免疫疾病实验室检查及进展

检验科免疫疾病实验室检查及进展过去-简单，粗糙现在？未来-集成化，POCT过去：人，环境，设备仪器，质量管理,操作，标本用量，试剂用量等。现在医院概况科室概况人员情况在编职工43学历博士11硕士11大学本科8大、中专13职称(10人具有执业医师证）教授、主任医师3主任技师1副教授、副主任医师3副主任技师8讲师、主治医师2主管技师15医师3技师8人员情况人员情况专业组与管理结构主任血液组安全管理教学规培文件管理

仪器设备试剂物资医疗咨询科室运营质量管理急诊组民主管理副主任分子生物组微生物组免疫组生化组

信息管理2004年-2013年工作量统计原检验科的拥挤状况新检验科布局图（8层）新检验科布局图（7层）我们很期待有这样的实验室自动进样自动离心自动去盖自动分杯自动分选自动分配自动检测自动储存自动复检标本溯源过程监控实验室信息系统流程医嘱—标本号标本号—条形码扫描条形码HIS医嘱上传（标本号）结果回报（标本号）LISLAS标本前处理、接口,轨道生化、免疫检测仪后存储系统实验室构建依据1.GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》2.卫生部《医疗机构临床实验室管理办法》3.国务院《病原物微生物实验室生物安全管理条例》4.ISO151895.参观学习-眼观六路，耳听八方硬件配套建设房屋布局的总体设计（实验室流程）办公生活区支撑系统供电网络试剂标本冷室供水水电气的走向软件配套设施HIS、LIS（条码功能、专用串口服务器）DM2的选择门禁系统（HIV、PCR等）、监控系统（走廊无死角）试剂、标本冷藏室温度报警人员配置及培训人员配置及培训强化检验专业知识的深度和广度学习自动化控制技术掌握LIS、HIS的应用免疫相关性疾病的诊断方法相关进展

免疫相关性疾病诊断的常用方法主要有：乳胶凝集(LatexAgglutinationTest)比浊法(turbidimetry)酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbantAssay,ELISA)胶体金(Colloidalgoldmethod)免疫荧光法(ImmunfluorescenceAssay,IFA)免疫印迹法(Western-blot,WB)PCR(PolymeraseChainReaction)化学发光(Radioimmunoassay,RIA)芯片法(gene-chip)等抗核抗体谱检测方法LAMP环介导等温扩增法(loop-mediatedisothermalamplification，LAMP)技术应用及研究最新进展LAMP原理:

环介导等温扩增法，是一种新型的核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，在链置换DNA聚合酶(BstDNApolymerasc)的作用下，60--65℃恒温扩增，15-60rain左右即可核酸扩增，效率可达109~10m个数量级，具有操作简单、特异性强、产物易检测等特点。在DNA合成时，从脱氧核酸三磷酸基质(dNTPs)中析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的镁离子反应，产生大量焦磷酸镁沉淀，呈现白色。因此，可以把浑浊度作为反应的指标，只用肉眼观察白色浑浊沉淀，就能鉴定扩增与否，而不需要繁琐的电泳和紫外观察。由于LAMP反应不需要PCR仪和昂贵的试剂，有着广泛的应用前景。

LAMP法的应用领域:灵活运用能够简单、快速地进行基因扩增的特征,在各个领域得到广泛。LAMP法的原理及特征LAMP法的特征1、恒温条件（65℃）实现基因扩增2、特异性非常高3、扩增反应很迅速4、扩增确认极简单5、RNA样品也一步反应6、不易受干扰物影响相比传统的基因检测法检测更加简便、快速一、免疫相关性疾病概念及发病现状

1.概念

免疫相关性疾病（Immune-relateddiseases）是指机体对自身或外来抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。

2.常见疾病常见的免疫相关性疾病有:类风湿性关节炎（rheumatoidarthritis,RA）、系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus,SLE）、自身免疫性肝炎（autoimmunehepatitis,AIH）、强直性脊柱炎（ankylosingspondylitis，AS）、干燥综合症（SjogrenSyndrome，pSS）、、系统性血管炎（SystemicVasculitis）、混合型结缔组织病等（Mixedconnectivetissuedisease，MCTD）。返回上一页下一页

抗原免疫应答自身组织损害免疫防御免疫稳定免疫监视

超敏反应自身免疫肿瘤移植排斥免疫缺陷

自身抗原的出现分子模拟决定基扩展隐蔽抗原释放自身抗原修饰器官特异性非器官特异性桥本甲状腺炎扩张性心肌炎自身免疫性溶血性贫血系统性红斑狼疮原发性粘液水肿恶性贫血特发性血小板减少性紫癜干燥综合征甲状腺机能亢进自身免疫性胃炎特发性粒细胞减少症类风湿关节炎Addisino病自身免疫性肝炎绝经过早（少数病例）硬皮病1型糖尿病原发性胆汁性肝硬化男性不育（少数病例）多发性肌炎/皮肌炎重症肌无力原发性硬化性胆管炎交感性眼炎混合性结缔组织病多发性硬化症溃疡性结肠炎晶状体源性葡萄膜炎系统性血管炎脱髓鞘疾病crohn病抗磷脂综合征寻常型天疱疮自身免疫性肾小球肾炎肺肾出血综合征自身免疫病的“病谱”

