基因工程研究课件

基因工程研究体外操作与细胞内表达

(基因工程技术包括下列过程)

分─获取目的基因和载体

接─目的基因与载体的连接转─重组DNA导入宿主细胞

筛─重组DNA的筛选

鉴─重组DNA的鉴定

可用以上五个字表示(一)目的基因的分离(分)目的基因:是指所要研究或应用的基因,也是需要克隆或表达的基因。(一)目的基因的分离1、基因分离的策略一般分离基因的策略要满足以下几个基本特性中的至少一个:(1)具有特定的核苷酸序列;(2)存在于基因组中某一特定位置;(3)编码mRNA;(4)大多具有一定的功能。2、基因分离的注意事项

(1)以基因表达产物蛋白质的纯化或表型突变体的分离;(2)通过植物细胞工程、物理和化学诱变等技术,获得植物基因;(3)可在cDNA文库中随机取一个克隆;(5)采用染色体步移(chromosomalwalking)方法分离基因出来;(6)许多植物基因可以根据其与细菌和酵母突变互补能力来分离;(7)许多有潜在利用价值的植物基因。(二)目的基因的制备需要克隆的DNA片段化学合成法

cDNA文库基因组DNA文库聚合酶链式反应

化学合成方法制备方法生物制备法

根据已知多肽链的氨基酸顺序,利用遗传密码表推定其核苷酸顺序再进行人工合成。适应于合成小分子多肽的基因

全基因合成:合成40-60bp片段,再连接合成思路基因的半合成:合成末端间有10-14bp个互补碱基的片段,再利用DNA聚合酶催化合成目前,常用DNA自动合成仪合成。1)化学合成法重叠区重叠区合成目的基因的引物化学合成思路模式图连接目的基因全长用途:

PCR引物测序引物定点突变核酸杂交探针2、基因组文库(GenomicDNALibrary)

基因组文库(genelibrary):是指汇集某一基因组所有DNA序列的重组DNA群体

从生物组织细胞提取出基因组DNA,用限制性酶法将DNA降解成预期大小的片段,并电泳分离,然后将这些片段与适当的载体(噬菌体)体外重组,进行体外包装系统将重组体包装成完整颗粒,转入受体细菌(大肠杆菌),形成大量噬菌斑,从而形成整个基因组DNA的重组DNA克隆群体,称为基因组DNA文库。具备了基因组文库,就可以用目的基因片段作探针,利用菌落原位杂交技术,从大量的菌落中筛选出含有目的基因的重组体的菌落,再经过扩增,提取其中的重组体,最后即可获得所需要的目的基因片段。基因组DNA文库法示意图DigestwithrestrictionenzymeGenomeDNADNArecombinationTransformationPackagingandassembly

GenomeDNA3、cDNA文库法

cDNA文库(cDNAlibrary):是指汇集以某生物成熟mRNA为模板逆转录而成的cDNA序列的重组DNA群体

操作流程:提取出组织细胞的全部mRNA,在体外反转录成cDNA,与适当的载体,常用噬菌体或质粒载体连接后转化受体菌,则每个细菌含有一段cDNA,并能繁殖扩增,这样包含着细胞全部mRNA信息的cDNA克隆集合就形成了该组织细胞的cDNA文库。

实际为不包含内含子的基因组文库。导入宿主细胞克隆,构建cDNA文库

分离目的基因的mRNA逆转录生成cDNA单链水解去除mRNA,合成cDNA双链水解回折处单链得到平端双链cDNA(三)聚合酶链反应(PCR)在模板DNA、引物、dNTP、TaqDNA聚合酶等条件下,体外经94℃变性、54℃退火及72℃延伸3个步骤的反复多次循环(2530次),扩增目的基因引物引物3’5’5’5’基因组二、目的基因与载体的重组(接)(一)质粒DNA的分离和纯化(二)目的基因与载体的连接

1、粘性末端连接2、平头末端连接3、人工接头法4、同源多聚尾连接法(一)质粒DNA的分离和纯化

载体的本质是DNA,所以其分离纯化类似于DNA的分离纯化纯化步骤:质粒载体宿主菌释放出质粒DNA、多聚核糖体、可溶性蛋白质、tRNA等细胞内大分子DNA除去蛋白质粒DNA与核内环性和线性DNA分开溶菌酶离心酚EB,CsCl离心

1、粘性末端连接将目的基因和载体用同一种限制酶酶切,产生相同粘性末端,再通过DNA连接酶作用将两者连接起来,构成重组DNA分子。

2、平头末端连接某些限制酶只能将目的基因和载体DNA切割成平端,此时在T4DNA连接酶的作用下同样能连接起来。(二)目的基因与载体的连接基因和载体用同一种限制酶酶切(粘性末端连接)3、人工接头法

人工接头是合成的寡核苷酸,在其上人为地安置了限制性内切酶的识别序列。将人工接头连接到载体和目的基因上,即有可能使用同一种限制酶对载体和目的基因进行切断,得到可以互补的粘性末端。4、同源多聚尾连接法

也称作人工接尾连接法当载体和目的基因无法采用同一种限制酶进行切断,无法得到相同得粘性末端时,可采用此方法。此法首先使用单链核酸酶将粘性末端切平,再在末端核苷酸转移酶的催化下,将脱氧核糖核苷酸添加于载体或目的基因的3'-端,如载体上添加一段polyG,则可在目的基因上添加一段polyC,故二者即可通过碱基互补进行粘合,再由DNA连接酶连接。同源多聚尾连接法三、将重组体导入受体细胞(转)

根据受体生物,可将重组体导入受体细胞的方法主要分为大肠杆菌转化法、酵母转化法、植物细胞转化法及动物细胞转化法

(一)大肠杆菌转化法1、氯化钙转化法(狭义的转化)或转染感受态细胞(CompetentCell)的制备:用特殊方法处理,使细胞膜通透性增加,从而具有摄取外源DNA的能力。转化流程:感受态细胞和重组DNA混合,使DNA与钙离子形成复合物,吸附于细胞表面,经42℃短暂(90s)的热处理,促进外源DNA进入感受态细胞。50-100mmol/LCaCl2

感受态细菌重组体转入细菌CaCl2感受态细胞的制备实验步骤

前夜接种受体菌(DH5

或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);

取1ml过夜培养物转接于100mlLB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-300rpm);

将0.1MCaCl2溶液置于冰上预冷;以下步骤需在超净工作台和冰上操作;

吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟;4℃下3000g冷冻离心5分钟;

弃去上清,加入100

l预冷0.1MCaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮,在冰放置20分钟;4℃下3000g冷冻离心5分钟;

弃去上清,加入100

l预冷0.1MCaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮;

细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂(15﹪-20﹪甘油)后超低温冷冻贮存备用(－70℃)。几个概念:狭义的转化(transformation)是感受态的大肠杆菌细胞接受及表达质粒DNA分子的生命过程──氯化钙转化法;

转染(transfection)是感受态的大肠杆菌细胞接受及表达噬菌体DNA分子的生命过程。

狭义的转化得到的是转化子菌落;而转染得到的是噬菌斑

广义的转化是指将外源DNA引入受体生物细胞的过程。2、转导(transduction)

