,共21d。1.2.3动物网格划分Open-field-test测定方法:实验装置为高40cm、底边长80cm、周壁涂黑、底板为白色的无盖方箱,底板用黑线划成16cm×16cm的25个方格。在安静环境下进行,将大鼠轻放于方箱底板中心,每只动物单独进行测定,每次测定时间为3min,两只动物之间用体积分数为10%的酒精清洗方箱周壁及底板。以大鼠穿越底面格数为水平活动得分,大鼠4只脚均在同一格子内为一格,穿越一格计1分,如大鼠沿线行走,以每10cm为1分;以大鼠直立次数为垂直活动得分,双足离开底面为标志。1.2.4大鼠红糖偏好度计算24h的禁食禁水后,测定1h动物饮用1%蔗糖水和纯水的量,然后应用公式:1%蔗糖水消耗量/(1%蔗糖水消耗量+纯水消耗量)×100%,计算出各组大鼠糖水偏爱度值。1.2.5积分光密度检测大鼠行为学测试后,全身灌注固定,断头取脑,分离海马,固定,包埋,切片,PBS冲洗,滴加3%H2O2,封闭,加一抗,加二抗,加标记物,显色,复染,脱水,封片,光镜下观察并用MoticMed6.0数码医学图像分析系统计算积分光密度。1.2.6比色法测定了mao活性1.3统计方法2结果2.1表1显示了各组大鼠的行为评估。表4显示了每组的老鼠行为评估2.2大鼠海马区ache蛋白表达水平各组积分光密度,与模型组比较(14.04±3.67),正常组大鼠海马区AChE蛋白表达显著升高(7.67±1.45)(P<0.05);与模型组比较,氟西汀组、中药组AChE蛋白表达明显降低(7.85±1.52、8.29±2.06)(P<0.05)。见图1。2.3氟西汀对u/mgpert的影响与对照组MAO活性比较[(24.19±8.03)U/mgprot],模型组[(39.85±10.16)U/mgprot]明显升高(P<0.05),氟西汀组与中药组[(26.39±6.57),(27.28±5.88)U/mgprot]较模型组降低(P<0.05)。3胡椒疏肝散对慢性应激抑郁症大鼠mao和ache活性的影响现代病理研究表明,抑郁症是一类受遗传因素影响,以生物学为基础,以社会、心理、文化等因素为“触发媒介”,是多种因素作用的综合病理产物。本文结果显示,模型组大鼠大鼠活动减少,兴趣丧失,快感缺乏,说明造模成功。而中药组和西药组均能明显增加动物的水平活动和垂直活动次数,提高抑郁大鼠的糖水偏爱度,增加大鼠的体重。表明柴胡疏肝散能改善大鼠的抑郁状态,能起到良好的抗抑郁作用,与氟西汀相似本实验结果显示,造模可以明显升高MAO与AChE活性,而柴胡疏肝散可以明显降低两个酶的活性。这说明,AChE活性可能是抑郁症的发病原因之一。研究表明,柴胡疏肝散对抑郁症有明确疗效,并且药理研究已经证实柴胡疏肝散在产生显著抗抑郁疗效的同时,柴胡疏肝散能抑制应激导致大鼠促肾上腺皮质激素、β-内啡肽水平升高的变化,提示柴胡疏肝散对慢性应激抑郁模型大鼠的下丘脑-垂体-肾上腺轴功能具有一定的调节作用。推测柴胡疏肝散可能是通过调节胆碱能神经系统与单胺类神经系统,进而调节下丘脑-垂体-肾上腺轴,降低皮质醇水平,进而发挥抗抑郁作用。鉴于