HS-T 81-2023 脱皮花生检测方法

0ICS67.600CCSX24

HS/T

81—2023脱皮花生检测方法t sTes

oft s-

- -

--

- -

-中华人民共和国海关总署 发

布HS/T81—2023前 言本文件按照

GB/T1.标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》及HS/T1—2022《海关标准编写规则》的规定起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中华人民共和国海关总署关税征管司提出。本文件由中华人民共和国海关总署归口。本文件起草单位:青岛海关技术中心、中华人民共和国广州海关、山东省花生研究所、日照海关综合技术服务中心。本文件主要起草人:张雪琰、牛增元、罗忻、杨珍、毛容妹、刘培海、周龙龙、陈春光、刘泉。HS/T81—2023脱皮花生检测方法警告———使用本文件的人员应有正规实验室工作的实践经验。本文件并未指出所有可能的安全问题,使用者有责任采取适当的安全和健康措施,并保证符合国家有关法规规定的条件。1

范围本文件规定了干燥脱皮花生中过氧化氢酶和过氧化物酶的检测方法。本文件适用于干燥脱皮花生中过氧化氢酶和过氧化物酶的检测。2

规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。3GB5009. 食品安全目录标准 食品中水分的测定3GB/T601

化学试剂标准滴定溶液的制备GB/T6682

分析实验室用水规格和试验方法3

术语和定义下列术语和定义适用于本文件。13.1

- s干燥脱皮花生

dry- s去壳花生,花生衣经加热破裂和松脱,冷却后,子仁经刷子或有凸起花纹的橡胶带去衣。23.2it过氧化氢酶活动度(活性)

catalaseactit规定条件下,一定量试样中的过氧化氢酶与过氧化氢作用所消耗的过氧化氢量,用每克试样所消耗的过氧化氢毫克数表示。[来源:GB/T5522—2008,3.1,有修改]33.3it U过氧化物酶活性单位 peroxidaseactviyit U 0p在25℃,H7.

时, 0p[来源:GB/T32131—2015,3.1,有修改]43.4it过氧化物酶活性 peroxidaseactit规定条件下,一定量试样中过氧化物酶活性单位(U)数量,用每克试样过氧化物酶活性单位数量表示。4

过氧化氢酶活性的测定1HS/T81—202314. 原理1在pH

值7.

条件下,从样品中提取过氧化氢酶,在提取液中加入一定量的过氧化氢,使过氧化氢在过氧化氢酶作用下分解,再用高锰酸钾溶液滴定过量的过氧化氢。根据高锰酸钾溶液的消耗量计算出试样中过氧化氢酶活动度。24. 试剂和材料221 122除另有说明外,所用试剂均为分析纯。水为符合

GB/T6682规定的三级水21 1224..

2%过氧化氢溶液:取30%过氧化氢溶液2mL,加水稀释至30mL。4..

10%硫酸溶液:0mL浓硫酸边滴边搅拌加入90mL水中。23c 1 124 225 14..高锰酸钾标准溶液:(/5KMnO423c 1 124 225 14..

磷酸氢二钠水溶液:称取

NaHPO4·12H2O29.g,加水溶解定容至1000mL。4.. 磷酸二氢钾水溶液:称取无水

KH2PO49.g,加水溶解定容至1000mL。 ( 4( 5264.. pH7.

磷酸盐缓冲液:临用时,将磷酸氢二钠水溶液

4.2.)与磷酸二氢钾水溶 ( 4( 5269∶1混合。34. 仪器和设备3314.. 分析天平:感量为0.1g。3132 333 24..

恒温水浴锅(或恒温培养箱):032 333 24.. 具塞锥形瓶:50mL。34 1 2 135 5 2364..

