脂代谢检验级课件

脂代谢紊乱检验第十章异常？正常？血脂机体脂类代谢动脉粥样硬化冠心病急性事件血脂：是血浆中脂类的总称第一节概述甘油三酯(TG)

游离胆固醇(FC)胆固醇酯（CE)总胆固醇(TC)磷脂(PL)

游离脂肪酸(FFA)血脂(血浆脂类)

血浆脂蛋白〔Lp〕：血脂+载脂蛋白脂蛋白结构示意图载脂蛋白载脂蛋白载脂蛋白磷脂游离胆固醇非极性脂内核胆固醇酯甘油三酯此种结构形式可使脂蛋白颗粒稳定、均匀地分散于血浆。并可与酶及细胞外表的受体接触，在脂蛋白代谢中起关键作用。离心法电泳法血浆脂蛋白的分类1、超速离心法乳糜微粒〔CM〕极低密度脂蛋白〔VLDL〕中间密度脂蛋白〔IDL〕低密度脂蛋白〔LDL〕高密度脂蛋白〔HDL〕脂蛋白〔a〕〔Lp(a)〕依据血浆脂蛋白分子中蛋白质外表电荷多少的不同而别离。通常可分成：

2、电泳分别相当于CM、LDL、VLDL、HDL，IDL也有β移动度，在IDL异常时可显现宽β带。CM、β-LP、pre-β-LP、α-LP四条区带人血浆脂蛋白主要特征

CMVLDLIDLLDLHDLLp(a)电泳位置原点前

-和前之间

-

-前

-主要脂质外源性TG内源性TG内源性TG、CECEPLCE、PL主要载脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ(a)，B100合成部位小肠粘膜细胞肝细胞血浆血浆肝、肠、血浆肝细胞功能转运外源性TG转运内源性TG转运内源性TG、CE转运内源性CE逆向转运CELp(a)的核心局部由TG、PL、chol、CE等脂质和ApoB100组成，结构类似LDL。且含有特异性抗原成分——Apo(a)。Lp(a)中1分子ApoB通过二硫键与1分子Apo(a)共价结合。Apo(a)与PLG〔纤溶酶原〕具有高度同源性。肝脏是Apo(a)合成的主要场所。Lp(a)是动脉粥样硬化的独立危险因素，且与血栓形成密切相关。脂蛋白(a)[Lp(a)]10载脂蛋白定义：脂蛋白的蛋白局部称为载脂蛋白(Apo)。种类：按1972年Alaupovic建议的命名方法，用英文字母顺序编码，分为ApoA、B、C、D、E、F、G、H、J等。由于氨基酸组成的差异，每一型又可分假设干亚型。ApoAApoBApoCApoE分类载体、运输联系、配体激活功能合成部位肝小肠受体LDL受体残粒受体清道夫受体CMVLDLIDLLDLHDLLp(a)电泳位置原点前

-和前之间

-

-前

-主要脂质外源性TG内源性TG内源性TG、CECEPLCE、PL主要载脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ(a)，B100合成部位小肠粘膜细胞肝细胞血浆血浆肝、肠、血浆肝细胞功能转运外源性TG转运内源性TG转运内源性TG、CE转运内源性CE逆向转运CE载脂蛋白分子量合成场所脂蛋白中分布染色体定位生理功能ApoAI28KD肝脏、小肠HDL、CM1LCAT激活剂，识别HDL受体ApoAⅡ17KD肝脏、小肠HDL、CM1LCAT抑制；参可脂质转运ApoAIV26KD肝脏、小肠HDL、CM11参与胆固醇逆向转运；辅助激活LPLApoB100550KD肝脏VLDL、IDL、LDL2参与VLDL合成与分解；识别LDL受体ApoB48275KD小肠CM2参与CM合成与分解；输运外源性TGApoCI7KD肝脏CM、VLDL、HDL19激活LCAT及LPLApoCⅡ9KD肝脏CM、VLDL、HDL19激活LPLApoCⅢ9KD肝脏CM、VLDL、HDL11抑制与肝细胞受体结合ApoD33KD肝脏HDL3参与胆固醇逆向转运ApoE34KD肝脏CM、VLDL、IDL、HDL19识别LDL受体及肝ApoE受体

