高效液相色谱法同时测定锁阳中没食子酸和原儿茶酸

高效液相色谱法同时测定锁阳中没食子酸和原儿茶酸

锁阳通常被称为“不老药”，也被称为锈铁棒、地毛球和羊圈。这是锁阳科植物锁阳的干燥土壤。具有益肾阳、益血润肠排便的功效。临床上主要用于腰膝疲劳、阳虚、滑精、肠干渴等疾病。研究表明,锁阳能够促进人体细胞再生和新陈代谢,增强免疫调节能力,在防癌、抗病毒、免疫调节、延缓衰老、防治心血管疾病、治疗白细胞减少等方面具有重要价值。目前,锁阳中没食子酸、原儿茶素的HPLC含量测定方法尚未见报道。笔者以没食子酸、原儿茶素为对照品,建立了HPLC法同时测定青海锁阳中没食子酸、原儿茶素含量的测定方法,可为控制该药材青海地区的内在质量提供参考依据,从而为锁阳药材的质量评价和资源的合理开发利用提供科学依据。1材料和方法1.1超声蒸发仪器Agilent1200HPLC(美国安捷伦公司);色谱柱AgilentEslipse-XDBC18(5.0μm,250.0mm×4.6mm);N-1001型旋转蒸发仪(上海爱朗仪器有限公司);KQ5200D超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);METTLERTOLEDOPL203和XS204电子天平(瑞士梅特勒-托利多公司)。无水乙醇、甲醇、丙酮均为分析纯,色谱甲醇(山东禹山实业有限公司化工分公司),没食子酸和原儿茶素对照品购自Sigma公司。1.2溶液的制备1.2.1待测溶液的制备将锁阳样品粉碎后,过40目筛混匀,准确称取锁阳样品1.000g置于圆底烧瓶中,加入50ml甲醇溶液热回流提取2次,过滤,合并滤液,滤液用旋转蒸发仪浓缩,再用甲醇溶液溶解并定容于50ml容量瓶中,HPLC测定前0.45μm有机滤膜过滤,即为待测溶液。1.2.2对照品溶液的制备准确称取对照品没食子酸11.3mg和原儿茶素12.6mg,以甲醇溶解,置于10ml容量瓶中定容,配制成浓度分别为1.13和1.26mg/ml的没食子酸和原儿茶素混合对照品溶液。1.3标准品溶液的制备AgilentEslipse-XDBC18(250.0mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:A为甲醇,B为水(含0.01%三氟乙酸)体系,流速1.0ml/min,柱温25℃,检测波长280nm,此条件下的标准品及样品色谱见图1。2结果与分析2.1回归方程的建立分别准确量取对照品溶液0.05、0.10、0.15、0.20、0.25ml于25ml容量瓶中,加入甲醇定容,即得不同浓度的对照品混合液。各进样10μl进行分析,以标准品峰面积对浓度进行线性回归,得到2种对照品的回归方程和相关关系。即没食子酸的回归方程Y=136.28+2.69X,r=0.9999;原儿茶素的回归方程Y=856.21+8.24X,r=0.9999。2.2不同浓度的新生儿茶素稳定性取供试品待测液在“1.3”下色谱条件,分别于0、3、6、9、12h测定,结果表明没食子酸、原儿茶素含量的RSD分别是1.5%、1.2%,表明样品在12h稳定。2.3精密度取供试品溶液,连续进样5次,结果没食子酸、原儿茶素含量的RSD分别为0.94%、0.95%,表明该方法精密度良好。2.4重复性试验结果取同一批样品,按照“1.3”下方法重复制备供试品溶液5份,在上述色谱条件下进行测定,结果没食子酸、原儿茶素含量的RSD分别为0.96%、0.93%,表明该方法重复性良好。2.5加样回收率和精密度取供试品溶液,加入适量的混合对照品溶液,混合均匀后,按照“1.3”下色谱条件测定样品溶液中没食子酸、原儿茶素的加样回收率,结果样品的各组分加样回收率分别为98.3%、95.67%,RSD分别为1.2%、1.7%。2.6新生儿茶素含量测定结果分别精密吸取样品待测液各10μl,注入HPLC中,按“1.3”下色谱条件测定,外标法计算样品溶液中没食子酸、原儿茶素的含量,每个样品重复3次,取平均值。结果见表1。由表1可知,3个地方的没食子酸含量为0.25～0.35mg/g,原儿茶素含量为0.0160～0.0164mg/g。3回流提取率测定该试验乙醇、甲醇、水提取锁阳,结果表明甲醇提取率最高,因此选用甲醇作为提取溶液,同时考虑到回流提取、超声提取、微波提取,结果表