1、血清学检验新疆农业职业技术学院

才干单元八

血清学检验与生物制品一血清学检验

定义：抗原及相应抗体在体外的特异性结合。在体外能发生可见的免疫反响。抗体主要存在于血清中，将这一反响称为--。

(一)血清学实验的特点：

1、特异性：抗原决议簇的组成、构造不同，所产生的抗体也就不同，一种抗原只能与相应抗体结合，表现出高度的特异性。

2、交叉性：

〔二〕用知测未知：用知抗原〔抗体〕监测未知抗体〔抗原〕。

〔三〕最适比与带景象：最适比：抗原与抗体结合需求适当比例才干出现可见反响。带景象：如抗原过多或抗体过多，大的抗原抗体复合物很难构成，不能出现可见的反响。〔四〕反响的可逆性：正常：温度：0-40度，PH：4-9。当T>60度，PH<3时，发生可逆反响。〔五〕反响的两阶段型：第一阶段：抗原抗体相互结合，作用快，构成的复合物较小，不出现可见反响。第二阶段：在电解质作用下，构成大的复合物，出现各种可见反响，反响慢。

〔六〕反响的敏感性：极微量的抗原或抗体都能检测。

二影响血清学实验的要素1、电解质：常用的是氯化纳，0.9%生理盐水，促进可见景象的发生。

2、温度：37度，适宜的温度可添加抗原抗体活性及相互接触的时机。

3、PH=6.8,PH=5-5.5,非特异性沉淀，PH=2-3,离解。4、振荡：加速碰撞，但过强可解离。

5、杂质：蛋白质、脂质、糖等杂志时，抑制反响进展，或引起非特异性反响。故实验设立对照。

三、血清学实验的类型：〔一〕凝集实验：颗粒性抗原与相应抗体结合后，在电解质存在下相互凝结成絮片状团块的景象。参与的抗原为凝集原，抗体为凝集素。１、直接凝集实验：〔1〕平板凝集实验：例如：沙门氏菌，痢疾杆菌，布氏杆菌病，血型鉴定。

〔2〕试管凝集实验：抗原等量，抗体作倍比稀释，37℃，50%以上为该血清的效价〔滴度〕。例如：布氏杆菌病，沙门氏菌。2、间接凝集实验：将可溶性抗原〔或抗体〕吸附与免疫无关的颗粒外表，再与抗体结合，出现肉眼可见的凝集景象。

间接血凝实验：以红细胞为载体。

正向血凝实验：红细胞+抗原抗体。

反向血凝实验：红细胞+抗体抗原。

〔二〕沉淀实验：可溶性抗原与相应抗体结合后，构成肉眼可见的白色沉淀。１、环状沉淀实验：d=3～4毫米试管中，抗血清参与管底，再将稀释的抗原重叠其上，阳性：一～二分钟出现反响，一小时，三-五h。例如：炭疽病诊断。

2、琼脂分散实验：机理：略

例如：蓝舌病，马传染性贫血，MD，传染性法氏囊病。

〔三〕补体结合实验：

1、原理：补体无特异性，能与任何抗原抗体复合物结合，红细胞+溶血素+补体溶血，阴性。红细胞+溶血素不溶血，为阳性

2、运用：牛付结核，乙型脑炎，马鼻疽〔四〕中和实验：病毒或毒素与相应抗体结合后，可失去对易打动物的致病力的实验。

1、毒素、抗毒素的中和实验：LD50常用

2、病毒中和实验：〔1〕体外中和实验〔2〕体内中和实验例：

口蹄疫病毒(FMDV)4～7d乳鼠乳鼠死亡

FMDV+抗血清4～7d乳鼠乳鼠不死亡

例:

FMDV仔猪肾传代细胞(IB-RS-2)单层细胞

细胞病变(CPU)：变圆、成串、空泡、变形、零落、裂解

FMDV+抗血清IB-RS-2单层细胞细胞无病变CPU

〔五〕抗体标志技术：用荧光素、酶和同位素等对抗体进展标志的实验技术。

1、荧光抗体技术：将荧光染料标志在抗体上制成荧光抗体，标志的抗体仍能与相应抗原结合并构成带有荧光的抗原抗体复合物。

荧光资料：异硫氰酸荧光素显微镜下的荧光荧光显微镜

〔1〕直接法：荧光染料+知抗体监测未知抗原。〔2〕间接法：荧光染料标志在抗抗体上检测未知抗原2、免疫酶标抗体技术：

利用抗原抗体的特异性结合和酶的高效特异的催化作用，显色而建立起来的免疫检测技术。酶标志抗体抗原复合物上的酶在遇到相应的底物时，能催化底物分解，并使底物中的供氢体呈现颜色反响。常用标志酶：辣根过氧化物酶〔HRP〕。作用底物为过氧化氢。供氢体：3，3`-二氨基联苯胺〔棕色沉淀〕——免疫酶组织化学染色法；邻苯二胺〔橙色可溶物质〕——酶联免疫吸附实验。

直接法：1免疫酶组织化学染色法：酶标抗体+被检抗原洗涤过氧化氢+DAB的反响液中