将重组的λ噬菌体DNA或柯斯质粒DNA体外包装成具有感染能力的λ噬菌体颗粒,然后经受体细胞表面的λ噬菌体接受器位点使这些重组体DNA注人大肠杆菌宿主细胞。

转染的效率较低,在基因工程中,λ噬菌体DNA等的直接转染并不常用。因此,常用λDNA体外包装技术。即首先将λ噬菌体DNA或柯斯质粒DNA体外包装成具有感染能力的λ噬菌体颗粒,然后再以其转导受体细胞基因重组转导体外包装噬菌体噬菌体体外包装λ噬菌体体外包装的基本原理:

λ噬菌体的头部和尾部的装配是分开进行的。头部基因发生了突变的噬菌体只能形成尾部,而尾部基因发生了突变的噬菌体只能形成头部。将这两种不同突变型的噬菌体提取物混合起来就能在体外装配成有生物活性的噬菌体颗粒。

一般只要为重组DNA提供高浓度的噬菌体前体,包括包装蛋白、头部、尾部,就有可能形成完整的噬菌体颗粒。

λ噬菌体头部外壳蛋白包装DNA的容量控制在野生型λDNA长度的75％一105％。

(二)酵母转化法1、完整细胞转化法

首先利用乙酸锂或氯化锂处理对数生长期的酵母细胞,然后在运载DNA(鲑精DNA、小牛胸腺DNA)、二甲基亚砜(dimethylsulfoxide,DMSO)和聚乙二醇存在下,重组DNA经热冲击进入酵母细胞在转化过程中,PEG(聚乙二醇

)的作用非常重要,因为PEG能将大分子DNA沉积于受体细胞表面2、原生质体转化法

酵母细胞经过用适当水解酶酶解消化细胞壁等处理后,也像大肠杆菌一样能够接受外源DNA重组体的导入。操作方法:

该法首先利用蜗牛酶处理对数生长期的酵母细胞,然后将经酶解去除了细胞壁的原生质体悬浮于山梨醇及氯化钙的溶液中,在运载DNA的存在下,用聚乙二醇使重组DNA分子进入酵母细胞。(三)植物细胞转化法1、农杆菌质粒介导法

农杆菌介导法是目前双子叶植物基因转移的常用方法。它是利用根癌农杆菌的Ti(Tumorinduce)质粒和发根农杆菌的Ri(Rootinduce)质粒上的一段T-DNA区在农杆菌侵染植物形成肿瘤的过程中,T-DNA可以被转移到植物细胞并插入到染色体基因中。利用Ti质粒的这一天然的遗传转化特性,可将外源基因置换T-DNA中的非必需序列即可使外源基因整合到受体染色体而获得稳定的表达。迄今所获得的近200种转基因植株中80％以上是利用根癌农杆菌转化系统产生的。crowngallortumor一般流程如下:根癌农杆菌的培养、纯化→根癌农杆菌工程菌侵染液的制备→植物外植体的预培养→将根癌农杆菌工程菌接种到植物外植体的损伤切面→植物外植体与根癌农杆菌的共培养→植物外植体的脱菌培养→转化体的选择培养。农杆菌的活化挑单克隆进行培养、纯化收集细胞

用液体MS培养基重悬细胞将预培养的外植体放入菌液中共培养预培养的植物外植体工程菌共培养在含有选择压力的培养基上诱导细胞分化,形成转化芽(脱菌培养)转化体的诱导芽生长生根,形成转化植株2、基因枪法

基因枪法首先将外源DNA黏附在微小的金粒或钨粒的表面,然后在高压的作用下,将微粒高速射入受体细胞或组织,使微粒上的外源DNA进入受体细胞,整合于染色体上基因枪转化的操作步骤:

金粒、钨粒的处理微粒子弹的制备(外源DNA-金粒或钨粒复合体的制备)装备基因枪靶细胞或组织的预处理DNA-金粒或钨粒复合体轰击轰击材料的过渡培养进行筛选培养或直接分化再生植株台式基因枪便携式基因枪基因枪法转化的优点有:

无宿主限制:农杆菌介导法只对双子叶植物敏感,限制了它的应用范围。而基因枪没有物种限制。

靶受体类型广泛:可以是原生质体,叶片,悬浮细胞,茎或根切段,种子胚,愈伤组织,花粉等。

操作简单快速缺点:

转化率低,外源DNA整合机理不清楚。应该说该技术只处在研究阶段,尚未成熟。

1、显微注射法

显微注射法首先利用非常微细的玻璃毛细管携带外源DNA,在显微镜下直接将外源DNA注射到动物受精卵细胞核中,然后将导入外源DNA的受精卵经体外培养、检测后作胚胎移植MicroinjectionGenetransferbymicroinjectionMicroinjection的主要特点如下:

①体外受精。从受体动物的卵巢里获得卵母细胞,体外孵育成熟,加入精子,进行体外受精,并进行受精卵的体外培养;②在胚胎移植前检测、鉴定外源DNA的整合,可定向挑选具有目的基因整合的胚胎进行移植;③改进胚胎移植技术可以减少受精卵的损伤,提高受精率。Firstclonedcat2、磷酸钙共沉淀法

磷酸钙共沉淀法首先将一定浓度的氯化钙和外源DNA置于含有靶细胞的磷酸缓冲液中,然后调节pH使外源DNA与钙结合形成白色的共沉淀。这些白色沉淀可沉积于靶细胞细胞膜的表面,阻断溶酶体酶的活性,改善细胞膜的通透性,并诱导细胞吞噬,从而使外源DNA进入靶细胞。

该法适于多种细胞,并可形成稳定的转化子3、电穿孔法电穿孔法(electroporation)是指利用高压电脉冲使细胞膜形成小孔而导入外源DNA的技术一般流程:将外源DNA与待转化的细胞置于特制的装置内→在高压脉冲电场作用下,电脉冲可使细胞膜产生瞬时可逆性穿孔→同时,通过细胞的胞饮作用,外源DNA被摄入细胞→外源DNA整合到细胞的基因组上。该法适于导入环型DNA及线形DNA4、病毒感染法

将外源DNA与病毒重组,将其包装,形成完整病毒颗粒,然后将病毒颗粒释放到培养基上,使其在聚乙二醇的作用下感染受体细胞,进行基因转移。受体细胞聚乙二醇感染四、重组转化体的筛选和鉴定(筛和鉴)(一)利用表型特征进行筛选(遗传检测法)表型(phenotype)是指机体遗传组成同环境相互作用所产生的外观或其他特征。供筛选用的表型特征来自两个方面:一是克隆载体提供的,这是主要的;一是外源DNA提供的,这是次要的。

1、利用载体提供的表型特征进行筛选

(1)抗药性标记基因插入失活筛选法

对于带有抗药基因的质粒重组体,可采用插入灭活法进行筛选。如pBR322中带有抗氨苄青霉素和抗四环素基因,当将目的基因插入抗四环素基因后,就可引起该基因失活,细菌对氨苄青霉素耐药,而对四环素敏感。在含氨苄青霉素的培养基上能够生长,而在含四环素的培养基上不能生长的细菌即为带重组体的细菌。

(2)蓝-白筛选法

它是一种利用蓝色化合物的形成作为指示剂的筛选方法,筛选含有编码β-半乳糖苷酶的基因。β─半乳糖苷酶失活的λ插入型载体的基因组中含有一个大肠杆菌的lac5区段

→编码β─半乳糖苷酶基因lacZ

Xgal→蓝色复合物(5-溴-4-氯靛蓝)

λ载体感染的大肠杆菌1ac-指示菌培养基平板

(IPTG+

Xgal

)形成蓝色的噬菌斑;