类风湿性关节炎临床表现：80%患者35～50岁发病，女:男=3:1起病缓慢、隐匿，少数急剧呈慢性病程、反复发作一般症状有低热、乏力、全身不适、体重下降等关节炎特点：主要累及小关节，尤其是手的对称性多关节炎关节表现：晨僵(morningstiffness)持续时间较长，见于95%以上的患者，是病情活动指标之一疼痛(pain)、压痛(tenderness)对称性、持续性关节肿胀(swelling)因关节腔内积液、关节周围软组织炎症或滑膜肥厚引起关节畸形(jointdeformity)晚期，如关节强直、尺侧偏斜、屈曲畸形等梭形肿胀天鹅颈样畸形尺侧偏斜峰谷畸形系统性红斑狼疮临床表现：1、全身症状：发热、疲倦、体重下降等。2、皮肤黏膜：80％患者在病程中出现皮疹颊部蝶形红斑，最具特征性盘形红斑指掌部或甲周红斑光过敏(photosensitivity)网状青斑（livedoreticularis）口腔无痛性溃疡(oralulcers)脱发（alopecia）雷诺现象(raynaud'sphenomenon)系统性红斑狼疮细胞核物质(如DNA、RNA、核内可溶性蛋白)刺激机体产生抗核抗体，形成IC，沉积于周身毛细血管、关节滑膜、心脏瓣膜等处，引起全身性损伤。蝶形红斑掌部红斑网状青斑雷诺现象临床表现：病情发展至肝硬化后，可出现腹水、肝性脑病、食管静脉曲张出血。自身免疫性肝炎病人还常伴有肝外系统免疫性疾病，最常见为甲状腺炎、溃疡性结肠炎等。实验室检查以γ球蛋白升高最为显著，以IgG为主，一般为正常值的2倍以上。肝功能检测血清胆红素、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、碱性磷酸酶均可升高，血清白蛋白、胆固醇酯降低，反映了自身免疫性肝炎以肝细胞损害为主的特征。自身免疫性肝炎AIH自身免疫性肝炎强直性脊柱炎干燥综合征

系统性血管炎混合型结缔组织病二、免疫相关性疾病的诊断方法相关进展

免疫相关性疾病诊断的常用方法主要有：乳胶凝集(LatexAgglutinationTest)比浊法(turbidimetry)酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbantAssay,ELISA)胶体金(Colloidalgoldmethod)免疫荧光法(ImmunfluorescenceAssay,IFA)免疫印迹法(Western-blot,WB)PCR(PolymeraseChainReaction)化学发光(Radioimmunoassay,RIA)芯片法(gene-chip)等乳胶凝集(LatexAgglutinationTest)比浊法(turbidimetry)酶联免疫吸附法(Enzyme-linkedImmunosorbantAssay,ELISA)胶体金(Colloidalgoldmethod)免疫荧光法(ImmunfluorescenceAssay,IFA)直接荧光抗体染色法示意图间接荧光抗体染色法示意图免疫印迹法(Western-blot,WB)PCR(PolymeraseChainReaction)LightCycleTM荧光定量PCR仪

化学发光(Radioimmunoassay,RIA)芯片法(gene-chip)生物芯片技术:生物芯片上的生物大分子与已标记的待测生物样品中靶分子特异性杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度检测分析，从而判断样品中靶分子的生物学信息。基因芯片原理

具有相当集成度的核酸探针阵列，用作核酸探针，然后与标记的样品分子杂交，根据各位点探针分子杂交信号的强度来确定样品分子的信息。蛋白芯片技术检测自身抗体样品处理反应自身抗体检测结果扫描自动结果判读抗核抗体检测方法-IIF法抗核抗体检测方法-WB法抗核抗体检测方法-芯片法IIF检测ANA荧光染色模型

1．定义增殖性核抗原由单基因编码的三聚体蛋白构成，分子量36kD。其蛋白序列高度保守，人与大鼠有90％同源性，与酵母菌有35％同源，因而酵母菌的增殖性核抗原可作为抗原基质用于检测人抗PCNA。植物有丝分裂原ConA、PNM及PHA可诱导淋巴细胞在分裂晚期表达增殖性核抗原。2．与细胞周期相关性在细胞从静止期到生长期，PCNA抗原保持稳定，半衰期约20h，因而在细胞分裂结束前24～48h能检测到PCNA。细胞在G1后期，DNA开始合成，PCNA抗原与之成比例地表达增加；至S期，PCNA抗原表达增加2—3倍；进入G2期，表达逐渐回落至基础水平。现认为PCNA抗原是DNA聚合酶的辅助蛋白，可能在控制细胞周期中起关键作用。

在S期PCNA抗原主要有两种亚群，IIF荧光图形能反应两者的差异。一种是核浆内呈散在斑点状着染，另一种为G1期～G2期细胞核仁呈致密着染为Cyclin-2荧光图形。PCNA抗原的两个主要表位位于111～115、181～195氨基酸残基，其中111～1‘15序列内氨基酸均参与表位形成。抗增殖细胞核抗原抗体PCNA

是核孔复合体的主要跨膜糖蛋白之一,是第一个被鉴定出来的核孔蛋白,早在1982年,研究人员首先在老鼠体内检测到gp210，随后在非洲爪蟾和田鼠等脊椎动物体内相继检测到它的存在,。gp210此核蛋白在进化上是非常保守的。gp210属于Ⅰ类整合膜蛋白,在不同生物体核孔复合体中的拷贝数不同，每一核孔复合体中的拷贝数约为16-24。

gp210的相对分子量为210kDa,包含一个大的深入核周腔内的潴泡状N末端区域,一个短的暴露的胞质侧的C末端尾部和一个单次跨膜区域。gp210的胞质侧的C端尾部包含58个氨基酸,Pipel等2003年报道,人类gp210的C末端区域在水溶液中会形成一个大的伸展无序的结构,包含大量聚脯氨酸Ⅱ类左时没有超滤作用就颇有积极意义。

gp210(glycoprotein210)

抗P80抗体

抗SP100抗体IIF检测ANA荧光染色模型—细胞核型IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型均质型（homegeneouspattern，H）又称弥散型。分裂间期细胞核质染色均匀一致分裂期细胞染色质阳性（亦呈均质型）与抗DNP抗体、抗dsDNA抗体、抗组蛋白抗体和抗核小体抗体有关IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型

