锁阳多糖对大鼠胃溃疡的抗溃疡作用及其机制研究

锁阳多糖对大鼠胃溃疡的抗溃疡作用及其机制研究

慢性溃疡是指由脾胃和十二指肠引起的慢性溃疡。这是循环系统中常见的疾病和疾病。其病因和发病机制非常复杂。主要怀疑粘膜损伤因素与粘膜自我保护修复因素之间的不平衡有关。目前，西药治疗的药物主要是抗酸药物、受体ii、抗子泵抑制剂、胃粘膜保护剂、抗生素等。长期使用这些药物会产生不同程度的副作用。因此,各国学者在努力寻找一种疗效好、不良反应小的新型抗溃疡药物,而近年来发现许多中药多糖具有抗溃疡作用,本实验通过复制乙酸损伤性大鼠胃溃疡模型,观察锁阳多糖的抗溃疡作用及其机制。1材料表面1.1多糖含量的提取锁阳多糖由内蒙古医学院药学院罗素琴教授指导提取,多糖含量为92.5%;盐酸雷尼替丁胶囊:河北永丰药业有限公司,批号:20100304。1.2试剂与试剂盒乙醚:天津市化学试剂三厂,批号:20090216;甲醛溶液:天津市盛奥化学试剂有限公司生产,批号:20100420;36%乙酸:天津市风船化学试剂科技有限公司生产,批号:090531;超氧化物岐化酶(SOD)试剂盒、丙二醛(MDA)试剂盒,南京建成生物工程研究所生产,批号:20100523、20100615;大鼠血小板活化因子(PAF)、前列腺素E2(PGE2)、表皮生长因子(EGF)酶联免疫试剂盒:RandD,进口分装批号:201008。1.3实验动物及仪器清洁级Wistar健康大鼠,雌雄各半,体重(200±20)g,由内蒙古大学实验动物中心提供,合格证号:SCXK(蒙)2002-0001。1.4仪器、试剂与仪器康乐电热恒温水温箱,上海医疗器械七厂;TD24-WS低速台式离心机,长沙湘仪离心机仪器有限公司;Molcell细胞型超纯水机,上海摩勒生物科技有限公司;上皿电子天平,上海精科天平;StemiDV4体视显微镜,德国蔡司;RT-2100CSP-723紫外分光光度计,上海光谱仪器有限公司;酶标仪,上海Rayto公司。2方法2.1大、中大鼠的溃疡取健康Wistar大鼠60只,雌雄各半,颗粒饲料喂养1周,随机分为6组,即正常对照组(蒸馏水10mL/kg)、模型对照组(蒸馏水10mL/kg)、锁阳多糖高(400mg/kg)、中(200mg/kg)、低剂量组(100mg/kg)和阳性对照组给予盐酸雷尼替丁胶囊(50mg/kg)。将正常对照组以外的各组大鼠在乙醚麻醉下,打开腹腔,取出胃,以0.01mL刻度的注射器将10%乙酸溶液0.04mL注射至腺胃部前壁的浆膜下,术后第2d开始灌胃给药,第14天将大鼠割取颈动脉取血,以3×103r·min-1的速度在低温离心机下离心20min,取血清置-20℃冰箱保存待测,而后将大鼠处死,剖腹结扎幽门部和贲门部,取胃,向胃内注入1%甲醛溶液10mL,然后将胃浸泡于10%甲醛溶液中固定15min,沿胃大弯剪开胃,在注射乙酸溶液部位相应的黏膜面观察溃疡形成情况,在解剖显微镜(10×)下用游标卡尺测量溃疡面的横径及纵径,溃疡面积(S)按公式S=π×d1×d2×1/4(π为圆周率取值3.14,d1,d2分别为溃疡面的最长径和最短径)计算,测定溃疡面积(mm2)作为溃疡指数,计算溃疡抑制百分率,比较各组间差异。溃疡抑制率=(模型组溃疡指数-给药组溃疡指数)/模型组溃疡指数×100%。采用紫外分光光度计法、酶联法,严格按照试剂盒步骤检测血清中SOD、MDA、PAF、PGE2、EGF。2.2实验数据比较采用SPSS14.0统计软件进行分析,两组组间比较采用t检验,实验数据以均数加减标准差(x¯±s)(x¯±s)表示,P<0.05为有显著性差异。