如果在lac5区段插入外源DNA,就会阻断β─半乳糖苷酶基因lacZ的编码序列,那么被这种λ重组体感染的1ac─指示菌由于不能合成β─半乳糖苷酶而只能形成无色的噬菌斑

IPTG涂布

蓝－白筛选示意图2、利用外源DNA提供的表型特征进行筛选这种筛选法要求外源DNA是一个完整的基因,而且能够在大肠杆菌或其他受体细胞中实现功能表达。该法基本原理如下:与载体重组的外源DNA完整基因对大肠杆菌转化宿主菌株表现出外源基因所编码的表型特征;从而与未被转化的菌株分别开。3、利用噬菌斑的形成进行筛选以λ噬菌体载体与外源DNA构建的重组体的筛选,主要依赖于重组体的大小及形成噬菌斑的能力。重组体DNA只有在为野生型λ噬菌体DNA的75％～105％的长度时,才能在培养平板上形成清晰的噬菌斑,而载体DNA本身是不会包装成活的噬菌体颗粒的。4、利用遗传互补作用进行筛选

如果在转化宿主细胞后,重组体的表达产物可与宿主的营养缺陷型突变发生互补作用,那么根据这种特性,即可筛选出重组转化体。(二)物理筛选鉴定法电泳检测法

根据DNA分子量的大小,以凝胶电泳检测重组体。(三)利用限制性内切核酸酶酶切进行鉴定将单一细菌进行扩增后分别提取其DNA,用重组时所用的同一限制酶进行酶切,再将其与不含目的基因的载体一起进行电泳比较分析。(四)利用核酸杂交进行鉴定所用的核酸杂交法就是常用的几种核酸杂交法,例如Southern杂交、Nonhem杂交等

(五)利用PCR技术进行鉴定利用PCR技术可以对目的基因等特异核酸进行鉴定。

抽提少量重组DNA→PCR扩增→电泳鉴定→序列分析→与已知序列比对(六)利用免疫学方法进行筛选鉴定原理:以目的基因在受体细胞中的表达产物(多肽)作Ag,以该基因产物的免疫血清作Ab,根据抗原─抗体反应,即可筛选并鉴定出目的基因克隆及其产物方法:放射性抗体检测法、免疫沉淀检测法、酶联免疫吸附检测法等1、放射性抗体检测法

转化菌体涂布在琼脂培养基平板上→出现菌落后,将其影印到另一琼脂平板上继续培养,保留母板→待影印琼脂平板上的菌落长好后,将其置于含有氯仿饱和气体的容器中使菌落裂解,阳性菌落便释放出抗原→将吸附了未标记IgG抗体的聚乙烯薄膜覆盖在琼脂平板表面。如果抗原与抗体具有对应关系,在薄膜上就会形成抗原─抗体复合物→取下聚乙烯薄膜,再用125I标记的IgG处理,125I─IgG便会与结合在聚乙烯薄膜上的抗原决定簇结合→漂洗聚乙烯薄膜,除去过剩的125I─IgG,在空气中使之干燥→作放射性自显影,判断结果→从母板上获得所需重组克隆。自学内容免疫沉淀检测法

酶联免疫吸附检测法

转译筛选鉴定法

2、免疫沉淀检测法

抗特定蛋白的抗体菌落细菌分泌这种蛋白菌落细菌分泌其他蛋白抗原-抗体沉淀白圈3、酶联免疫吸附检测法

抗原固定在固相载体上,加入抗体、酶标记抗体,形成抗体─抗原─酶标抗体复合物,加入合适酶的显色剂进行检测(七)利用Western杂交进行鉴定Westernblot技术是用来检测蛋白表达的特定的灵敏的方法,由蛋白质的SDS、吸印、杂交和免疫测定几部分组成。与Southern或Northern杂交方法类似,但WesternBlot采用的是PAGE电泳,被检测物是蛋白质,“探针”是抗体,“显色”用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品,转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上,固相载体以非共价键形式吸附蛋白质,且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原,与对应的抗体起免疫反应,再与酶或同位素标记的第二抗体起反应,经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

五、克隆基因的表达基因工程研究的最终目的就是使外源基因在受体生物系统中高效表达,而基因表达一般包括转录和转译两个过程。转录翻译RNADNARNA转录protein(一)原核生物与真核生物系统中基因表达的不同特点1、DNA的存在状态不同2、重复序列的不同3、内含子和转录后加工系统是否存在4、基因表达的单位不同5、RNA聚合酶的种类不同6、核膜的有无决定着转录与转译是否偶联7、转录的控制不同8、真核生物mRNA分子的5’端和3’端都会发生修饰作用9、mRNA的寿命不同10、S-D序列是否存在原核生物mRNA的结构特点5´3´顺反子顺反子顺反子插入顺序插入顺序先导区末端顺序AGGAGGUSD区半衰期短许多原核生物mRNA以多顺反子形式存在AUG作为起始密码;AUG上游7～12个核苷酸处有一被称为SD序列的保守区,16SrRNA3’-端反向互补而使mRNA与核糖体结合。真核生物基因结构图内含子1（I1）内含子2（I2）外显子3（E3）105146外显子2（E2）31104

转录起始点TATA框RNA聚合酶结合决定转录起始点CAAT框RNA聚合酶结合控制转录频率外显子1（E1）130AATAAA

回文顺序GC框GC框转录终止信号真核生物mRNA的结构特点

5´

“帽子”PolyA

3´

顺反子m7G-5´ppp-N-3´p帽子结构功能使mRNA免遭核酸酶的破坏使mRNA能与核糖体小亚基结合并开始合成蛋白质被蛋白质合成的起始因子所识别,从而促进蛋白质的合成。Poly(A)尾巴的功能是mRNA由细胞核进入细胞质所必需的形式它大大提高了mRNA在细胞质中的稳定性

AAAAAAA-OH(二)外源基因在受体生物细胞中正确表达的条件启动子S-D序列起始密码子终止子转译后的修饰与加工

启动子(promoter):是指DNA链上一段能与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成(转录)的序列,是基因表达不可缺少的重要调控序列。如果没有启动子,就不能进行转录。原核生物启动子是由两段分开、但高度保守的核苷酸序列组成的。其中之一为Pribnow

box,位于转录起始点上游5～10bp,一般由6～8个碱基组成,富含A、T,因此其又称为TATAbox或-10区;另一序列为-35区,位于转录起始点上游35bp处,一般由10个碱基组成。

-35-10

转录起点TTGACA16-19bpTATAAT5-9bp典型启动子的结构真核生物蛋白质基因的一般结构模型

S-D序列是指位于mRNA的5’端不转译的前导区段内起始密码子AUG上游3-10bp处的由3～9个碱基组成的一段序列。该段序列富含嘌呤核苷酸,与16SrRNA的3’端富含嘧啶的序列(AUUCCUCCACUAG)互补,是rRNA的识别和结合位点,控制转译的起始。5´3´顺反子顺反子顺反子插入顺序插入顺序先导区末端顺序AGGAGGUSD区

起始密码子(initiationcodon)是指规定多肽链的第一个氨基酸的密码子。细菌的起始密码子为AUG,它转译为N-甲酰基甲硫氨酸(一种修饰的氨基酸);或较罕见的GUG,它转译为缬氨酸。真核生物的起始密码子为AUG,并转译为甲硫氨酸。其也用来表示DNA中的相应顺序ATG。终止子(terminator),即转录终止子,是指位于一个基因或操纵子3’末端后的一段特定核苷酸序列,其具终止转录的功能。