斑点型（speckledpattern，S）又称核颗粒型，核斑块型分裂间期细胞核质染色呈斑点状、斑块状，核仁阴性分裂期细胞染色质阴性与抗可溶性核抗原（ENA）抗体有关IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型

核仁型（nucleolarpattern，N）分裂间期细胞核仁着染，分裂期细胞染色质阴性与SSc﹑SLE相关ANA相关核仁颗粒型：常与抗U3nRNP/Fibrillarin抗体、抗RNA多聚酶I抗体相关核仁均质型：常与抗PM-Scl（PM-1）抗体、抗7-2-RNP（To）抗体，抗4-6-RNA抗体相关；核仁点型（1~2点）：常与抗核仁形成中心（NOR）抗体相关IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型

核膜型（membranouspattern，M）又称周边型（rim）。分裂间期细胞荧光染色在核膜周围，分裂期细胞染色质阴性。与抗核包膜蛋白抗体（抗板层素或gp210抗体）相关由于抗原底物片固定方法或制备过程中的影响，某些抗dsDNA抗体亦呈核膜型，分裂间期细胞荧光染色质阴性或呈周边型IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型

着丝点型（centromerepattern）又称散在斑点型（discretespeckledpattern）分裂间期细胞核内均匀散布大小较一致的着染荧光细颗粒（40~60个），无核膜结构，分裂期细胞细胞染色质着丝点密集排列。如分裂期细胞呈典型阳性荧光染色，即可判断抗着丝点抗体阳性阳性IIF检测ANA荧光染色模型—常见模型

胞浆型（cytoplasmicpattern）分裂间期细胞细胞胞浆荧光染色阳性又可分类线粒体型（胞浆粗颗粒型）、核糖体型（胞浆细颗粒型或均质型，有时可见核仁阳性）、Jo-1型（核、浆颗粒型）、细颗粒型（PL-7、PL-12）等抗脱氧核糖核酸（DNA）抗体

anti-deoxyribonucleicacidantibodies分成与天然(双链)DNA反应和与变性(单链)DNA反应的两种：

抗双链DNA(doublestrandedDNA,dsDNA)抗体它是SLE血清特异性抗体SLE诊断标准之一抗单链DNA(singlestrandedDNA,ssDNA)抗体自身免疫病(SLE70%-95%，DIL60%，MCTD20%-50%，PM/DM40%-50%，SScSSRA8%-14%)

非自身免疫病(慢活肝细菌、病毒感染)，正常人对疾病诊断缺乏特异性,临床应用价值不大抗dsDNA抗体临床意义SLE血清特异性抗体活动期SLE(非肾型、肾型)80%—100%

非活动期SLE<30%抗体滴度的消长与SLE疾病活动程度相关可用于SLE疾病活动期判断和药物疗效观察其他ALID：SS、DIL、MCTD、AIH<10%

SLE发病机理:介导的免疫复合物病®肾、肺、脑所致的血管炎®面部、脑IIF法检测抗dsDNA抗体■实验原理：原虫体内动基体(Kinetoplast)含有丰富的天然纯DNA,不含组蛋白及单链DNA,抗原性纯一、特异■短膜虫(CrithidiaLuciliae,CL)

一种血鞭毛虫，1975年Aarden等报告CL-IIF■马疫锥虫(TrypaonsomaEquiperdum,TE)

一种锥虫，1978年Konice等报告TE—IIIIF法检测抗dsDNA抗体IIF法检测抗dsDNA抗体短膜虫法(CL-IIF)马疫锥虫法(TE—IIF)抗dsDNA抗体检测IIF法、RIA法和ELISA法检测抗dsDNA抗体阳性率比较抗可提取性核抗原（ENA）抗体

anti-extractablenuclearantigenantibodies抗Sm抗体：SLE标记性抗体（20%-30%）抗nRNP抗体：MCTD95-100%（高滴度）抗SSA抗体：PSS60-75%，其它CTD抗SSB抗体：PSS10-40%，其它CTD抗Scl-70抗体：SSc25-75%,标记性抗体抗Jo-1抗体：PM/DM25%，标记性抗体抗rRNP抗体：SLE特异性抗体（10%-30%）抗核抗体谱在风湿性疾病中的阳性率

系统性红斑狼疮药物性狼疮混合性结缔组织病类风湿性关节炎系统性硬化症多发性肌炎干燥综合征ANA>95%>95%99%20%~50%30%20%~30%20%~60%抗ds-DNA抗体50%~80%少见少见3%~5%少见少见0~29%抗DNP抗体70%—8%少见少见少见5%~30%抗Sm抗体25%~40%少见少见—少见少见少见抗RNP抗体26%~45%—100%10%10%~22%0~20%0~14%抗SS-A抗体30%~40%—少见5%~20%0~10%少见60%~75%抗SS-B抗体0~15%—0~20%0~5%0~5%少见50%~60%抗Scl-70抗体————

30%~60%——抗JO-1抗体—————20%~50%—抗PM-1抗体—————30%~50%—

三、免疫相关疾病的诊断（一）系统性红斑狼疮(SLE)（二）自身免疫性肝病（AILD）

(一)系统性红斑狼疮(SLE)一、系统性红斑狼疮系统性红斑狼疮（systemiclupuserythematosus;SLE）是一种自身免疫性疾病，隐袭发生，发病缓慢，临床表现多样、变化多端一种涉及许多系统和脏器的自身免疫性疾病。实验室检查对系统性红斑狼疮(SLE)的诊断非常重要，有时甚至是关键的。

1.一般检查病人常有贫血，白细胞和血小板减少，或表现为全血细胞减少，血沉异常增快。在SLE活动时，存在能破坏红细胞的自身抗体，造成红细胞和血红蛋白量下降。这时网织红细胞可以升高>5%，临床上病人可出现轻度黄疸。肾损害者有程度不等的蛋白尿、血尿等。血浆蛋白测定可见球蛋白增高，特别在有肾变性肾炎时，白／球蛋白比例倒置，血胆固醇增高，严重肾损害者血中尿素氮和肌酐升高。24小时尿蛋白超过0.5克／日以上，说明SLE累及肾脏。返回上一页下一页(一)系统性红斑狼疮