量筒34 1 2 135 5 2364.. 移液管:

mL、0mL。4.. 研钵。37 23839 5314..滴定管37 23839 5314.. 多功能粉碎机。4.. 离心管:0mL。4..0

离心机。 231 331314..1

样品筛:

mm

231 331314..2

摇床:00r/min。4..3

电炉。3144..4

滤纸:中速。3144. 试验步骤414.. 样品处理41将干燥脱皮花生样品混合均匀,倒入粉碎机粉碎,过2mm

孔径样品筛,收集筛下样品。424.. 过氧化氢酶的提取42( 655称取过筛后样品约1g,精确至0.1g,倒入研钵,研磨至无粗粒,量取pH

值7.

磷酸盐缓冲( 6554.2.)0mL,先加入少量以润湿样品,细磨至糊状后,小心转移至50mL离心管中,剩余缓冲液分多次洗净研钵,洗液并入50mL离心管中,剧烈振摇10min,000r/min离心5min,用滤纸全部过滤。434.. 过氧化氢酶活性的测定43( 1准确移取20mL滤液于250mL锥形瓶中,加入20mL水和3mL2%过氧化氢溶液

4.2.( 12m

×8.×50m

×8.×5020

…………(1)3 (1( 3匀,0℃恒温水浴锅中水浴15min,取出,加入5mL10%硫酸溶液

4.2.),摇匀,用0.3 (1( 3酸钾标准滴定溶液

4.2.)滴定剩余的过氧化氢,至溶液呈粉红色,记录消耗高锰酸钾标准溶液体积。444.. 空白试验44( 1 3 ( /1 ( 3吸取20mL滤液于250mL锥形瓶中,( 1 3 ( /1 ( 3氢溶液

4.2.),摇匀,0℃恒温水浴锅中水浴15min,取出,加入5mL10%硫酸溶液

4.2.),摇匀,用0.

molL高锰酸钾标准滴定溶液

4.2.)滴定剩余的过氧化氢,至溶液呈粉红色,记录消耗高锰酸钾标准溶液体积。54. 结果计算5 1X过氧化氢酶活性(

1)按公式() 1XVX1=(

0-V1)×

c 5V式中:X1

———过氧化氢酶活性(以过氧化氢计),单位为毫克每克(mg/g);V0

———空白试验用去高锰酸钾体积,单位为毫升(mL);V1

———样品滴定用去高锰酸钾体积,单位为毫升(mL);c

———高锰酸钾标准溶液浓度,单位为摩尔每升(mol/L);gm ———试样的质量,单位为克();g5 0c 1 18.———与1.0mL高锰酸钾标准溶液[(/5KMnO4)=0.

mol/L]相当的

H2O2

的5 0c 1 1氧化氢计),单位为毫克每摩尔(mg/mol)。实际样品检测示例见附录

A。64. 重复性6相同的试验材料,用同样的方法,在同一实验室由同一操作人员在较短的时间间隔内获得的两个独立的测定结果之间绝对差值不得超过其算术平均值的10%。5

过氧化物酶活性的测定15. 原理17过氧化物酶能迅速催化过氧化氢氧化愈创木酚(又名邻甲氧基苯酚,化学式:C

H8O2)生成棕色的7四邻甲氧基连酚,通过436nm

处吸光度值的变化计算其酶活性。反应式为:3

X 2=

ΔA

X 2=

ΔA

×3.×4×D

25.×1×0.5×2×V

m ×1000 …………(2)25. 试剂和材料2除另有说明外,所用试剂均为分析纯。水为符合

GB/T6682规定的三级水。 1 621 1 2 822 / /10 1 (1

6 1235.. 1 621 1 2 822 / /10 1 (1

6 1235..

0.

mol/L磷酸氢二钠:称取

NaHPO4·12H2O35.g,加水溶解定容至1000mL。5..

0.

molLpH7.

磷酸盐缓冲液:量取38mL0.

molL磷酸二氢钠

5.2.)、2mL0.

mol/(L磷酸氢二钠

5.2.)混匀

。( 824 42535..

80mmol/L愈创木酚水溶液:量取0.8mL愈创木酚用水定容至100 824 42535..

