DB22-T 3366-2022 牛中华泰勒虫病检测 PCR法_第1页
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文档简介

11.220

41DB22 22/T

3366—2022牛中华泰勒虫病检测PCR

吉林省市场监督管理厅

DB22/T

2022前 言本文件按照

GB/T

1.1-2020

定起草。DB22/T

2022牛中华泰勒虫病检测 PCR

法

本文件规定了牛中华泰勒虫病PCR检测方法的试剂或材料、仪器设备、样品、试验步骤、结果判定

GB

19489实验室

theileria

中华泰勒虫(Theileria

sinensis)寄生于牛的红细胞和白细胞中，以发热、贫血、黄疸及体表淋巴结

dNTP（dATP、dCTP、dGTP、dTTP）。

DNA

Marker

分子量标准。

50

加样缓冲液见附录

A.2。

10

mg/mL

A.3。

1%琼脂凝胶见附录

A.4。

阳性对照见附录

A.5。DB22/T

20224.1.10

阴性对照见附录

A.6。4.1.11

质粒

DNA

B。4.1.12

4.1.13

4.2

PCR反应引物序列与浓度见表

1。

PCR

PCR

℃～100

低温高速离心机，12

000

r/min

高压灭菌器，120

电泳仪，电压

V～300

V；电流

mA～400

mA。

微量移液器，单道

L、20

L。

6.1

6.2

Taq

DB22/T

2022

反应体系见表

2。

PCR

在试样

PCR

反应的同时，以无菌双蒸水作为空白对照，并设置阴性对照和阳性对照，各对照

PCR

95

变性

延伸

60

30

7.3

将所有样品、阳性对照、阴性对照和空白对照的PCR产物按编号加入到1%琼脂糖凝胶板的各孔中，将凝胶的边孔中加入DNA

Marker

分子量标准（4.1.4），将凝胶在

150

恒定电压下电泳30

min后，

空白对照、阴性对照无扩增条带，阳性对照出现

887

bp的特异性条带，试验成立，否则应重新检

若被检样品出现

887

DB22/T

2022

0.5

TAE缓冲液（50

TAE缓冲液（50

A.2。

10

10

DB22/T

2022

10

冷却到

50

左右，加入

10

mg/mL

溴化乙锭

10

μL，摇匀，倒入电泳板上，凝固后，4

备用。1%琼脂糖凝胶的制备见表

A.5。

以未感染中华泰勒虫牛血液提取的

DNA

DB22/T

2022

a) 按血液基因组

DNA

DNA；b) 应用牛中华泰勒虫

MPSP

PCR

887

bpc)

d)

Solution

PCR

管中，充分混匀，

16

h；e)

10

50

DH5

30

min，42

70

s，冰浴冷刺激

200

无抗性

LB

37

后，涂布于含有

Amp

LB

培养

12

h；f)

质粒

DNA

DNA；g)

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