2.自身抗体的检查抗核抗体是一个筛选试验，如果出现高滴度的阳性，是红斑狼疮的诊断依据之一，1:80-160以上出现阳性有意义。（1）抗Sm和抗核糖体抗体是诊断红斑狼疮的标记性抗体。如果出现阳性可诊断为红斑狼疮。但是它们在红斑狼疮病人中的检出率仅20-30%，所以这些抗体阴性的病人也不能排除红斑狼疮，总之要全面的分析病情。（2）抗双链DNA抗体在SLE中的阳性率约为60～70%，该抗体与肾脏累及有一定相关性，与部份病人的病情活动性也有一定关系，应定期复查。（3）狼疮带的检查(LBT)，有助于红斑狼疮的诊断，但要注意取材应在暴露的皮肤处，一般在前臂近腕背部的地方取材,以增加LBT的阳性率。

应该指出的是，抗体阳性能作为诊断依据而不能作为疗效的依据，应根据临床表现，全面考虑，作出正确判断。（一）系统性红斑狼疮

3.补体和蛋白质测定

(1)补体C3和CH50（总补体）测定在SLE活动，狼疮性肾炎，溶血性贫血等急性症状出现时，C3和CH50的含量往往降低。这是由于大量补体成分参与了自身免疫反应，而机体一时还来不及制造补充，其中C3的灵敏性高于CH50。补体对疾病的诊断和病情活动的判断都有很大帮助，SLE患者经过治疗后血清中原来含量降低的补体逐步恢复正常，这说明该治疗是有效的。反之，如补体含量持续下降，则说明病情活动加重，需密切观察。

(2)免疫球蛋白测定主要测定血清中免疫球蛋白IgG、IgA和IgM。由于SLE免疫功能异常亢进产生大量自身抗体，使血清中免疫球蛋白增高，特别是IgG增高较为多见。返回上一页下一页

4.影像学检查心电图：系统性红斑狼疮患者一般伴有心肌病变、肺动脉高压病变，当心包炎或电解质失调时，心电图会出现相应的异常改变。放射线检查：X线可检查出系统性红斑狼疮患者的心包炎，胸膜炎，肺炎，肺部感染，肺出血，关节炎等疾病;CT扫描和核磁共振检查则对神经系统、心、肺、腹部、盆腔和脊柱关节处的病变均有一定的诊断价值。超声波检查：超声波对系统性红斑狼疮患者的浆膜炎、心肌炎、脾、淋巴结肿大，胆囊、肾脏、子宫、前列腺病变等均有一定的指导意义，也可进行血管炎的检查。(一)系统性红斑狼疮（二）自身免疫性肝病（AILD）自身免疫性肝病（AILD）其诊断和治疗完全不同于一般慢性病毒性肝炎AILD发病情况一般认为,AILD好发于欧美白人，亚洲黄种人较少遗传背景：主要的易感基因与HLADR2、DR3、DR4、DRw8、DR8相关自身免疫性肝病及其自身抗体谱原发性硬化性胆管炎(Primarysclerosingcholangitis，PSC)

原发性硬化性胆管炎,PSC病因不明的慢性综合征，其特征是肝外和/或肝内胆管弥漫性炎症、纤维化所引起的慢性胆汁淤积症炎症性肠病IBD炎症性肠病：是以肠道炎症为主要表现的不同疾病的总称，如感染性肠炎、中毒性肠炎、放射性肠炎、自身免疫性肠炎及慢性非特异性肠炎等。狭义上的炎症性肠病(IBD)是病因不明的慢性肠道炎症性疾病，包括两个独立的疾病，溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis,UC）和克罗恩病（Crohndisease,CD）临床症状：

临床上以腹痛、腹泻、腹块、瘘管形成和肠梗阻为特点，可伴有发热、贫血、营养障碍及关节、皮肤、眼、口腔黏膜、肝脏等肠外损害。溃疡性结肠炎UC：临床表现为反复腹泻、粘液脓血便、腹痛。诊断抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）阳性主要靶抗原MPO：人白细胞弹性蛋白酶（HLE）、乳铁蛋白（LF）、组织蛋白酶G（CG）、溶菌酶（LYS）、天青杀素（AZU）、α-烯醇化酶、β-葡萄糖醛酸酶、BPI自身免疫性肝炎

Autoimmunehepatitis，AIH自身免疫性肝炎

autoimmunehepatitis，AIH一种伴循环自身抗体和高免疫球蛋白血症，病因未明，呈慢性炎性坏死的肝脏疾病

Waldenstrom于1950年发现一种特殊类型的慢性肝炎,女性多见，伴有黄疸、丙种球蛋白明显升高和闭经后期常发展成肝硬化以往称之为“狼疮样肝炎”（lupoidhepatitis）：常伴有ANA及SMA阳性，特别是部分病人可见LE细胞自身免疫性慢性活动性肝炎（autoimmunechoronilactivehepatitis，AI-CAH）：慢性进行性发展，病理变化呈慢性活动性肝炎改变，伴有自身免疫现象肝脏病理活检肝内胆小管显示散在肝细胞坏死AIH的自身抗体谱包括器官非特异性和器官（肝）特异性自身抗体：

Ⅰ型AIH：即经典的AIH最常见，约占80%可检出ANA、ASMAⅡ型AIH：少见，儿童多见仅抗-LKM1阳性，而ANA及SMA均为阴性

Ⅲ型AIH：仅见抗可溶性肝细胞浆抗原（SLA）自身抗体

Ⅳ型AIH：自身抗体阴性(~20%)AIH的自身抗体谱抗核抗体（ANA）抗组蛋白抗体抗DNA抗体抗平滑肌抗体（SMA）抗肝-肾微粒体抗体（抗LKM1）抗去唾液酸受体抗体（抗ASGPR）抗可溶性肝抗原抗体（抗SLA）抗肝细胞质抗原I型（抗LC1）抗肝膜抗原抗体（抗LMA抗体）抗肝特异性蛋白抗体（抗LSP抗体）抗胆管、胆小管抗体抗胃壁细胞抗体（PCA）