在构建表达载体时,为防止所克隆外源基因的表达干扰载体的稳定性,一般都在多克隆位点的下游插入一段很强的核糖体RNA的转录终止子。转译后的修饰与加工:在真核细胞中,有时需要将前体蛋白降解为功能蛋白;有时需要进行某种修饰,例如,糖基化为糖蛋白。(三)外源基因在受体(原核)生物细胞中高效表达的调控1、选用强启动子及增强子

强的启动子可产生较多的mRNA,而弱的启动子则相反。启动子区域的序列是高度保守的。在原核细胞中,一个区域是位于转录起点上游10bp的-10区的TATAAT序列(Pribnowbox);另一个区域是-35区的TTGACA序列。这两个区域对于决定启动子的强度是很重要的。

增强子(enhancer)是位于更上游处的72bp的重复序列,有时也位于基因3’端的下游区或位于内含子中,其作用为促进基因转录,增强基因表达。2、调整S-D序列与AUG之间距离

以此达到最佳的转译效率。3、优化转译起始相关序列

当连接在S-D序列后的4个碱基为4个A(T)时,其转译作用最有效;而当连接在S-D序列后的4个碱基为4个C(或4个G)时,其转录效率则只有最高转译效率的50％(或25％)。直接位于起始密码子AUG左侧的密码三联体的碱基组成也会影响转译效率。4、优化起始密码子下游密码子组成

使外源基因能在受体细胞中转录。5、采用转录终止子6、提高质粒拷贝数及其稳定性7、诱导受体细胞生长与外源基因表达分开8、诱导受体细胞生长与表达载体复制分开9、表达分泌蛋白10、表达融合蛋白第三节基因工程在食品科学中的应用基因工程与动物、植物、微生物产品品质的改良

基因工程与植物产品贮藏保鲜

基因工程与食品新资源的开发一、基因工程与动物、植物和微生物产品品质的改良(一)培育抗病虫害、抗除草剂的植物新品种及抗冻动物新品种的基因工程1、ICP基因工程

ICP基因来自于苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)。其营养体生长发育到一定阶段后,在其一端形成芽孢,在另一端形成伴胞晶体。伴胞晶体主要由蛋白质和糖类组成。当昆虫吞食伴胞晶体后,在昆虫肠道碱性条件和特定蛋白酶的作用下,伴胞晶体蛋白变成有活性的毒性分子。这种蛋白为δ-内毒素(δ-endotoxin),被称作杀毒结晶蛋白(insecticidalcrystalprotein,ICP)ICP基因工程研究进展

培育植物新品种、作物害虫抗性2、蛋白酶抑制剂基因工程

在自然界中的所有生命体中,尤其在植物中,都含有蛋白酶抑制剂(proteinase

inhibitor,PI)。蛋白酶抑制剂与昆虫消化道内的蛋白消化酶相结合形成酶抑制剂复合物(EI),导致蛋白质不能被正常消化;同时EI复合物能刺激昆虫过量分泌消化酶,使昆虫产生厌食反应,干扰昆虫的蜕皮过程和免疫功能

,使昆虫不能正常发育或死亡。3、其他抗虫基因工程转基因番茄的抗蚜虫性能4、抗病毒病基因工程

外源的病毒外壳蛋白(coatprotein,CP)基因在导入植物细胞后,可能由于其RNA转录体与入侵病毒RNA间的相互作用使植物细胞获得保护

研究人员分别将烟草抗TMV的N基因、CMV的CP基因、CMV卫星DNA的cDNA、TYLCV的CP基因、AIMV的CP基因等转入番茄,所获得的转基因植株均对相应的病毒侵染表现抗性。

转基因抗虫棉和普通棉对照转基因耐贮藏番茄(左)和普通番茄(右)5、抗真菌病基因工程抗枯病菌的烟草

、抗真菌的甘蓝型油菜、抗立枯丝核菌的烟草、抗晚疫病的番茄等6、抗细菌病基因工程抗青枯病的番茄等7、抗除草剂基因工程抗多种除草剂的转基因植物8、抗低温基因工程抗低温的转基因鱼类(二)改良微生物菌种特性的基因工程

第一个采用基因工程改造的食品微生物为面包酵母。由于把具有优良特性的酶基因转移至该菌中,因此使该菌含有的麦芽糖透性酶(maltosepermease)及麦芽糖酶(maltase)的含量比普通面包酵母高,在面包加工中所产生的二氧化碳气体量也较高,从而制造出膨发性能良好、松软可口的面包产品。(三)改良动植物品种质量的基因工程1、改良谷物种子贮藏蛋白的基因工程(1)改良种子贮藏蛋白营养品质的基因工程(2)改良种子贮藏蛋白面包烘烤质量的基因工程2、改良脂肪酸组成的基因工程

(1)增加饱和脂肪酸含量的基因工程(2)降低饱和脂肪酸含量的基因工程3、增加果实甜度的基因工程

4、提高果实可溶性固形物含量的基因工程

5、提高果实等器官组织微量元素含量的基因工程6、提高动物生长速度、增加动物营养价值的基因工程二、基因工程与植物产品贮藏保鲜(一)PG基因工程(二)ACC合成酶基因工程(三)乙烯形成酶基因工程(四)ACC脱氨酶基因工程三、基因工程与食品新资源的开发现今医学分为传统医学、基于“生物-医学模式”近代发展起来的西医，20世纪西医又发展到“社会-心理-生物医学”或综合医学模式，后基因组时代系统生物学的兴起，形成了系统医学在全球的迅速发展，成为继传统医学、西医学之后中、西医学汇通的未来医学。当代中国医学类专业比较优秀的学校有北京大学、华中科技医学化验医学定义（medicine），是处理人健康定义中人的生理处于良好状态相关问题的一种科学，（高血压心脏病糖尿病）以治疗预防生理疾病和提高人体生理机体健康为目的。狭义的医学只是疾病的治疗和机体有效功能的极限恢复，广义的医学还包括中国养生学和由此衍生的西方的营养学。现在世界上医学主要有西方微观西医学和东方宏观中医学两大系统体系。医学的科学性在与应用基础医学的理论不断完善和实践的验证，例如生化、生理、微生物学、解剖、病理学、（肺炎青霉素肝炎）药理学、统计学、流行病学，中医学及中医技能等，来治疗疾病与促进健康。虽然东西方由于思维方式的不同导致（高血压心脏病糖尿病）研究人体健康与外界联系及病理机制的宏观微观顺序不同，但在不远的将来中西医实践的丰富经验的积累和理论的形成必将诞生新的医学人类医学。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）不同于现代医学，不同于传统中医，（传染病丙肝乙肝甲肝）金水医学诞生了，金水医学是以驱除病理，恢复生理为主张的全新医学，走出了人类医学的误区，（肺血液血小板红血球白血球）治疗疾病的特色鲜明，不论是任何疾病都能做到从危为安，由重到轻的恢复办法。金水医学认识到人体是生命体，生命体有自己的强大的生理自我愈合功能，（高血压心脏病糖尿病）帮助生命体恢复自主作用才是治疗疾病的根本。针对当今现代文明病，现代疑难病，现代慢性病，亚健康，一体多病，取得了巨大的成功，治疗法则为“胃肠洁，气血流，玄府开，营卫昌”人生命体运动符合自然节律，最终达到人体生理增强，消灭疾病的目的。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）编辑本段医学的分类医学研究医学可分为现代医学（即通常说的西医学）和传统医学（包括中医学、（高血压心脏病糖尿病）藏医学、蒙医学等）多种医学体系。不同地区和民族都有相应的一些医学体系，宗旨和目的不相同。印度传统医学系统也被认为很发达。（传染病丙肝乙肝甲肝）研究领域大方向包括基础医学、临床医学、检验医学、预防医学、保健医学、康复医学等。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）基础医学包括：医学生物数学,医学生物化学,医学生物物理学,人体解剖学,医学细胞生物学,人体生理学,人体组织学,人体胚胎学,医学遗传学,人体免疫学,（肺血液血小板红血球白血球）医学寄生虫学,医学微生物学,医学病毒学,人体病理学,病理生理学,药理学,医学实验动物学,医学心理学,生物医学工程学,医学信息学,急救学,护病学,新中心法则。（肺炎青霉素肝炎）临床医学包括：临床诊断学实验诊断学.影像诊断学+放射诊断学+超声诊断学+核医诊断学*临床治疗学职能治疗学化学治疗学生物治疗学血液治疗学组织器官治疗学饮食治疗学（高血压心脏病糖尿病）物理治疗学语言治疗学心理治疗学内科学外科学泌尿科学妇产科学儿科学老年医学眼科学耳鼻喉科学口腔医学传染病学皮肤医学神经医学精神病学肿瘤医学急诊医学麻醉学护理学家庭医学性医学（传染病丙肝乙肝甲肝）临终关怀学康复医学保健医学听力学。（肺炎青霉素肝炎）编辑本段医学的起源