3结果3.1锁阳多糖对大鼠0.0.4.3临床疗效的影响模型组因灌胃失误死亡1只,锁阳多糖低剂量组于术后26h死亡1只,锁阳多糖中、低剂量组因麻醉各死亡1只。锁阳多糖高、中剂量组溃疡指数较模型对照组明显降低(P<0.01),其中又以雷尼替丁组及锁阳多糖高剂量组溃疡指数值最低。表明锁阳多糖对大鼠乙酸损伤型胃溃疡具有明显的治疗作用。溃疡指数和溃疡抑制率的比较结果见表1。3.2影响胃肠功能的血清sod和mda锁阳多糖高、中剂量组能提高大鼠血清SOD的活性,降低MDA含量,与模型组比较有显著性差异(P<0.05),结果见表2。3.3显著降低试验表3显示,与正常对照组比较,模型组血清PGE2、EGF含量显著降低,PAF含量显著升高。而锁阳多糖高、中剂量组血清PGE2、EGF含量较模型组明显升高(P<0.05);血清PAF含量较模型组明显降低(P<0.05),提示锁阳多糖通过提高血清PGE2、EGF含量和降低PAF含量对乙酸损伤型大鼠胃溃疡起到治疗作用。4明确不同有保护氧自由基的活性消化性溃疡的发生是由于各种社会、理化因素引起防御因素与损伤因素相互之间的平衡失调所致。本实验模仿在胃黏膜保护层缺失条件下导致胃酸中H+逆弥散入黏膜的状况,将乙酸直接注入黏膜层内,或直接涂在黏膜或浆膜表面,结果在胃壁黏膜刺激部位出现溃疡,本模型与人类的慢性胃溃疡极为相似。现代研究发现,锁阳有清除氧自由基、抗氧化、抗缺氧、抗应激、抗疲劳、抗癌、抗HIV以及润肠通便等作用,动物实验证实锁阳煎剂具有明显的抗胃溃疡作用。本次通过实验研究锁阳多糖对大鼠胃溃疡的作用,结果显示锁阳多糖高、中剂量组能明显降低溃疡指数,促进黏膜修复、溃疡愈合,对乙酸损伤性胃溃疡具有明显的治疗作用。SOD广泛存在于机体各组织中,是催化清除氧自由基的酶类,是生物体内氧自由基清除系统的首要防线,具有修复细胞的功能,许多病理过程,如胃溃疡的形成,与氧自由基所致的细胞损伤密切相关,SOD可以保护生物体免受自由基的攻击,对机体的氧化及抗氧化平衡起着至关重要的作用,因此SOD是胃黏膜的保护因子之一,其活力的高低间接反映了机体清除自由基的能力。MDA即血浆中脂质过氧化物(LPO)的代谢产物,MDA含量可反映机体内脂质过氧化物的程度,间接地反映出机体细胞受氧自由基攻击的严重程度。通过测定SOD活性及MDA含量的变化来反映整个机体的脂质过氧化反应和抗脂质过氧化反应的能力。当胃黏膜损伤时,表现为SOD的活性降低,MDA的含量升高,增强SOD活性或降低MDA含量,可以加强清除自由基的能力,起到保护胃黏膜的作用。本实验结果显示,锁阳多糖高、中剂量组能提高乙酸损伤型胃溃疡大鼠血清中SOD的活性,降低MDA的含量,从而消除氧自由基,减轻对胃黏膜的损伤,提示该药可提高机体抗氧化和清除自由基的能力,对乙酸损伤型胃黏膜起到促进修复、愈合的作用。PAF是一种内源性磷脂介质,是促溃疡形成介质中最强的一种,而且对其他炎性细胞因子的作用可起增强作用,可使胃肠道黏膜微血管收缩,减少胃肠黏膜血流量,与细菌内毒素在引起胃肠黏膜损伤上起协同作用。EGF是一种作用广泛的胃肠道营养多肽,参与组织损伤的修复过程,内源性EGF缺乏,可直接降低黏膜抗损害因素的防御能力,促使溃疡的形成,EGF具有抑制胃酸分泌、促进上皮细胞增殖,组织修复和细胞保护作用的内源性物质,在保护胃黏膜免受损伤因子破坏、维持胃黏膜完整性起到非常重要的作用。胃和十二指肠黏膜的内生前列腺素主要是PGE2,具有促进胃黏膜上皮细胞分泌黏液与碳酸氢盐、加强黏膜血液循环和蛋白质合成等作用,是增强黏膜上皮细胞更新、维持黏膜完整性的一个重要保护因素,具有抑制胃酸分泌和刺激组织修复来促进溃疡愈合的作用。本实验发现,模型组血清EGF和PGE2含量明显降低,血清PAF含量明显升高,导致胃黏膜