抗线粒体抗体（AMA）：抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）抗板层素抗体（A/C）AIH中的抗核抗体（ANA）以抗组蛋白抗体、抗DNA抗体多见—ANA均质型AIH中的抗核抗体（ANA）AIH最常见的自身抗体之一，Ⅰ型AIH75%阳性不具有诊断特异性ANA常与ASMA同时出现（85%-90%）靶抗原：以DNA（单链和双链）和组蛋白（H3亚单位及核小体）为主抗单链DNA抗体在AIH中的阳性率为85%

抗双链DNA抗体在AIH中的阳性率为34%Anti-dsDNAAnti-dsDNA阳性

60%ofAIH/PBC

AMA＋anti-dsDNA阳性

47%AIH/PBC

抗平滑肌抗体

anti-smoothmuscleantibodies,SMASMA概况1965年Johnson等应用IIF法（底物：大鼠胃组织），在慢性活动性肝炎（CAH）中发现

SMA无器官及种属特异性，主要为IgG和IgM高滴度的SMA为I型AIH高敏感性自身抗体，但非AIH特异性自身抗体抗F-actin抗体对I型AIH有重要诊断意义SMA的靶抗原靶抗原种类丰富，主要为多种细胞骨架成分,可分为肌动蛋白（actin）和非肌动蛋白两大类actin

：单体/G及聚合体/F微丝(mirofilaments)抗F-actin（46KDa）

F－actin与AIH关系密切

G－actin与酒精性肝硬化有关nonactin：vimentin结蛋白微管蛋白原肌球蛋白肌球蛋白肌钙蛋白

—与感染性疾病、系统性自身免疫性疾病等有关检测方法：临床常规检测方法为IIF抗平滑肌抗体（SMA）临床意义见于多种肝脏疾病及非肝脏疾病，无诊断特异性对I型AIH诊断有重要意义高滴度SMA（1:160）诊断敏感性高达90％以F－肌动蛋白为靶抗原的SMA为AIH特异性抗体，在AIH中阳性率高达97％低滴度的靶抗原为非肌动蛋白的SMA（以IgM为主）可非特异性出现于多种疾病中（1:80）SMA疾病谱及靶抗原、抗体特点

相关疾病靶抗原抗体种类抗体滴度AIHF-actinIgG为主高滴度AIH-PBC重叠症F-actinIgG和IgM为主高滴度酒精性肝硬化G-actinIgM低滴度病毒性肝炎vimentinIgM低滴度药物性肝炎troponinIgM低滴度SLE，RA，SSvimentinIgM低滴度炎症性肠病vimentinIgM低滴度白塞氏综合征vimentinIgM低滴度心肌炎desminIgM低滴度传染性单核细胞增多症tubulinIgM低滴度抗F-actin抗体检测ANA检测HEp-2细胞底物－敏感性？抗F-actin抗体ELISA试剂盒抗肝/肾微粒体抗体（抗LKM1抗体）

anti-liver/kindreymicrosomaltype1antihodies靶抗原：细胞色素P450IID6，为50KD蛋白主要为IgG1型抗体检测方法：筛选→IIF确认→ELISA临床意义:II型AIH血清特异性抗体ＨＣＶ患者中约2-10%阳性检测LKM-1抗体ELISA为主抗肝/肾微粒体抗体（抗LKM1抗体）阳性抗可溶性肝抗原抗体（抗SLA抗体）

anti-solubleliversantigenantibodies靶抗原：肝细胞角蛋白（cytokeratins）8，18谷胱甘肽巯基转移酶？分子量55KD、45KD，可能是肝细胞溶质成分，肝脏、肾脏浓度最高检测方法：ELISA，IIF检测效果不佳临床意义：3型AIH的血清学标志（约11-25%），原因不明肝炎约14%抗可溶性肝抗原（SLA/LP）抗体的阳性率血清n抗SLA/LP抗体阳性自身免疫性肝炎,巴西13223(17.4%)

自身免疫性肝炎,日本302(6.7%)

自身免疫性肝炎,德国10821(19.4%)

自身免疫性肝炎,美国14923(15.4%)AIH(竞争抑制性实验阳性2823(82.1%)AIH(抗LKM-1抗体阳性)180

原发性胆汁性肝硬化(PBC)321(3.1%)

乙型肝炎病毒感染400

丙型肝炎病毒感染390

肝中毒损伤140

非酒精性脂肪肝240

健康的献血者2000抗肝细胞胞浆抗原1型抗体（抗LC1抗体）

anti-livertytosolantigentype1antibodies抗原特征：为58-62KD的肝细胞胞液多肽蛋白，为肝脏特异性细胞溶质，亚胺（代）甲基转移酶－环化脱氨酶(1999)检测方法：IIF、ID、IB（62KD）等临床意义：为2型AIH的血清特异性抗（56-72%），常与抗LKM-1抗体同时存在（73%），与疾病活动性具有相关性抗肝细胞胞浆抗原1型抗体（抗LC1抗体）阳性抗去非唾液糖蛋白受体（抗ASGP-R抗体）anti-asialoglycoproteinrecceptorantihodies抗原特征：位于肝细胞膜表面肝特异性蛋白成分一种跨膜蛋白，每个肝细胞膜表面大约有50万个

