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FISH实验操作步骤（教员版）―、第一天（FISH—）:染色体制备实验前准备：1.KCL低渗液37°C预热载玻片4C预冷实验步骤：同学生实验指导步骤要求：两人一组，每人制片一张，一张进行吉姆莎染色，一张第二天进行FISH杂交，记住细胞位置（便于第二天杂交定位）玻片自然风干，室温过夜二、第二天（FISH二）：FISH杂交实验前准备：1.胃蛋白酶37C水浴预热30分钟2.打开病理烘漂仪，将漂片，摊片、烘片均设置到85C实验步骤（未注明温度均为室温）：水合：将染色体制备的玻片于PBS中浸泡5min。固定：4%的甲醛-PBS，2min。3.漂洗：PBS洗3次，每次2min。4.消化：37C胃蛋白酶消化10min。5.漂洗：PBS洗2次，每次2min。6.再固定：4%的甲醛-PBS，2min。7.漂洗：PBS洗3次，每次2min。梯度乙醇脱水：在70%、95%、100%乙醇各脱水5min。在空气中干燥玻片预热：将载玻片、盖玻片、杂交液、枪头盒于85°C预热5min变性：加12ul杂交液至载玻片细胞处，盖上盖玻片，在85C变性3-10min,避光。注：变性温度在（80C-90C均可，不得低于75C）此后步骤均避光。杂交：37C，避光杂交1小时。漂洗：37C，杂交洗液1洗2次，每次15min。漂洗及复染：37C，杂交洗液2洗3次，每次5min。第二次洗涤后，取出载片，稍干，加10U1DAPI，盖上盖玻片复染5分钟，再进行第三次洗涤。脱水：在70%、95%、100%乙醇各脱水5min，空气中干燥爬片。封片，荧光显微镜下观察结果。注：本实验15步不做，14步完后直接封片，4度避光保存待观察。FISH实验器材：一、试剂（用后及时补充）PBS2.中性甲醛1瓶3.O.O1MHCL200ml,用时直接加入200ul蛋白酶混匀4.探针4.探针1管，常温放置，用前5分钟预热杂交洗液1 1瓶杂交洗液2 1瓶梯度酒精 各1瓶1瓶封片剂1瓶9.DAPI1管（已稀释，直接使用）10.镜头油9.DAPI1管（已稀释，直接使用）10.镜头油1瓶（荧光显微镜实验室）二、器材1.载玻片盖玻片镊子手套卷纸湿盒抗原修复盒 8个注意：1.课前清点补充试

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