医学教材东、西方文化历史背景是中、西医学形成、发展的土壤。公元2世纪东、西方的两位医学巨匠张仲景和盖伦，传承了不同的学术思想，创建了迥异的医学范式，发展和完善了不同的理论体系，使中、西医学各自走向了（高血压心脏病糖尿病）两条完全不同的发展道路。在汉代医学家张仲景所著述的《伤寒杂病论》之前，就有《内经》、《难经》、《本草经》等古典医药典籍。张仲景总结了汉代以前的医学成就，继承了《内经》等基本理论和丰富的医药（传染病丙肝乙肝甲肝）知识，结合自己的临床实践，写成了《伤寒杂病论》。其贡献在于确立了中医学辨证论治的理论体系，为后世中医临床医学的发展，奠定了坚实的基础。（肺炎青霉素肝炎）在西方，盖伦的一生生活在罗马帝国时安东尼父子的执政期。彼时，罗马帝国的繁荣，为盖伦的医学成就、以及西方医学的昌盛，提供了可靠的政治、经济、科技和文化保证。盖伦继承希波克拉底的学术思想，（肺血液血小板红血球白血球）著述200余部著作，现存的83部著作中，内容涉及解剖、生理、病理、卫生、药物、《希波克拉底文集》研究、哲学、语言学、逻辑学、数学、历史、（传染病丙肝乙肝甲肝）法律等。倡导实证医学，他的科学（高血压心脏病糖尿病）方法论具有重视实验、疾病局部定位思想、重视形式逻辑、强调演绎法等特点，对后世西医学的发展影响深远。中、西医学在张仲景和盖伦完全相悖的医学范式引导下，开始步入了分道扬镳的历史进程。在中华文化强调“中和”的大背景下，学术界便有了“海纳百川”的宽松气氛。出现了学术流派精彩分呈，如瘟病的寒温之争，经方时方之别等。中医学按张仲景的思维范式，蓬蓬勃勃的发展起来了。（传染病丙肝乙肝甲肝）随着科学的进步和社会的发展特别是医疗实践的发展，最初的中医学理论已无法诠释新的科学事实，因此，医学理论必须不断创新，（高血压心脏病糖尿病）才能适应社会需要，这就促使中医学进入汉代以后，呈现出全面发展的阶段，这个阶段共包括四个时期：编辑本段魏晋隋唐时期（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）由于重视总结临床经验，并继承整理发挥《黄帝内经》、《伤寒杂病论》等经典医著的理论，出现了众多名医名著。如晋代王叔和的《脉经》和皇甫谧的《针灸甲乙经》、隋代巢元方的《诸病源候论》、唐代孙思邈的《千金要方》和《千金翼方》。（肺炎青霉素肝炎）编辑本段宋金元时期我国经济和科学技术日益发展，学术文化领域百家争鸣，特别是思想家的革新精神，为中医学理论的创新和突破性进展，提供了有利的文化背景。宋代陈无择著《三因极一病证方论》一书，提出三因学说；并产生了最具盛名四大学派，（肺血液血小板红血球白血球）刘完素倡导火热论；张从正力倡“攻邪论”；李杲提出“内伤脾胃，百病由生”的理论；朱震亨创造性（高血压心脏病糖尿病）地阐明了相火的演变规律。编辑本段明清时期是中医学理论综合汇编、深化发展，临床各科辨证体系丰富、提高阶段。如明代楼英的《医学纲目》和王肯堂的《证治准绳》，清代吴谦等编著的《医宗金鉴》和陈梦雷主编的（传染病丙肝乙肝甲肝）《古今图书集成·医部全录》等。王清任著《医林改错》，注重实证研究，纠正了古医籍中关于解剖知识的某些错误，肯定了“脑主思维”，（肺炎青霉素肝炎）发展了瘀血理论。温病学说的形成和发展，标志着中医理论的创新与突破，吴有性著《温疫论》，叶天士著（高血压心脏病糖尿病）《温热病篇》，吴鞠通著《温病条辨》等，在药物学研究方面，李时珍著的《本草纲目》，总结了16世纪以前我国药物学研究的成就。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）而西方医学随着西罗马帝国的灭亡，逐渐进入了中世纪的千年黑暗，科学变成了神学的奴婢，牧师取代医师。（传染病丙肝乙肝甲肝）从13世纪开始，始渐复明，直到15世纪，冲破封建宗教藩篱，才得以迅速发展。达·芬奇开创现代解剖学，维萨里创立解剖生理学；1731年意大利摩尔干尼创立了病理解剖学；1855年德国魏尔啸创建了细胞病理学；与此同时西方科学方法论对医学发展具有指导作用。以实验为主的实证方法(观察实验和比较分析)、及对医学研究中的“经院哲学”的彻底决裂、依靠各门自然科学所提供的技术手段和方法，（肺血液血小板红血球白血球）培养了医学家们的科学意识，赋予了医学的自然科学属性，使其摆脱了思辩推理的玄想而成就了生物医学模式（传染病丙肝乙肝甲肝）下的实验科学。（高血压心脏病糖尿病）至此中医学在实证医学领域已无法于西医同日而语。但中医学相对于西医学的优势是从宏观入手，注重整体，强调局部与局部、局部与整体之间的联系，重视辨证，主张“三因治宜”的个体化诊疗方略等。编辑本段东西方医学差异（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中、西医学运用不同的思维模式诊治疾病，其基本理论各成体系并有（传染病丙肝乙肝甲肝）根本差异。中西医学的差异不仅仅是有否实证的科学理念，最主要的是两种文化体系的差别。从理论上讲，中西医学是两种不可能统一的医学体系。“中体西用”曾成为中西医汇通派的指导思想，但由于两种医学的根基不同，硬在中医之体上套上西医之用，近一个世纪的事实证明，“汇通医学的体用判断脱离了中西医学的事实认识，以价值认识代替了事实认识，决定最终结果劳而无功”，因此，中、西医学应并存共荣而不必强求统一。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）尽管目前中、西医学还不可能融合成为一种统一的医学模式，但可以独立发展，并存共荣，整合互补。缘于现代信息论、系统论和控制论的影响，西医学的发展趋势若仅仅是单纯地重视分析而忽略了（传染病丙肝乙肝甲肝）整体结构和整体功能，无疑将渐行渐窄。而中医讲究“感悟”，未免夹带有很多主观因素，（肺血液血小板红血球白血球）难以客观地定量，定性。若中医的诊察疾病能参考现代医学的微观分析，将辨证与辨病相结合，实现宏观与微观的统一，使中医诊断客观化，即把分析与综合相结合的方法引入中医理、法、方（高血压心脏病糖尿病）、药的研究，使二者有机结合（肺炎青霉素肝炎），互相借鉴、补充，避免各自的片面性、局限性，这将有利于中西医学的优势互补，“和而不同”，多元发展。近年来，中医药在防治非典、禽流感和艾滋病方面发挥的独特作用也证实了二者的有机结合，具有肯定的临床疗效。