中医肝病证候情绪特征及与5h基因多态性的相关性研究

中医肝病证候情绪特征及与5h基因多态性的相关性研究

中医的肝证候存在不同程度的情绪障碍。近年来，采用心理量表对中医肝证情感障碍进行客观和定量研究，表明肝证患者处于焦虑和抑郁状态。中医证候是一种相对稳定的病理生理状态,形成这种病理生理状态的原因可能与个体基因所决定的遗传易感素质有关。异常情绪状态的产生和变化涉及一系列复杂的神经生物化学改变,而个体基因所决定的遗传特征是其物质基础之一。与中枢神经递质表达和功能相关的一些基因多态性近年来成为探索精神、神经类疾病病因的重点。本研究在采用Beck焦虑、Beck抑郁量表测量肝气郁结证、肝火上炎证、肝气虚证、肝阳上亢证患者与健康对照者情绪状态的同时,检测了5-羟色胺转运体(serotonintransporter,5-HTT)基因多态性在各组中的分布频率,探讨与中医肝病证候相关的分子遗传机理。西医病员处理1.研究对象患者组共203例,为2001年3月～2002年3月湖南省脑科医院、中南大学湘雅医院门诊及住院患者,男98例,女105例,年龄18～60岁,平均年龄(39±14)岁。健康人对照组共90例,按与患者组性别、年龄大致相当的条件选取,其中男42例,女48例,年龄(38±11)岁,来自自愿献血者、中南大学学生及职工,经病史调查、体检、血常规、肝功能、胸透、心电图等检查,排除精神及重大躯体疾病者。研究对象均为湖南汉族人群,对本研究知情并同意。2.中医辨证及分组按中南大学湘雅医院中西医结合研究所研究并经鉴定的标准,均由副主任医师以上两人同时完成,其中肝气郁结证50例,肝火上炎证50例,肝气虚证50例,肝阳上亢证53例。西医病种包括神经症103例、偏头痛54例和原发性高血压46例,均按疾病各专业委员会诊断标准。3.情绪测量均由患者自评,Beck焦虑量表共21条,按无、轻度(无多大烦扰)、中度(感到不适但尚能忍受)、重度(只能勉强忍受)分别记1、2、3、4分,累加计算总分后通过Y=int(1.19X)取整计算标准分。Beck抑郁量表共21条,按严重程度分别记0、1、2、3分,累加计算总分。4.血标本采集及DNA抽提取肘静脉血5ml,0.2%EDTA-Na2抗凝,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,常规酚、氯仿法抽提基因组DNA。5.PCR条件及产物检测5-羟色胺转运体启动子区多态性(5-HTT-linkedpolymorphicregion,5-HTTLPR)基因S/L型多态性检测,PCR反应液共20μl,含有50～100ng基因组DNA,10pmol引物,1μlA-Taq酶,10μl2×GC缓冲液,250μmol/LdNTPs。PCR条件:94℃5min预变性,继以94℃变性60s,61℃退火30s,72℃延伸60s,共30个循环,72℃延伸10min。将PCR产物于6%非变性聚丙烯酰胺凝胶中,100V垂直电泳分离4h,以硝酸银染色法检视各区带,与分子量标准物比较各片段的大小。484bp片段为“S”型,528bp片段为“L”型,616bp的为“xL”(超长型,由于本等位基因罕见,全部样本中仅检出4个,统计时并入L型)。6.统计学方法计量资料数据用x¯±sx¯±s表示,多组总体比较方差齐者用方差分析,两两比较用q检验,方差不齐者用Tamhane检验。各基因型、等位基因频率比较用χ2检验或Fish's精确检验。统计分析用SPSS10.0软件。结果1.beck焦虑量表测值见表1。由表1可见,四种中医肝证患者Beck焦虑量表、Beck抑郁量表测值各项积分均高于健康人对照组,差异有显著性(P<0.01);Beck焦虑量表测值肝火上炎证最高,肝阳上亢证其次,肝气虚证组最低,肝火上炎证高于肝气郁结证和肝气虚证,差异有显著性(P<0.01);Beck抑郁量表测值肝气郁结证最高,肝气郁结证和肝气虚证均高于肝阳上亢证组,差异有显著性(P<0.01,P<0.05)。2.-httlpr等位基因频率见表2。由表2可见,肝火上炎证、肝阳上亢证患者组与健康人对照组5-HTTLPR基因型分布频率差异有显著性(P<0.05,P<0.05),两证的SS基因型频率明显高于健康人对照组;肝火上炎证患者组与健康人对照组5-HTTLPR等位基因频率差异有显著性(P<0.01),肝火上炎证患者的S等位基因频率明显高于健康人对照组;肝气郁结证、肝气虚证与健康人对照组比较各基因型和等位基因频率均差异无显著性。中医证候差异情志活动属于心主神明的生理功能,但与肝的疏泄功能密切相关。《灵枢·本神》载:“肝气虚则恐,实则怒。”《素问·五运行大论篇》载:“怒志属肝。”《灵枢·百病始生》载:“忿怒伤肝。”《医碥》云:“百病皆生于郁,郁而不舒则皆肝木之病矣”。可见中医肝脏在情志调节中起着他脏不能替代的作用。肝的疏泄功能正常,则气机条畅,气血和调,心情易于开朗;肝的疏泄功能减退,则肝气郁滞,心情易于抑郁,稍受刺激,即抑郁难解,临床上最常见、最典型的证候为肝气郁结证;肝的疏泄太过,阳气升腾而上,则心情易于急躁,稍有刺激,即易于发怒,临床上最常见、最典型的证候为肝火上炎证、肝阳上亢证。研究结果显示4种中医证型Beck焦虑、Beck抑郁量表积分均显著高于健康人对照组,表明4种中医肝病证候患者都具有不同程度的焦虑、抑郁情绪,但不同中医证型的患者焦虑、抑郁的程度不同。Beck焦虑量表测值以肝火上炎证积分最高,显著高于肝气郁结证和肝气虚证,但未能与肝阳上亢证区分;Beck抑郁量表测值肝气郁结证积分最高,肝气虚证其次,均显著高于肝阳上亢证。肝火上炎证和肝阳上亢证的情绪状态以焦虑为主,而肝气郁结证的情绪状态以抑郁为主,这与以前的研究结果一致。上述中医证候不同情绪特征的形成,是否由于这些证候的患者存在个体基因差异所决定的遗传易感性,因而在与情感相关的基因表达和调节方面存在差异?本研究主要从5-羟色胺这一主要的中枢递质途径来探讨相关的分子遗传机理。5-HT直接或间接参与调节人的情感、精神活动。5-HTT从突触间隙中移除5-HT,从而决定了突触后受体介导信号的量和作用时间,为中枢5-HT递质的微调中心。人类5-HTT基因启动子区有一个多态性重复序列,位于其转录起始位点上游约1kb处,大部分等位基因由14(short,S)或16(long,L)个22bp的重复序列组成。有研究表明该多态性对5-HTT的转录具有调节功能,因而成为与情绪、人格特征、心境障碍、焦虑障碍等精神类疾病相关研究的重点。5-HTTLPR多态性SS基因型在肝阳上亢证和肝火上炎证中高于健康人对照组,可能与这两种中医证型有较高的焦虑积分有关,已有文献报道SS基因型与焦虑人格特征显著相关。肝火上炎证和肝阳上亢证在5-HTTLPR多态性上