Apo(a)280-800KD肝脏LDL、HDL6抑制纤溶酶原活性脂蛋白受体糖蛋白调节细胞外脂蛋白的水平LDL受体残粒受体清道夫受体运送及去除LDL受体：识别ApoB100〔ApoE〕对维持细胞和全身胆固醇平衡起重要作用识别ApoE，去除血液循环中CM残粒和β-VLDL残粒巨噬细胞外表,介导修饰LDL从血液循环中去除胆固醇酯转运蛋白〔CETP〕磷脂转运蛋白〔PTP〕微粒体甘油三酯转运蛋白〔MTP〕脂质转运蛋白------LTP血浆脂蛋白代谢

脂蛋白代谢以肝脏为中心

HDL代谢：胆固醇逆转运(RCT)

VLDL-IDL-LDL代谢：由肝合成VLDL,再转变为IDL和LDL,并被肝或其它器官代谢的过程CM代谢：饮食摄入的Ch和TG在小肠中合成CM及其代谢过程LP代谢外源性代谢内源性代谢血浆脂蛋白代谢总图CMVLDLIDLLDLHDL电泳位置原点前

-和前之间

-

-主要脂质外源性TG内源性TG内源性TG、CECEPL主要载脂蛋白B48B100/CⅡ/EB100/EB100AI/AⅡ合成部位小肠粘膜细胞肝细胞血浆血浆肝、肠、血浆功能转运外源性TG转运内源性TG转运内源性TG、CE转运内源性CE逆向转运CELp(a)是一类独立的由肝脏合成的脂蛋白高脂血症:TC或/和TG

高脂蛋白血症:CM、VLDL、LDL、HDL

血浆脂蛋白代谢紊乱脂质异常血症高脂血症的分类临床表型是否继发其他基因分型法Fredrickson血清(血浆)外观：在4℃冰箱放置16-24h

后的血清外观

(2)血脂浓度：血清TG、TC含量

(3)各种血浆脂蛋白升高程度依据表型血浆4℃过夜外观TCTGCMVLDLLDL备注Ⅰ奶油上层,下层清↑→↑↑↑↑↑↑↓→易发胰腺炎Ⅱa透明↑↑→→→↑↑易发冠心病Ⅱb透明↑↑↑↑→↑↑易发冠心病Ⅲ奶油上层,下层混浊↑↑↑↑↑↑↓易发冠心病Ⅳ混浊↑→↑↑→↑↑→易发冠心病Ⅴ奶油上层,下层混浊↑↑↑↑↑↑↓→易发胰腺炎1967年Fredrickson等首先提出高脂蛋白血症的分类法〔5型〕。1970年WHO进行局部修改，将其中Ⅱ型分为Ⅱa和Ⅱb两型。Ⅰ型高脂蛋白血症Ⅱa型高脂蛋白血症Ⅱb型高脂蛋白血症Ⅲ型高脂蛋白血症Ⅳ型高脂蛋白血症Ⅴ型高脂蛋白血症①4℃静置过夜，外表奶油状，下层澄清②血清TG↑↑，血清TC正常或轻度↑③血清脂蛋白电泳，CM↑↑Ⅰ型高脂蛋白血症家族性高乳糜微粒血症脂蛋白酶缺乏症生化特征基因突变LPLCMⅡa高脂蛋白血症高β-脂蛋白血症高胆固醇血症生化特征①4℃冷置试验血浆外观澄清②血清TC↑↑尤其LDL↑↑TG正常③血清脂蛋白电泳β-LP↑↑LDLR缺乏或异常此型临床常见Ⅱb型高脂蛋白血症生化特征①4℃冷置试验血清外观澄清或微混②血清TC↑，TG↑VLDL和LDL均↑