编辑本段东西方医学交融（传染病丙肝乙肝甲肝）不管是中医学还是西医学，从二者现有的思维方式的发展趋势来看，均是走向现代系统论思维，中医药学理论与现代科学体系之间具有系统同型性，属于本质相同而描述表达方式不同的两种科学形式。可望在现代系统论思维上实现交融或统一，（高血压心脏病糖尿病）成为中西医在新的发展水平上实现交融或统一的支撑点，希冀籍此能给中医学以至生命科学带来良好的发展机遇，进而对医学理论带来新的革命。编辑本段现代中医史（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）上个世纪末,本世纪初，1996年,清华学界对中医气本质，经络实质，阴阳，五行，藏象，中医哲学观等都有了新的全面整体创造性的认识和解说。如，邓宇等发现的:气是流动着的‘信息－能量－物质’的混合统一体；（传染病丙肝乙肝甲肝）分形分维的经络解剖结构；数理阴阳；中医分形集：分形阴阳集－阴阳集的分形分维数，五行分形集－五行集的分维数；分形藏象五系统－暨心系统、肝系统、脾系统、肺系统、肾系统；中医三个哲学观－新提出的第三哲学观：相似观－分形论等。（肺血液血小板红血球白血球）还包括近代针灸经络的发展史,近代中医气的进展简史,中西医结合史,中医中药史等.古代(经典)中医史（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中国的中医学起源于三皇五帝时期，相传伏羲发明了（传染病丙肝乙肝甲肝）针灸并尝试草药。在公元前3000多年，中国的轩辕黄帝写下了人类第一部医学著作——《祝由科》，后世人在这部医药著作的基础上不断增补删改，逐渐形成了后来的《黄帝内经》和《黄帝外经》，并由祝由科里将纯粹的医药分离了出来，形成了后来的中医学。而其中的《黄帝内经》则在世界上（高血压心脏病糖尿病）第一个提出了“不治已病治未病”这一防病养生保健康的预防医学观点。（肺炎青霉素肝炎）轩辕黄帝早在周代(公元前1046年（肺血液血小板红血球白血球）－公元前771年)就建立了世界上第一个医院和医疗制度，周代的医疗机构设有医师、上士、下士、府（管药库）、史（管记录）、徒若干人。下面又分食医（管饮食卫库）、疾医（内科）、疡医（外科）、兽医四种，这是世界上最早的医学分科。医师总管医药行政，并在年终对医生进行考核；《周礼》记载“岁冬则稽其事，以制其食”，就是说，医生每年都要通过年终考核增减俸禄。（传染病丙肝乙肝甲肝）当时的患者已经分科治疗，而且建立病历。（高血压心脏病糖尿病）“死终则各书其所以，而入于医师”，（肺血液血小板红血球白血球）规定在死者病历上要写明死因，然后送交医师存档，以便总结医疗经验，提高医疗技术。这也是世界上最早的病历制度。在春秋战国（公元前770年－前221年）时期名医辈出，（肺血液血小板红血球白血球）秦国有名医医缓，齐国有长桑和他的徒弟扁鹊。扁鹊发明了中医独特的辨证论治，并总结为“四诊”方法，即“望、闻、问、切”。扁鹊看病行医有“六不治”原则：一是依仗权势，骄横跋扈的人不治；（肺血液血小板红血球白血球）二是贪图钱财，不顾性命者不治；三是暴饮暴食，饮食无常者不治；四是病深不早求医者不治；五是身体虚弱不能服药者不治；六是相信巫术不相信医道者不治。后世则尊称他为神医扁鹊。春秋战国时流行的主要医学著作有《黄帝内经》、（高血压心脏病糖尿病）《黄帝外经》、《扁鹊内经》、《扁鹊外经》、《白氏内经》、《白氏外经》和《旁篇》这七本，（传染病丙肝乙肝甲肝）合成“七经”。（肺炎青霉素肝炎）在秦朝（公元前221年—公元前207年）出现了世界上最早的专门法医——"令史"。秦律规定，死因不明的案件原则上都要进行尸体检验，司法官如果违法不进行检验，将受到处罚。秦代的《封诊式》对法医鉴定的方法、程序等有较为详细的记载。在人命案件中，鉴定检验的主要内容有尸体的位置、创伤的部位、数量、方向以及大小等。（肺血液血小板红血球白血球）令史检验完成之后，必须提交书面报告，称为“爰书”，是世界上最早的法医鉴定和现场勘察报告。秦代还在世界上第一个建立传染病医院——“疠迁所”，（高血压心脏病糖尿病）并制定了最早的治疗传染病的隔离制度。据1975年湖北省云梦睡虎地出土秦简中记载：当时规定，凡经医生在给病人检查后发现有鼻梁塌陷、手上无汗毛、声音沙哑、刺激鼻腔不打喷嚏等症状者，一律送至疠迁所隔离治疗。（传染病丙肝乙肝甲肝）这说明中国古代对传染性疾病的治疗措施，很早就已经是得力有效的。到了西汉时期(公元前202年－公元8年)，中医的阴阳五行理论已经非常完备，名医则有太仓公淳于意和公乘阳庆。东汉出现了著名医学家张仲景和华佗。张仲景完善了中医的辨证理论，他还是世界上第一个临床医学大师，被尊称为医圣。他著有（高血压心脏病糖尿病）《伤寒论》《疗妇人方》、《黄素方》、《口齿论》、《平病方》等等医书，最终流传下来的医书被并被后人编纂为《伤寒杂病论》和《金匮要略》。张仲景采用辨证论治的基本原则，在《伤寒论》中归结为“八纲辨证”和“六经论治”，经由这两种方法辨证论治后，再采用“八法”（汗、吐、下、（传染病丙肝乙肝甲肝）和、温、清、补、消）治疗疾病。“八纲辨证”是书中贯彻辨证论治的具体原则，所谓“八纲”（阴、阳、表、里、寒、热、虚、实）是运用“四诊”（望、闻、问、切）分析和检查疾病的部位、性质而归纳出来，“六经论治”是整个脏腑经络学说在临床医学上的具体运用。东汉末年，华佗则以精通外科手术和麻醉名闻天下，华佗是世界上（高血压心脏病糖尿病）第一个使用麻醉术进行手术的人，他发明的麻沸散是世界上最早的麻醉药物，还创立了世界上最早的健身体操“五禽戏”。可惜华佗所著医书的（肺血液血小板红血球白血球）《青囊书》最后被付之一炬。在汉代，大量的医药和历算等书籍传入西藏（《西藏王统记》记载）。在汉代还出现了专门性的妇科医院，西汉时的“乳舍”，是世界上最早的妇产医院。（肺炎青霉素肝炎）南北朝时期(420年－589年)问世了世界上最早的两本儿科专著，即王末钞的《小儿用药本草》和徐叔响的《疗少小百病杂方》。南朝宋元嘉二十年(公元443年)，（传染病丙肝乙肝甲肝）太医令秦承祖创建了世界上第一个医学院。到了公元6世纪，隋朝完善了这一医学教育机构，并命名为“太医署”，署内分医、药两部，太医令是最高官职，丞为之助理，下有主药、医师、药园师、医博士、助教、按摩博士、祝禁博士，（高血压心脏病糖尿病）在校师生最多时达580人之多。