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3/4分子荧光光谱法试验报告一、试验目的把握荧光光度计的根本原理及使用。了解荧光分光光度计的构造和各组成局部的作用。把握分子荧光光度计分析物质的特征荧光光谱：激发光谱、放射光谱的测定方法。了解影响荧光产生的几个主要因素。学会运用分子荧光光谱法对物质进展定性和定量分析。原子外层电子吸取光子后，由基态跃迁到激发态，再回到较低能级或者基态时，放射出肯定波长的辐射，称为原子荧光。对于分子的能级激发态称为分子荧光，寻常所说的荧光指分子荧光。具有不饱和基团的基态分子经光照耀后，价电子跃迁产生荧光，是当电子从第一激发单重态S1S0级所产生的光辐射。激发光谱是指发光的某一谱线或谱带的强度随激发光波长(或频率)变化的曲线。横坐标为激发光波长，纵坐标为发光相对强度。激发光谱反映不同波长的光激发材料产生发光的效果。即表示发的光谱。获得方法：先把其次单色器的波长固定，使测定的λem不Iλex激发光谱，从曲线上找出ex放射光谱是指发光的能量按波长或频率的分布。通常试验测量的是发光的相对能量。放射光谱中，横坐标为波长，纵坐标为发光相对强度。放射光谱常分为带谱和线谱，有时也会消灭既有带谱、又有线谱的状况。放射光谱的获得方法：先把第一单色器的波长固定，使激发的λex不变，转变其次单色器波长，让不同波长的光扫描，测定Iλem放射光谱;从曲线上找出最大的λem。荧光强度与荧光物质浓度的关系用强度为I0荧光强度If(A试剂：罗丹明B乙醇溶液；1-萘酚乙醇溶液；3,3-Diethyloxadicarbocyanineiodide10μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml醇。Fluoromax-41cmspectrofluorometer荧光器构造：它主要由光源、单色器、液槽、检测器和显显示器或打印机显示和记录被测样品谱图。四、试验步骤3,3’-Diethyloxadicarbocyanine知浓度。翻开荧光分光光度计和电脑，预热半个小时。翻开spectrofluorometer先检测罗丹明B560nm，检测并保541nm检测罗丹明B1-3。3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide210μg/ml,20μg/ml,30μg/ml,40μg/ml录数据，绘制工作曲线。3,3’-Diethyloxadicarbocyanineiodide测，记录数据，并依据工作曲线求

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