ASGP-R分子检测方法：ELISA、RIA

临床意义：AIH（50-88%），但也见于慢性乙型和丙型肝炎，酒精性肝病，PBC等，阳性率10%

左右。抗体与炎症活动性密切相关，可用于疗效观察去非唾液糖蛋白受体(ASGP-R)去非唾液糖蛋白受体(ASGP-R)：

是哺乳动物肝细胞表面的特异性受体,肝硬化和肝癌ASGPR水平下降。1968年,Morell等发现去唾液酸铜蓝蛋白(asialoceruloplasmin)从血液中清除很快,而铜蓝蛋白(ceruloplasmin)在血液中可以存留较长时间。包括铜蓝蛋白在内,许多血清蛋白均有糖链附着,唾液酸(sialicacid)出现在糖链的末端,去除唾液酸后暴露出倒数第二个糖基-半乳糖残基(galactoseresidue),可以使血液中这些糖蛋白被肝脏快速清除。进一步的研究发现,肝实质细胞是清除这些蛋白的专一位点,清除过程被肝细胞表面的一个受体介导。该受体只位于哺乳动物肝细胞膜表面,最初命名为肝结合蛋白(hepaticbindingprotein,HBP),后来改称去非唾液糖蛋白受体。该受体的配体称为去非唾液糖蛋白(asialoglycoprotein,ASGP)。

除了白蛋白之外几乎所有血浆蛋白为糖蛋白,在被肝脏合成并释放到血液时,其糖链末端为唾液酸。唾液酸与其他糖基形成较弱的连接,在血液中并不稳定,很易被清除。唾液酸部分被清除,标志着这个糖蛋白寿命的结束,ASGPR就将此蛋白从血液中摄取并转运到肝细胞的溶酶体,分解为氨基酸。这个过程可以维持血浆糖蛋白的动态平衡。肝硬化时去唾液酸糖蛋白在血清中聚集,源于肝硬化时肝细胞表面ASGPR水平下降。同时发现,肝细胞癌内ASGPR水平很低,而肝转移癌没有该受体;癌组织周围的肝组织ASGPR水平取决于是否合并肝硬化;梗阻性黄疸患者受体水平有所下降,但没有达到肝硬化时的水平。原发性胆汁性肝硬化

(Primarybiliarycirrhosis，PBC)研究背景

发病人数不断增加PBC发病机制PBC分期德国病理学家KarlAlbertLudwigAschoff：

他对风湿性心脏病的组织病理学做了深入的有代表性的研究。1904年，LudwigAschoff发表了一篇心肌炎与急性风湿性关节炎关联性的文章，对此进行了更详细的描述，文中提出了风湿病小体(Asehoffbody，现在称为Asehoff小体或结节)，被认为是风湿性心脏病的特征。1924年他发现多种组织内均有一些细胞具有吞噬细菌和其它物质的功能，并将这些组织命名为网状内皮系统(thereticuloendothelialsystem)。Scheuer分级系统

1985年Lok和Scheuer等在评价慢性乙型肝炎重叠HDV感染的致病作用时,提出了一个比较简单的积分系统,将炎症活动程度分为:

(1)0级:无炎症;

(2)1级:汇管区炎症(CPH);

(3)2级:轻度PN或灶性坏死(轻度CAH);

(4)3级:中度PN(中度CAH);

(5)4级:重度PN或桥样坏死(重度CAH)。PBC分期－目前有瘙痒、黄瘤、乏力、黄疸、肝大和其他肝外表现。瘙痒可能与胆盐淤积、激素水平失调和中枢阿片肽的异常调节有关；黄瘤则与胆固醇代谢旺盛有关。常见肝外表现包括干燥综合征、甲状腺功能低下等，肝功能明显异常。常有门脉高压表现，肝功能异常，在整个病程中，血清AMA多为阳性，肝组织学也符合PBC表现。

PBC诊断现状Theepidemiologyofprimarybiliarycirrhosis.ClinLiverDis.2003PBC患病率与发病率Theepidemiologyofprimarybiliarycirrhosis.ClinLiverDis.2003PBC诊断局限性Theepidemiologyofprimarybiliarycirrhosis.ClinLiverDis.2003

目前我国对于无症状期PBC患者的基础和临床研究尚处于起步阶段，开展实验室检查的单位较少，研究对象对集中在中晚期患病人群中，基于普通人群的流行病调查少见。生化检查：ALP常高出正常上限值5倍，5-核苷酸酶，GGT大于正常值5倍；SB早期正常，进展时升高；ALT、AST轻度升高；高胆固醇血症。免疫学检查：IgM增高为主；AMA最具诊断价值，AMA-M2型最具特异性；其他自身抗体：ANA、SMA、SS-A、SS-B、ds-DNA，甲状腺抗体。原发性胆汁性肝硬化的自身抗体谱AMA是PBC最常用的抗体AMA在PBC中的意义Naturalhistoryofearlyprimarybiliarycirrhosis.Lancet抗线粒体抗体（AMA）阳性AMA-M2靶抗原:

线粒体呼吸链上2-酮酸脱氢酶(2-OADH)复合物5个不同的抗原决定簇76KD、56KD、51KD、45KD、36KD,包括：支链2-酮酸脱氢酶E2亚基（BCOADH-E2）酮酸脱氢酶E2亚基（PDH-E2）2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基（OGDH-E2）PDH-E1t亚基E3结合蛋白检测方法：ELISA、IB

临床意义：PBC敏感的抗体，阳性率>90%，AMA滴度与PBC疾病分期无关抗Sp100抗体•两种核点（nucleardots,ND）型荧光染色模型：

afewnucleardots：抗p80螺旋蛋白抗体

multiplenucleardots，MND：抗Sp100抗体抗Sp100抗体:

靶抗原为53KD的可溶性酸性磷酸化核蛋白（Sp100）

PBC特异性抗体

PBC中阳性率为10-30%，其他肝病患者均为阴性对AMA阴性的PBC患者的诊断具有重要意义

AMA阴性PBC中阳性率（50%）显著高于AMA阳性者（20%）该抗体可见于反复尿路感染的妇女HEp-2细胞/灵长类肝脏:核点型核包膜蛋白自身抗体

nuclearenvenlopeproteinautoantibodies抗板层素抗体（anti-laminantibody）

anti-laminA/C：（PBC/AIH）CAHanti-laminB：SLE（2.2-8.5%）与APS相关抗核孔复合物抗体（anti-nuclearporecomplexantibody）抗Gp210抗体：诊断PBC特异性为88%，敏感性25%