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）在唐朝（公元618年－907年），孙思邈总结前人的理论并总结经验，收集药方多达5000多个，出版了《大医精诚》、（肺血液血小板红血球白血球）《千金要方》和《千金翼方》三本医学著作，后世尊称他为药王。唐朝以后，中国医学理论和著作大量外传到突厥、高句丽、日本、中亚、西亚等地。（传染病丙肝乙肝甲肝）到了在唐末宋初，儿科专著《颅囟经》问世流行，而世界医学史上第一个著名儿科专家钱乙（公元1032－1113年）则受此书启发，撰写了著名的儿科巨著《小儿药证直诀》，后人把钱乙尊称为“儿科之圣”，“幼科之鼻祖”。北宋时期（960年－1127年），宋政府设立翰林医学院即太医局，医学分科已经非常完备，并且统一了中国针灸穴位，出版《图经》。北宋的宋慈出版了世界上最早的法医学著作（高血压心脏病糖尿病）《洗冤集录》。（肺炎青霉素肝炎）在明朝（1368年－1644），著名医学家李时珍的医学巨著《本草纲目》成书，这本书不仅是药物学专着，还包括植物学、动物学、（传染病丙肝乙肝甲肝）矿物学、化学等方面的知识。《本草纲目》刊行后很快传入日本、朝鲜及越南等亚洲地区，（肺血液血小板红血球白血球）在公元17、18世纪先后被翻译成多种欧洲语言。另一方面，李时珍是世界上第一个提出大脑负责精神感觉、又发现胆结石病、利用冰敷替高热病人降温以及发明消毒技术的医学家。此外还有王叔和的《脉经》、皇甫谧的《针灸甲乙经》、陶弘景的《本草经集注》、葛洪的《肘后备急方》、巢元方的《诸病源候论》、苏敬的《新修本草》（肺血液血小板红血球白血球）、王焘的《外台秘要》、元丹贡布的《四部医典》、《太平圣惠方》、王惟一的《铜人腧穴针灸图经》等大量医学典籍问世。自明朝中医发展已经达到了顶峰，（传染病丙肝乙肝甲肝）出现了诸多的医学流派。同时在朝鲜研究中医的（高血压心脏病糖尿病）所谓东医学也得到了很大的发展，例如许浚撰写了《东医宝鉴》。（肺炎青霉素肝炎）自清朝末年，中国受西方列强侵略，国运衰弱。同时现代医学（西医）大量涌入，严重冲击了中医发展。中国出现许多人士主张医学现代化，中医学受到巨大的挑战。人们开始使用西方医学体系的思维模式加以检视，中医学陷入存与废的争论之中。同属中国医学体系的日本汉方医学、韩国的韩医学亦是如此。2003年“非典”（肺血液血小板红血球白血球）以来，经方中医开始有复苏迹象。（高血压心脏病糖尿病）在文化大革命期间，中医作为“古为今用”的医学实例得到中国共产党政策上的支持而得以发展。现代，中医在中国仍然是治疗疾病的常用手段之一。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）近代、现代医学史近代的医学（传染病丙肝乙肝甲肝）西方近代医学是指文艺复兴以后逐渐兴起的医学，一般包括16世纪、17世纪、18世纪和19世纪的欧洲医学。16世纪封建社会后期，手工业和商业发展，手工工厂出现，生产力的增长也促进对新市场的寻找。1492年哥伦布发现新大陆,1497年达·伽马发现好望角,1519～1522年麦哲伦环绕世界一周。（高血压心脏病糖尿病）许多药物（如鸦片、樟脑、松香），由东方传入欧洲，美洲发现后，欧洲也有了金鸡纳、愈创木、可可果。（肺炎青霉素肝炎）由于资本主义的兴起，首先在意大利形成了资产阶级的知识分子。他们的特点是敢于向教会思想挑战，反对宗教迷信的束缚。他们的口号是：（肺血液血小板红血球白血球）“我是人，人的一切我应该了解”，以此来反对神学的统治。他们一方面传播新文化,一方面竭力钻研和模仿古代希腊的文化,因此此时期称为“文艺复兴”。1543年哥白尼出版《天体运行论》，是科学史上文艺复兴的开始。（传染病丙肝乙肝甲肝）①医学革命。文艺复兴运动中，怀疑教条、反对权威之风兴起。于是，医界也产生了一场以帕拉切尔苏斯(1493～1541)（高血压心脏病糖尿病）为代表的医学革命。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）中世纪的医学校中,主要讲阿维森纳的《医典》,以及加伦和希波克拉底的著作。教师照本宣科，一切墨守成规，毫无生气。文艺复兴的狂潮，很快就波及医学领域。帕拉切尔苏斯指出人体的生命过程是化学过程。他在巴塞尔大学任教时主张用流行的德语写书和讲演，使医学易为大众所接受，这是一件伟大的改革。他重视实践，反对烦琐的经院哲学，反对中世纪顽固的传统和权威观念，他说：“没有科学和经验，谁也不能成为医生。（肺血液血小板红血球白血球）我的著作不是引证古代权威的著作，而是靠最大的教师──经验写成的”。他勇敢地向墨守成规和盲目崇拜进行斗争，公开焚毁了加伦和阿维森纳的著作。②人体解剖学的建立。古代的人认为身体是灵魂寄居之处,在封建社会,各民族无例外地禁止解剖尸体。（高血压心脏病糖尿病）因此,人体解剖学得不到发展,这个时代的医书如加伦所著的解剖学中，解剖图几乎全是根据动物内脏绘成的。反之，文艺复兴时代的文化，把人作为注意的中心，在医学领域内人们首先重视的就是研究人体的构造。（传染病丙肝乙肝甲肝）首先革新解剖学的是意大利的达·芬奇，他认为作为现实主义的画家，（肺血液血小板红血球白血球）有明了解剖的必要，尤其需要了解骨骼与肌肉，于是从事人体解剖。不过,他所绘制的700多幅解剖图,传至今日还有150余幅。画得大都准确、优美。他首先对加伦的解剖学发生疑问。他曾往气管吹入空气，但无论如何用力，也不见心脏膨胀起来，于是得出结论：加伦所谓肺与心相通的学说是错误的。他还检查过心脏的构造与形态，他所画的心脏图较以往有关图画正确得多。此外，他还发现了主动脉根部瓣膜的活动及其性质，证明瓣膜的作用在于阻止血液回流。他所提到的心血管方面的问题，不久就引起了医学家们的注意。（肺炎青霉素肝炎）根据直接的观察来写作人体解剖学教科书这一工作由A.维萨里完成。维萨里先肄业于卢万大学，后转入巴黎大学。（高血压心脏病糖尿病）当时，这两所大学讲解剖时，仍是教授高坐椅上讲课,助手和匠人在台下操作,而且一年内（肺血液血小板红血球白血球）最多只允许进行3或4次解剖。维萨里不满足这种状况，曾夜间到野外去盗窃尸体来进行解剖。当时意大利的帕多瓦大学有欧洲最好的解剖教室。于是他到那里任教。1543年，他将工作中积累起来的材料整理成书，公开发表。这本书就是《人体构造论》。此书指出加伦的错误达200多处，如5叶肝、两块下颌骨等。并指出加伦解剖学的依据是动物如猴等。维萨里虽然也受到当时保守派的指责，但他的学生们发展了解剖学。