40mmol/L过氧化氢水溶液:量取0.1mL30%过氧化氢用水定容至100mL。5. 仪器和设备315.. 分光光度计。31325.. 分析天平:感量为0.1g。3233 234 2355.. 恒温水浴锅(或恒温培养箱):533 234 2355.. 样品筛:

mm

孔径。5.. 研钵。36 1 1 537 5385.. 36 1 1 537 5385..离心管:0mL。5..离心机。39 3 131313145..摇床39 3 131313145..0

比色皿:cm。5..1

多功能粉碎机。5..2

滤纸:中速。5. 试验步骤415.. 样品处理41见4.4.1。425.. 过氧化物酶的提取420( 355称取过筛后样品约1g,精确至0.1g,倒入研钵,研磨至无粗粒,吸取pH7.

磷酸盐缓冲0( 3555.2.)

mL,先加入少量以润湿样品,细磨至糊状后,小心转移至50mL离心管中,剩余缓冲液分多次洗净研钵,洗液并入50mL离心管中,剧烈振摇10min,000r/min离心5min,用滤纸全部过滤。435.. 过氧化物酶活性测定43 /8 1 0 ( 3 1(4(5于1cm

比色皿中,依次加入2.

/8 1 0 ( 3 1(4(5L愈创木酚水溶液

5.2.

)和0.5mL

样品提取液,混匀,在放入分光光度计之前加入0.5

mL40mmol/L过氧化氢水溶液

5.2.),快速混匀,于分光光度计436nm

波长下,测定初始时和2min后的吸光度值,两者之差即为ΔA。每次测定至少完成2个平行实验。55.结果计算5 2X过氧化物酶活性(

2)按公式() 2X05 04HS/T81—2023式中:X2

———过氧化物酶活性,单位为过氧化物酶活性单位每克(U/g);ΔA ———样品吸光度变化值;03. ———反应试剂的总体积,单位为毫升(mL);04 ———四邻甲氧基连酚换算成过氧化氢的量的系数;D ———稀释倍数;Lc25.

———四邻甲氧基连酚的摩尔消光系数,单位为升每摩尔厘米[/(mol·cm)];Lc1 ———比色皿光径,单位为厘米(m);g0.5———参与反应样品的体积,单位为毫升(mL);g2———反应时间,单位为分钟(min);m ———样品质量,单位为克();V ———提取样品所用磷酸盐缓冲液的体积,单位为毫升(mL)。实际样品检测示例见附录

A。65. 重复性6相同的试验材料,用同样的方法,在同一实验室由同一操作人员在较短的时间间隔内获得的两个独立的测定结果之间绝对差值不得超过其算术平均值的10%。6

试验报告试验报告至少应给出以下内容:a)

试样描述;b)

本文件编号;c)

试验结果;d)

测试日期。5样品项目名称实验室1实验室2实验室3实验室4实验室5平均值SDRSD/%鲜花生过氧化氢酶活性(以过氧化氢计)/(mg/g)46.345.745.746.146.646.10.390.84过氧化物酶活性/(U/g)44614495442744874494447329.010.65生花生过氧化氢酶活性(以过氧化氢计)/(mg/g)38.739.239.138.738.938.90.220.57过氧化物酶活性/(U/g)21592171219221652177217312.680.58干燥脱皮花生过氧化氢酶活性(以过氧化氢计)/(mg/g)30.530.730.630.731.030.70.190.60过氧化物酶活性/(U/g)2882902852852902872.380.83经150℃30min烘烤的生花生过氧化氢酶活性(以过氧化氢计)/(mg/g)0.180.180.170.170.170.170.012.87过氧化物酶活性/(U/g)0.000.000.000.000.000.0000经150℃30min烘烤的干燥脱皮花生过氧化氢酶活性(以过氧化氢计)/(mg/g)0.190.180.190.190.170.180.013.6过氧化物酶活性/(U/g)0.000.000.00