抗p62抗体：PBC高特异性自身抗体，敏感性为32%抗板层相关多肽（LAPs）抗体：10-30%伴anti-lamin抗核板素受体（LBR）抗体：PBC（1%）抗gp210抗体靶抗原：位于核孔复合物上的210KD跨膜糖蛋白gp210羧基末端上的15个氨基酸残基PBC特异性抗体（88%），敏感性为25%约1/4与AMA同时出现，也存在于20%~47%AMA阴性PBC中对于临床、生化和组织学表现疑诊PBC而AMA阴性的患者，抗gp210抗体检测有重要价值可作为PBC患者预后指标，抗体阳性提示预后不良Anti-gp210andanti-centromereantibodiesaredifferentriskfactorsfortheprogressionofprimarybiliarycirrhosisAnti-gp210antibodymirrorsdiseaseseverityinprimarybiliarycirrhosis.抗板层素抗体

anti-laminsantibodies抗原特征：核板是一中间丝状结构，与核内膜的内面连结，组成板层结构的蛋白，分子量60KD、

68KD、74KD检测方法：IIF、IB、ELISA临床意义：多见于PBC、CHA（慢活肝）慢性疲劳综合征（chronicfatiguesyndrome）、D型肝炎抗核包膜抗体染色模型3种

应用聚焦或数字减影技术可清楚区分抗Lamin/LBR-光滑边缘型抗gp210-点状边缘型抗板层素抗体核包膜型与抗dsDNA抗体核膜型区别

核包膜型Membrane/rim型间期细胞光滑边缘型（细）均质核膜型（粗）分裂期细胞阴性阳性肝组织细胞典型（环状）不典型抗dsDNA抗体阴性多为阳性均质核膜型自身免疫性肝病相关自身抗体谱自身免疫性肝病

autoimmuneliverdiseases,AILD包括三种与自身免疫密切相关的，以肝、胆损伤为主的疾病.

自身免疫性肝炎（AIH）

autoimmunehepatitis原发性胆汁性肝硬化（PBC）

primarybiliarycirrhosis原发性硬化性胆管炎（PSC）

primarysclerosingcholangitis其诊断和治疗完全不同于一般慢性病毒性肝炎自身免疫性肝病及其自身抗体谱疾病类型相关自身抗体

原发性胆汁性肝硬化（PBC）

AMA(M2/M4/M8/M9)

anti-gp210anti-sp100

ACA

自身免疫性肝炎（AIH）

Ⅰ型AIHANA/ASMAⅡ型AIHanti-LKM-1anti-LC-1Ⅲ型AIHanti-SLA

原发性硬化性胆管炎（PSC）

pANCA肝病患者（肝功异常、黄疸）

排除病毒性（HBV、HCV、CMV、EBV）、酒精性、药物性

免疫学指标检查：ANA、anti-dsDNA、anti-ENA、ESR、Ig、自身抗体

抗核抗体谱阳性自身抗体阳性自身抗体阴性

CTD肝损伤（PSS、SLE）AIH、PBCAIH、PBC、PBC？

特检：anti-SLA、AMA-M9、ANCA自身免疫性肝病诊断：临床症状

组织病理学

自身抗体AMA亚型抗体种类及其疾病相关性

AMA亚型抗体相关疾病阳性率

M1(心脂)梅毒(活动期)100%

SLE50%

进行性系统性硬化症.SjS.RA5-15%

血栓形成.习惯性流产常见

M2(PDC)PBC(高滴度)96%

其他慢性肝病(低滴度)30%

进行性系统性硬化症(低滴度)7-25%M3药物性狼疮100%M4PBC(常伴M2阳性.活动期.晚期PBC)55%M5SLE.自身免疫性溶血性贫血少见

M6药物性肝炎100%M7急性心肌炎,心肌病60%,30%M8PBC(常伴M2阳性.活动期PBC)55%M9PBC-M2阴性患者(早期PBC)82%

PBC-M2阳性患者37-44%AMA-M2靶抗原:

线粒体呼吸链上2-酮酸脱氢酶(2-OADH)复合物5个不同的抗原决定簇76KD、56KD、51KD、45KD、36KD,包括：

支链2-酮酸脱氢酶E2亚基（BCOADH-E2）

酮酸脱氢酶E2亚基（PDH-E2）

2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基（OGDH-E2）

PDH-E1t亚基

E3结合蛋白检测方法：ELISA、IB临床意义：PBC敏感的抗体，阳性率>90%，AMA滴度与PBC疾病分期无关M2的检测酮酸脱氢酶E2亚基（PDH-E2）

AMA+M2-7例

支链2-酮酸脱氢酶E2亚基（BCOADH-E2）＋酮酸脱氢酶E2亚基（PDH-E2）＋2-酮戊二酸脱氢酶E2亚基（OGDH-E2）

AMA+M2-3例

芯片

1个M2-(HK1)2例AMA-PBC抗Sp100抗体两种核点（nucleardots,ND）型荧光染色模型：afewnucleardots：抗p80螺旋蛋白抗体

multiplenucleardots，MND：抗Sp100抗体抗Sp100抗体:靶抗原为100KD的可溶性酸性磷酸化核蛋白（Sp100）PBC特异性抗体

PBC中阳性率为10-30%，其他肝病患者均为阴性对AMA阴性的PBC患者的诊断具有重要意义AMA阴性PBC中阳性率（50%）显著高于AMA阳性者（20%）HEp-2细胞/灵长类肝脏:核点型核少点核多点核包膜蛋白自身抗体