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）总之，16世纪欧洲医学摆脱了古代权威的束缚，开始独立发展，（传染病丙肝乙肝甲肝）其主要成就是人体解剖学的建立。这既表明一门古老的学科在新的水平上复活，又标志着医学新征途的开始。17世纪16世纪，尼德兰发生革命，产生了独立的资产阶级国家荷兰；17世纪，英国推翻了专制王权，建立资产阶级的议会制度。新兴资产阶级为了发展工商业支持科学技术，提倡宽容，这些都有进步作用。哲学上培根提出经验主义（肺血液血小板红血球白血球），提倡观察实验，主张一切知识来自经验，并提倡归纳法；（高血压心脏病糖尿病）他的名言“知识就是力量”激励了后人的探索热情。笛卡尔是唯理论的代表，他重视人的思维能力，同时，又把机械论观点运用于对生理问题的研究，对后世的生命科学影响很大。这时期还出现了一些科学社团，它促进了交流，推动了科学进步。在17世纪，英国科学处于领先地位。（肺炎青霉素肝炎）生理学的进步。17世纪，量度观念已很普及。最先在医界使用量度手段的是圣托里奥(1561～1636)。他制作了体温计和脉搏计。还制造了一个像小屋似的大秤（高血压心脏病糖尿病），可在其中生活、睡眠、运动、进食；在排泄前后，他都秤量自己的体重，如此不厌其烦地进行了30余年。他发现体重在不排泄时也在减轻，认为其原因是“不易觉察的出汗”。这可以说是最早的新陈代谢研究。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）（传染病丙肝乙肝甲肝）实验、量度的应用，使生命科学开始步入科学轨道。其标志是血液循环的发现。W.S.哈维(1578～1657)也毕业于帕多瓦大学，在他以前，帕多瓦大学的解剖学家们曾相继发现并解释了心脏血循的环节。1553年，西班牙学者M.塞尔维特（1511～1553）确认血液自右心室流入左心室，不是经过中隔上的孔，而是经过肺脏作“漫长而奇妙的迂回”。（肺血液血小板红血球白血球）哈维最先在科学研究中，应用活体解剖的实验方法，直接观察动物机体的活动。同时，他还精密地算出自左心室流入总动脉，和自右心室流入肺动脉的血量。他分析认为血液绝不可能来自饮食，也不可能留在身体组织内，他断定自左心室喷入动脉的血，必然是自静脉（高血压心脏病糖尿病）回归右心室的血。这样就发现了血液循环。哈维于1628年发表了著作《心脏运动论》。显微镜的应用。随着实验的兴起，出现了许多科学仪器，显微镜就是17世纪初出现的。显微镜把人们带到一个新的认识水平。在这以后，科学家利用显微镜取得了一系列重要发现。（肺血液血小板红血球白血球）临床医学和T.西德纳姆(1624～1689)。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）内科学直到17世纪一直没有什么进展。医术与中世纪相仿，四体液论依然是疾病理论的基础。由于当时医生多研究解部学和生理学，似乎忘记了医生的责任，所以17世纪的临床医学家T.西德纳姆指出：（传染病丙肝乙肝甲肝）“与医生最有直接关系（高血压心脏病糖尿病）的既非解剖学之实习，也非生理学之实验。乃是被疾病所苦之患者。故医生的任务首先要正确探明痛苦之本质，也就是应多观察同样病患者的情况，然后再研究解剖、生理等知识，以导出疾病之解释和疗法”。同时，他非常拥护希波克拉底关于“自然治愈力”的思想。这（肺血液血小板红血球白血球）既说明了当时临床学还很落后，也表明他对人体抗病能力的重视。（肺炎青霉素肝炎）18世纪在18世纪欧洲各国已进入了资本主义确立时期。18世纪，美国独立，法国发生革命，资产阶级在西欧多数国家取得政权，并且向外扩张势力，发展世界贸易。在商品需要的刺激下，首先在英国的棉纺织业发生了技术大革新，织布机和纺织机都发明了，1784年J.瓦特制成改良蒸汽机，它不但应用于纺织工业，也应用于各种工矿业。用机器生产代替手工生产，这便是所谓产业革命。手工工人变成机器工人，工业无产阶级首先在英国形成。同时资本主义生产力也就大为发展。（肺炎青霉素肝炎）①病理解剖学的建立。到18世纪，医学家已经解剖了无数尸体，对人体的正常构造已有了清晰的认识，在这基础上，他们就有可能认识到若干异常的构造。意大利病理解剖学家G.B.莫尔加尼(1682～1771)于1761年发表《论疾病的位置和原因》（肺血液血小板红血球白血球）一书，描述了疾病影响下器官的变化，并且据此对疾病原因作了科学的推测。他把疾病看作是局部损伤，而且认为每一种疾病都有它在某个器官内的相应病变部位。（高血压心脏病糖尿病）在他以后医师才开始用“病灶”解释症状。这种思想对以后的整个医学领域影响甚大。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）②叩诊的发明。18世纪后半期，奥地利医生J.L.奥恩布鲁格(1722～1809)发明了叩诊。他的父亲是酒店老板，常用手指敲击大酒桶根据声音猜测桶里的酒量。后来，奥恩布鲁格把这个方法用在人的胸腔，以寻找“病灶”。经过大量经验观察，包括尸体解剖追踪，他创立应用至今的叩诊法。但叩诊法的推广应用，还是19世纪的事。（肺炎青霉素肝炎）③临床教学的开始。在17世纪以前，欧洲并无有组织的临床教育，学生到医校学习（肺血液血小板红血球白血球），只要读书，经过考试及格（传染病丙肝乙肝甲肝）就可领到毕业证书。17世纪中叶荷兰的莱顿大学开始实行临床教学并取消宗教派别的限制，吸收了不少外国学生。到18世纪，临床医学教学兴盛起来，莱顿大学在医院中设立了教学病床，H.布尔哈维(1668～1738)成了当时（高血压心脏病糖尿病）世界有名的临床医学家。布尔哈维充分利用病床教学，他在进行病理解剖之前，尽量给学生提供临床的症候以及这些与病理变化关系的资料，这是以后临床病理讨论会(C.P.C.)的先驱。（肿瘤癌症胃癌肠癌肺癌）④预防医学的成就。E.詹纳(1749～1823)发明牛痘接种法，这是18世纪预防医学的一件大事。16世纪，中国（肺血液血小板红血球白血球）已用人痘接种来预防天花。18世纪初，这种方法经土耳其传到英国，詹纳在实践中发现牛痘接种比人痘接种更安全。他的这个改进增加了接种的安全性，为人类最终消灭天花作出贡献。18世纪末，工业革命兴起。农民大量涌入城市。资本家只管赚钱，不关心工人生活。工人住在肮脏、潮湿的贫民窟，劳累一天而不得温饱，因而疾病很多。这类问题引起了一些人的注意，加上启蒙运动中传播