丙泊酚对小胶质细胞活化和术后认知功能的影响及机制研究

丙泊酚对小胶质细胞活化和术后认知功能的影响及机制研究第一部分丙泊酚对小胶质细胞活化的影响及其机制研究目的观察丙泊酚对小胶质细胞活化的影响及其机制。方法将小胶质细胞BV-2分为7组,分别是空白对照组、丙泊酚组、LPS组、LPS复合丙泊酚组、IL-4组、IL-4复合丙泊酚组,溶剂DMSO对照组。空白对照组的细胞加入没有血清的DMEM/F12培养液;丙泊酚组细胞加入丙泊酚30μM;LPS组细胞加入LPS1μg/ml;LPS复合丙泊酚组细胞加入LPS1μg/ml预处理1小时,然后加入丙泊酚30μM干预24h;IL-4组加入20ng/mLIL-4;IL-4复合丙泊酚组加入20ng/mLIL-4预处理1小时,然后加入丙泊酚30μM干预24h;溶剂DMSO对照组加入溶剂0.1%的DMSO。进行形态学的观察以及酶联免疫吸附法测定细胞上清液中的IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-4、IL-10、Arg-1水平确定小胶质细胞M1、M2活化模型的建立；同时采用MTT比色实验法测定丙泊酚干预后的活化小胶质细胞活性,探讨丙泊酚对小胶质细胞活性的影响；并观察丙泊酚对静息小胶质细胞以及活化小胶质细胞M1、M2释放炎症因子的影响;此外采用逆转录-聚合酶链反应测定丙泊酚对活化小胶质细胞M1模型的TLR4、p38MAPK、TRIP、JNK、ERKmRNA表达,及Westernblot检测细胞TLR4、p38MAPK、TRIP、JNK、ERK的蛋白表达量,以此来分析丙泊酚对活化小胶质细胞M1的作用机制。结果静息小胶质细胞经过LPS和IL-4刺激后,形态学上观察到小胶质细胞活化的表现,同时LPS组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α表达水平明显高于空白对照组;IL-4组小胶质细胞上清液中的IL-4、IL-10、Arg-1表达水平也明显高于空白对照组,证明了活化小胶质细胞的M1、M2模型的成功。此外,加入丙泊酚干预24小时后,LPS组和LPS复合丙泊酚组的细胞活性也明显低于对照组和丙泊酚组(P<0.05),但是LPS复合丙泊酚组小胶质细胞活性高于LPS组(P<0.05);而IL-4复合丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-4、IL-10、Arg-1水平较丙泊酚组稍有增高,但未见明显变化(P>0.05)以及IL-4组和IL-4复合丙泊酚组的细胞活性较对照组和丙泊酚组稍有增高,但也未见明显差异(P>0.05)。此外发现丙泊酚对静息小胶质细胞释放的炎症因子没有影响,但是LPS复合丙泊酚组小胶质细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α水平明显低于LPS组(P<0.05)。PCR及WesternBlot结果显示LPS组和LPS复合丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK、TLR4mRNA和蛋白表达量明显高于对照组和丙泊酚组(P<0.05),LPS复合丙泊酚组小胶质细胞p38MAPK和TLR4mRNA和蛋白表达量低于LPS组(P<0.05)。而TRIP、JNK、ERKmRNA和蛋白表达量在各组未见明显差异(P>0.05)。结论丙泊酚能显著抑制活化小胶质细胞M1的过度炎症反应,其机制可能与丙泊酚下调TLR4-p38MAPK信号通路有关。第二部分丙泊酚对老年胸腰椎手术患者术中BIS指数及术后认知功能的影响目的:观察丙泊酚对老年患者行胸腰椎手术中脑电双频指数监测(BIS)指数及术后认知功能的影响。方法:病例选自我院2014年7月～2015年3月期间收住的行胸腰椎手术患者82例,按照随机数字表法,将患者随机分为丙泊酚组与七氟烷组各41例。七氟烷组采用七氟烷麻醉维持,丙泊酚组采用丙泊酚麻醉维持。比较两组的自主呼吸恢复时间、呼之睁眼时间、拔管时间等指标来评价苏醒质量,以及术前、术后一天、术后三天MoCA评分,和术前、术中BIS指数的变化。结果:丙泊酚组自主呼吸恢复时间、呼之睁眼时间、拔管时间均小于七氟烷组,苏醒质量优于对照组,具有统计学差异(P<0.05)。两组MoCA评分术后第一天均较术前降低(P<0.05),七氟烷组MoCA评分术后第三天较术前降低(P<0.05),而丙泊酚组MoCA评分术后第三天较术前无明显变化(P>0.05);丙泊酚组MoCA评分术后第一天和术后第三天均高于同期七氟烷组,有统计学差异(P<0.05)。丙泊酚组术后第三天认知功能障碍发生低于七氟烷组,且有统计学差异