nuclearenvenlopeproteinautoantibodies抗板层素抗体（anti-laminantibody）

anti-laminA/C：（PBC/AIH）CAH

anti-laminB：SLE（2.2-8.5%）与APS相关抗核孔复合物抗体（anti-nuclearporecomplexantibody）

抗Gp210抗体：诊断PBC特异性为88%，敏感性25%

抗p62抗体：PBC高特异性自身抗体，敏感性为32%抗板层相关多肽（LAPs）抗体：10-30%伴anti-lamin抗核板素受体（LBR）抗体：PBC（1%）抗gp210抗体靶抗原：位于核孔复合物上的210KD跨膜糖蛋白gp210羧基末端上的15个氨基酸残基PBC特异性抗体（88%），敏感性为25%约1/4与AMA同时出现，也存在于20%~47%AMA阴性PBC中对于临床、生化和组织学表现疑诊PBC而AMA阴性的患者，抗gp210抗体检测有重要价值可作为PBC患者预后指标，抗体阳性提示预后不良Anti-gp210andanti-centromereantibodiesaredifferentriskfactorsfortheprogressionofprimarybiliarycirrhosisAnti-gp210antibodymirrorsdiseaseseverityinprimarybiliarycirrhosis.抗板层素抗体

anti-laminsantibodies抗原特征：核板是一中间丝状结构，与核内膜的内面连结，组成板层结构的蛋白，分子量60KD、68KD、74KD检测方法：IIF、IB、ELISA

临床意义：多见于PBC、CHA（慢活肝）慢性疲劳综合征（chronicfatiguesyndrome）、D型肝炎抗核包膜抗体染色模型3种

应用聚焦或数字减影技术可清楚区分抗Lamin/LBR-光滑边缘型抗gp210-点状边缘型抗板层素抗体核包膜型与抗dsDNA抗体核膜型区别核包膜型Membrane/rim型间期细胞光滑边缘型（细）均质核膜型（粗）分裂期细胞阴性阳性肝组织细胞典型（环状）不典型抗dsDNA抗体阴性多为阳性 均质核膜型ACA抗体ACA是系统性硬化病的亚型CREST综合征的特异性抗体PBC、SS、SSc、SLE、RA……ACA亚型在不同疾病的情况anti-CENP-A

SLE11%RA3%foranti-CENP-B

SLE4%RA3%48%SSc（A/B）CirculatinganticentromereCENP-AandCENP-Bantibodiesinpatientswithdiffuseandlimitedsystemicsclerosis,systemiclupuserythematosus,andrheumatoidarthritis.

18种亚型：CENPA、CENPB、CENPC、CENPD、CENPE、CENPF

CENPG、CENPH、CENPI、CENPJ、CENPK、CENPL

CENPM、CENPN、CENPO、CENPP、CENPQ、CENPT肝病患者（肝功异常、黄疸）

排除病毒性（HBV、HCV、CMV、EBV）、酒精性、药物性

免疫学指标检查：ANA、anti-dsDNA、anti-ENA、ESR、Ig、自身抗体

抗核抗体谱阳性自身抗体阳性自身抗体阴性

CTD肝损伤（PSS、SLE）AIH、PBCAIH、PBC、PBC？

特检：anti-SLA、AMA-M9、ANCA自身免疫性肝病诊断：临床症状

组织病理学

自身抗体

自身免疫性肝病相关自身抗体谱临床应用原发性硬化性胆管炎

(primarysclerosingcholangitis，PSC原发性硬化性胆管炎

(primarysclerosingcholangitis，PSC是一种病因不明的慢性综合征，其特征是肝外和/或肝内胆管弥漫性炎症、纤维化所引起的慢性胆汁淤积症70%合并IBD、UC诊断影像学诊断pANCA80%ANASMA20%-50%抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）阳性临床免疫学检验免疫学检验：定义：依据免疫学原理（抗原抗体反应），利用各种敏感的标记﹑示踪技术，超微量地﹑特异地分析检测各种生理和病理的免疫学指标，包括体液的（抗体和细胞因子等）和细胞的（各种效细胞），进行疾病的诊断﹑疗效的评估和预后判断的一组医学检验项目。要点：利用抗原抗体反应原理，检测免疫学指标临床应用：疾病诊断﹑疗效评估和预后判断免疫学检验的主要范围检测指标临床应用病原微生物(抗原)或其诱导特异性抗体感染性疾病的诊断﹑病情监测肿瘤标志物﹝TM﹞肿瘤诊断（APF/PSA）?﹑治疗与预后监测自身抗体自身免疫病诊断﹑疗效与预后监测过敏原特异的IgE/IgC4抗体变态反应性疫病诊断免疫球蛋白﹑补体﹑细胞因子机体免疫功能判断，免疫缺陷病﹑MM诊断特种蛋白／急性相蛋白病情监测(ESR/CRP)，机体免疫功能判断淋巴细胞亚群与功能机体免疫功能判断，免疫缺陷病诊断吞噬杀菌功能机体免疫功能判断，免疫缺陷病诊断免疫检验发展新技术应用：单克隆抗体技术、免疫标记技术、分子生物学、基因工程技术、计算机技术、蛋白质组学技术、仪器检测技术临床需求：准确：特异性、敏感性、质量保证体系快速：自动化、信息化方便：快速窗口、床旁检测一﹑自身免疫病及其实验室检查自身免疫性疾病（AID）：泛指机体免疫效应细胞或免疫效应分子，针对自身组织或细胞产生病理性免疫应答反应，由自身免疫反应参与发病机制，导致组织损伤或功能障碍的疾病。自身免疫性疾病(AID)

临床经验积累和实验诊断技术进步,发病率↑其总体发病率占世界人口的3%美国:5%~8%；中国:3-4千万AID:致病疾病排行榜居10位65岁以下女性致残疾病排行榜居第4位女性患病人数约为男性