③血清脂蛋白电泳β-LP↑，preβ-LP↑

多基因突变LPLLCAT此型临床很常见Ⅲ型高脂蛋白血症宽β-脂蛋白血症①4℃冷置试验，血清外观混浊可见一模糊奶油样薄膜。②血清TC，TG。③血清脂蛋白电泳，β-LP↑，preβ-LP↑融合形成宽β区带。生化特征ApoE异常VLDL转化和去除缺陷Ⅳ型高脂蛋白血症①4℃冷置试验，血清外观可以是澄清也可呈混浊。②血清TG↑↑

，TC正常或稍↑，VLDL↑

③血清脂蛋白电泳，preβ-LP↑

内源性高三脂酰甘油血症生化特征临床表现，多见于中青年，较常见Ⅴ型高脂蛋白血症混合性高三酰甘油血症①4℃冷置试验，血清上层为奶油状，下层混浊。②血浆中TG，TC↑，VLDL。③血清脂蛋白电泳，CM，preβ-LP↑。内源性和外源性TG去除功能缺陷生化特征动脉粥样硬化(AS)是指动脉内膜因脂质、血液成分的沉积、平滑肌细胞及胶原纤维增生，并伴有不同程度坏死及钙化等一类慢性进行性的病理改变。最终导致血管壁呈增厚、狭窄，使某些脏器(尤其是心、脑)供血缺乏而损伤，甚至危及生命。高血压年龄冠心病家族史血脂紊乱吸烟糖尿病不可改变的可改变的NCEP

Circulation1994;89:1329–1445.EurHeartJ1994;15:1300–1331.WoodDetal.

EurHeartJ1998;19:1434–1503.冠心病冠心病的主要危险因素AS主要的危险因素①高脂血症〔高脂蛋白血症〕②高血压③吸烟④性别⑤遗传因素⑥内分泌因素高胆固醇血症引起动脉粥样硬化的脂蛋白CM颗粒大，一般不致AS,但易诱发胰腺炎LDL相对较小,是首要的致AS性脂蛋白VLDL升高已被确认为CHD的危险因子。IDL具有致AS作用LP〔a)As的独立危险因子。动脉粥样硬化HDL降低第二节血脂、脂蛋白及载脂蛋白测定常规测定工程：TC、TG、HDL-C、LDL-C

分析前的准备：受试者的准备标本采集合格的试剂校准物的选用检测方法选择是否空腹采血体位血液浓缩抗凝剂标本处理存储条件生物学波动总胆固醇〔totalcholesterol，TC〕甘油三酯〔triglyceride，TG〕高密度脂蛋白-胆固醇〔highdenselipoproteincholesterol，HDL-C〕低密度脂蛋白-胆固醇〔lowdenselipoproteincholesterol，LDL-C〕载脂蛋白AⅠ〔apolipoproteinAⅠ，ApoAⅠ〕载脂蛋白B〔apolipoproteinB，ApoB〕Apo〔a〕临床血脂分析工程TC升高：Ⅱb型、Ⅲ型空腹血清清澈（TG正常）（TG升高）测定TCTC正常:血脂正常TC升高：Ⅱa混浊上层有“奶油”层（CM升高）下层清澈：Ⅰ型下层混浊：Ⅴ型均匀混浊（VLDL升高）TC正常：Ⅳ型测定TC4℃过夜（VLDL↑）（VLDL正常）一、血清〔浆〕静置试验二、血清〔浆〕总胆固醇测定★COD-PAP法CHECODPOD胆固醇酯+H2O胆固醇＋游离脂肪酸胆固醇＋O2△4-胆甾烯酮＋H2O22H2O2＋4-AAP＋酚醌亚胺〔红色化合物〕＋4H2O方法学评价简便,快速,无腐蚀性,高，好，宽CE水解不全，CHE活性受影响，易受干扰常规方法三、血清〔浆〕三酰甘油测定检测方法同位素稀释-质谱法化学法★酶法〔GPO-PAP〕＊磷酸甘油氧化酶法乳酸脱氢酶法甘油氧化酶法化学法1.抽提2.皂化3.氧化4.显色变色酸显色法乙酰丙酮显色法1、磷酸甘油氧化酶法GPO-PAPLPL三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O磷酸二羟丙酮+2H2O2H2O2＋4-AAP＋4-氯酚苯醌亚胺＋2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPO甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2

