宫颈人乳头瘤病毒的临床应用

宫颈人乳头瘤病毒的临床应用

宫颈是女性最常见的肿瘤，在所有女性肿瘤中排名第二。该病的发展过程包括宫颈不典型的增生、宫颈原位癌、早期浸润癌和浸润癌的过程。人乳头瘤病毒(humanpapullomavirus,HPV)是其明确的病因。分析HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的分布情况尤为重要,对于HPV感染人群的预防和治疗以及对宫颈病变患者预后评价都具有十分重要的意义。本研究选取宫颈炎、宫颈部前病变、宫颈癌患者各50例作为研究对象,分析HPV在宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌中的水平及临床意义,现报道如下。1数据和方法1.1患者年龄分布随机抽取2009年8月至2012年10月在广州医学院附属深圳沙井医院妇科就诊的宫颈炎、宫颈癌前病变、宫颈癌患者各50例,其中宫颈炎患者年龄31~53(44.2±7.8)岁,病程1~4(2.4±0.5)年;宫颈癌前病变患者年龄33~55(46.9±5.2)岁,病程1~5(2.3±0.6)年;宫颈癌患者年龄33~55(47.3±6.7)岁,病程1~5(2.4±0.6)年。三组患者的年龄、病程等一般资料比较具有均衡性。1.2检测方法1.2.1脱细胞、细胞涂片首先收集宫颈内的脱落细胞,方法如下:患者取截石位后,置入阴道镜,并在镜下用无菌的棉球将宫颈表明的黏液擦除,而后放入细胞刷、深度1~1.5cm,旋转8~10圈以充分收集脱落细胞。将附有脱落细胞的细胞刷置入液基细胞洗脱液中,充分震荡后取液体离心得到脱落细胞,制作细胞涂片。镜下观察视野内是否存在凹空细胞,若存在则判断为HPV感染阳性(+),若不存在则判断为HPV感染阴性(-)。1.2.2荧光定量检测阴道镜检查过程中,取适量宫颈组织、保存于液氮中;检测时取50mg组织、采用mRNA抽提和反转录试剂盒(北京天根生物公司)合成cDNA第一链,采用聚合酶链反应扩增试剂盒(北京天根生物公司)进行荧光定量检测,体系如下:cDNA2μL、mastermix10μL、上游引物0.4μL、下游引物0.4μL、去离子水7.2μL;扩增条件:95℃、15s,特异性退火温度、30s,72℃、30s,40个循环。通过软件得到每个样本扩增的Ct值,并以宫颈炎组织中HPV的平均水平为100ng/L、通过相对定量方法ΔΔCt法求出宫颈癌前病变、宫颈癌组织中HPV的相对水平。1.2.3rna探针法取宫颈组织,抽提基因组DNA后,加热使其分解为核苷酸单链;通过DNA单链与RNA探针的结合反应,生成RNA-DNA杂交体;经过免疫吸附柱时,特异性抗体将RNA-DNA杂交体固定在试管壁或微孔壁上,加入第二抗体与RNA-DNA杂交体结合,使信号放大,碱性磷酸酶使酶底物发光,判断HPV-DNA的亚型。1.3统计学处理方法应用SPSS18.0统计软件进行数据分析,计量资料用均数±标准差(ue0af±s)表示,多组比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验,计数资料χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。2结果2.1女/农村地区三组患者共查出HPV感染98例,占65.33%(98/150);HPV阳性例数和HPV水平均呈现宫颈炎组<宫颈癌前病变组<宫颈癌组,差异有统计学意义(P<0.05)(表1)。2.2dna分布98例HPV感染患者中,HPV-DNA-1688例(89.80%),HPV-DNA-1885例(86.75%)、HPV-DNA-3114例(14.29%)、HPV-DNA-3321例(21.43%)、HPV-DNA-3527例(27.55%)、HPV-DNA-3931例(31.63%)、HPV-DNA-4525例(25.51%)、HPV-DNA-5119例(19.39%)、HPV-DNA-5251例(52.04%)、HPV-DNA-5656(57.14%)、HPV-DNA-5849例(50%)、HPV-DNA-5923例(23.47%)、HPV-DNA-6827例(27.55%)。HPV-DNA-16、HPV-DNA-18阳性率最高,HPV-DNA-52、HPV-DNA-56、HPV-DNA-58阳性率其次。2.3三组患者的hp-nad-a型杨性率的比较HPV-DNA不同亚型阳性率均呈现宫颈炎组<宫颈癌前病变组<宫颈癌组,差异有统计学意义(P<0.05)(表2)。3hpv感染高危型女性大学生中的女性分布宫颈癌是女性最常见的恶性肿瘤,发展中国家宫颈癌约占妇女癌症的24%,全球每年新发病40~50万例,我国约占1/3。目前研究已证明,HPV感染是宫颈癌和癌前病变的主要病因,99%的宫颈癌和宫颈上皮内瘤样病变中都可以检测到HPV-DNA。HPV是一类特异感染人皮肤和黏膜的双链闭合环状DNA病毒,主要感染人类的外阴、生殖道、肛门及口咽部黏膜和皮肤。其中,高危型包括16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68型等,其中16和18型是宫颈癌中最常见型别,其次是58、52和56型。本研究中也同样发现,HPV感染患者中HPV-DNA-16、HPV-DNA-18阳性率最高,分别为89.80%、86.73%;HPV-DNA-52、HPV-DNA-56、HPV-DNA-58阳性率其次,分别为52.04%、57.14%、50%。这与高危型HPV的分布规律一致。国外一项流行病学研究显示,HPV感染多为呈现一过性和自限性的特征,美国女大学生中宫颈HPV感染的发生率为43%、6个月后清除率约为31%、8个月后清除率约为89%。当宿主的防御机制和免疫系统存在不同程度的缺陷时,可导致HPV持续感染,HPV基因片段可整合到宿主细胞的DNA上,使原癌基因激活、抑癌基因失活,从而引起细胞由正常表型向恶性表型转化,导致宫颈癌的发生。宫颈癌的发生和发展过程通常较为缓慢,依次经过宫颈不典型增生、宫颈原位癌、早期浸润癌和浸润癌等过程。通过有效的辅助检查手段,可以早期发现、早期治疗、早期预防。本研究结果显示,HPV阳性例数和水平均呈现宫颈炎组<宫颈癌前病变组<宫颈癌组的趋势;进一步观察HPV-DNA各亚型在三组患者中的表达情况