当归-川芎药对配伍复方中阿魏酸含量的变化

当归-川芎药对配伍复方中阿魏酸含量的变化

药物是中医学最基本的佐剂形式。这是两种中药之间的一种相对固定的结合。这是中医学和临床实践经验的结晶。药对是方剂最小的组方单位,是从单味中药到复方之间的一个中间环节,故从药对入手开展配伍的研究有助于研究复杂方剂的配伍规律。当归-川芎药对是中医妇科要药,常配伍用于养血活血,调经止痛。阿魏酸(ferulicacid,FA,图1)是川芎、当归的主要活性成分之一,本研究在本室已经建立的制剂/血清中FA浓度的测定方法的基础上,研究当归-川芎药对配伍复方(芎ue840汤、生化汤、四物汤)中FA浓度变化,现报道如下。1药品、试剂和仪器美国Waters公司高效液相色谱系统(600泵,996光电二极管阵列检测器,7725i手动进样器,M32色谱工作站,Waters在线脱气系统);SZ-93自动双重纯水蒸馏器(上海荣华生化仪器厂);LD-4低速离心机(上海医用分析仪器厂);XK-96快速混匀器(江苏姜堰市新康仪器厂)。阿魏酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号0773-9910);甲醇(分析纯,天津市化学试剂二厂,批号20030821);乙酸(分析纯,开封化学试剂总厂,批号20001017);水为自制新鲜双蒸水;药材当归、川芎、桃仁、炮姜、炙甘草、熟地黄、白芍各饮片均购自唐都医药药剂科,经浙江医药高等专科学校中药系杨雄志副教授鉴定为正品。2方法2.1s18反相柱及预柱固定相日本GLSciences公司InertsilODS-3C18反相柱(4.6mm×250mm,5μm),C18预柱(大连化学物理研究所);流动相甲醇-水(含1%乙酸)(45∶55);流速1.0mL·min-1;检测波长321nm;进样量20μL。2.2检测波长的确定紫外扫描结果显示,阿魏酸在234nm和321nm处紫外吸收较强,由于在321nm处有最大吸收且干扰小,故选择321nm作为检测波长。2.3对照溶液的制备精密称取阿魏酸对照品0.36mg,甲醇溶解后,用流动相定容于10mL棕色容量瓶中,得36.0mg·L-1对照品贮备溶液。2.4水煎液的制备按处方(药物组成见表1)准确称取各味药,充分混匀后分别置于3个1000mL烧杯中,第一次加8倍水,室温下浸泡30min,煮沸后文火煎30min,用4层医用纱布过滤,残渣加6倍水重复以上过程,合并2次滤液,浓缩至150mL,即采取相同的加水倍数、浸泡时间、煎煮火候及煎煮时间,分别煎煮,得到3组配它的水煎液。另按上述方法制备不含当归、川芎的阴性对照液。2.5动相密度滤膜制备分别精密量取各煎煮液200μL于10mL离心管中,加入流动相4800μL,电动混匀3min,4000r·min-1离心5min,取上清分别过0.25μm微孔滤膜后,取续滤液备用。此得到1#~3#样品及阴性对照液,作为供试品溶液。3结果3.1fa出峰位置的测定分别精取各样品溶液20μL,在选定的色谱条件下分别进样测定。在FA出峰位置,阴性对照液无干扰,其保留时间为10.0min,14min可完成一次测定。色谱图见图2。3.2标准工作溶液的选择精密量取对照品贮备溶液适量,用流动相配成浓度为0.6,1.2,2.4,4.5,9.0,18.0mg·L-1的系列标准工作液。分别进样20μL,以峰面积(Y)对浓度(X)进行回归,回归方程为Y=8.48×104X-6.66×103(r=0.9999,n=6)。结果表明,阿魏酸在0.6~18.0mg·L-1范围内呈良好线性关系。3.3最低检测限的确定取混合对照品溶液,用流动相依次稀释成一系列由高到低的梯度浓度溶液,在上述色谱条件下分别进样,取峰高为噪音3倍时的进样量为最低检测浓度,由进样量20μL得出最低检测限。结果最低检测限为0.58ng(S/N=3)。3.4日内和宪法密度精密吸取对照品低、中、高3个浓度,在24h内测定其日内精密度,在6d内测定日间精密度,结果见表2,平均日内精密度RSD为2.08%,平均日间精密度RSD为1.57%。3.5稳定实验精密吸取同一份样品(共煎液)20μL,分别间隔一定时间进样,测定5次,结果48h内RSD为1.03%。3.6重复试验相同。6个样品在试验制备方法下平行制备，注射分析，srd为2.53%3.7阿魏酸回收率精密吸取已测定含量的1#水煎液样品溶液500μL(含FA5.47μg),分别加入阿魏酸对照品溶液(36.0mg·L-1)150μL,电动混匀1min,4000r·min-1离心5min,取上清分别过0.25μm微孔滤膜后,进样测定,结果平均回收率为102.65%,RSD为2.59%(n=6),见表2。3.8fa含量的计算精密吸取1#~3#样品各20μL,分别进样3次,按外标法计算FA含量,所得结果见表3。实验结束,采用完全随机设计的单因素方差分析(one-wayANOVA)进行统计学处理(P<0.01),组间差异采用Dunett-t检验。4归-瞳草茶汤、生化汤、阿魏酸的配伍比例在本实验选定的色谱条件下,阿魏酸得到较好的分离,无杂峰干扰测定;当归-川芎药对配伍复方水煎液是按照传统中药煎煮方法平行操作制得,因而对其FA的煎出量进行比较,以此研究配伍对FA煎出的影响是科学可行的。当归与川芎相须为用,活血而不伤血,补血而不滞血,二药为养血活血功效的最常用组合。有研究表明,在当归与川芎配伍的诸多方剂中,两者以1∶1配伍比例出现频率最多。因此我们选择调经基础方四物汤、治疗产后腹痛的生化汤以及治疗妊娠伤胎、难产的芎ue840汤,3张经方作为研究工具,为了研究的可操作性,方中当归、川芎用量均用中剂量9g,配伍比例1∶1。本实验条件下,芎ue840汤、生化汤、四物汤中阿魏酸煎出量依次为(109.4±3.0)mg·L-1,(95.3±1.9)mg·L-1,(85.6±2.0)mg·L-1,存在明显差异(P<0.01)。当归-川芎药对配伍熟地黄、白芍后阿魏酸含量