磷酸二羟丙酮+H2O2H2O2＋氧受体氧化的受体（不显色）＋2H2OGKPODGPO第一步反响第二步反响本法酶试剂比较稳定，灵敏度高，线性范围较宽两步法为中华医学会检验分会推荐方法三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADP3-磷酸甘油＋O2+2H2O磷酸二羟丙酮+2H2O2H2O2＋4-AAP＋4-氯酚苯醌亚胺＋2H2O+HCLGK,Mg2+PODGPOLPL2．乳酸脱氢酶法【原理】LPL三酰甘油+H2O甘油＋3-脂肪酸甘油＋ATP

3-磷酸甘油＋ADPADP＋磷酸烯醇式丙酮酸

丙酮酸+ATP丙酮酸+NADHNAD+＋乳酸GK,Mg2+LDH丙酮酸激酶3．甘油氧化酶法第一步：FG+O2甘油醛+H2O2H2O2+EMAE无色物质消除游离甘油的影响，3-5min后进行第二步反响：TG+3H2O甘油+3RCOOH甘油+O2甘油醛+H2O2H2O2+4-AAP+EMAE有色物质EMAE作用与酚相似，是复原剂，但灵敏度比酚高。甘油氧化酶PODPODLPL甘油氧化酶血清甘油三酯一般随年龄增加而升高，体重超过标准者往往偏高。适宜范围：≤1.70mmol/L(150mg/dl)，升高：＞1.70mmol/L(150mg/dl)。升高：〔1〕原发性高TG血症，包括家族性高TG血症与家族性高脂〔蛋白〕血症等。〔2〕继发性高TG见于糖尿病糖原贮积症、甲状腺功能减退、肾病综合征、妊娠、口服避孕药等降低:甲亢、肾上腺皮质功能减退和肝功能严重损伤。【参考区间】【临床意义】四、血清〔浆〕脂蛋白测定高密度脂蛋白胆固醇测定参考方法:超速离心别离HDL，然后用化学法〔ALKB法〕或酶法测定其胆固醇含量，此法需特殊设备，而且不易常握。沉淀剂：肝素-锰、硫酸葡聚糖-镁、聚乙二醇、磷钨酸-镁常规方法:HDL直接测定法抗体包裹法、酶修饰法、选择性抑制法HDL-C适宜范围：≥1.04mmol/L(40mg/dl),＜0.91mmol/L(35mg/dl)为减低。流行病学与临床研究证明，HDL-C与冠心病发病呈负相关，HDL-C低于0.9mmol/L是冠心病危险因素。HDL-C大于1.55mmol/L被认为是冠心病的“负〞危险因素。HDL-C下降还多见于脑血管病、糖尿病、肝炎、肝硬化病人。高TG血症往往伴以低HDL-C，肥胖者的HDL-C也多偏低。吸烟可使HDL-C下降，适量饮酒、长期体力劳动和运动会使HDL-C升高。【参考值】【临床意义】低密度脂蛋白测定

1．Friedewald公式法LDL-C＝TC－HDL-C－TG/2.2〔以mmol/L为单位时〕〔血清中存在CM、TG>4.56时不适用〕2．聚乙烯硫酸盐沉淀法本法并非对LDL-C作直接测定，而是用聚乙烯硫酸〔PVS〕选择性沉淀血清中LDL，再以血清TC减去上清液〔含HDL与VLDL〕胆固醇即得LDL-C值。3．直接测定法:目前各类方法测定的LDL-C值都包括IDL和LP(a)的chol在内≤3.12mmol/L,升高：≥3.64mmol/L【参考值】【临床意义】LDL-C增高是动脉粥样硬化发生开展的主要脂类危险因素。由于TC水平同时也受HDL-C水平的影响，所以最好以LDL-C代替TC作为冠心病危险因素指标。脂蛋白(α)测定Lp(α)测定有两类方法一