临床科研设计报告基因检测

双荧光素酶报告基因实验pAP1-TA-Luc(碧云天公司-D2109)pP53-TA-Luc(碧云天公司-D2223)pARE-Luc(碧云天公司-D2112)pGRE-Luc(碧云天公司-D2152)ISRE-Luc(碧云天公司-D2152)-----STAT1/2pSIE-Luc(秦樾实验室)------------STAT3pNF-kB-Luc（上海健康所）pTNFα-promoter(500)-Luc（自己实验室构建）ERE-LucpSTAT4-Luc(吉满公司GM-021081)pSTAT5-Luc(吉满公司GM-021054)pSTAT6-Luc(吉满公司GM-021084)pSRE-Luc(吉满公司GM-021086)IRF1-Luc(吉满公司GM-021019)HIF-1-Luc(吉满公司GM-021020)pARE-Luc(吉满公司GM-021048)pE2F-Luc(吉满公司GM-021046)pAP1-TA-luc质粒的主要信息如下：

Basepairs

5653

AP1responseelement

26-67

MinimalTApromoter(pTA)

90-112

luc2reportergene

154-1806

SV40latepoly(A)signal

1841-2062

SV40earlyenhancer/promoter

2110-2528

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2553-3347

Syntheticpoly(A)signal

3372-3420

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3487-3506

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3744

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4535-5395

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5500-5653

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5602-5621pAP1-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个AP1结合位点，可以高灵敏度地检测AP1的激活水平。AP-1(activatingprotein-1)是一类核转录因子参与转化、分化、凋亡等多种生物学功能。AP-1报告基因主要应用于细胞中MAPK/JNK信号通路、药物研究、基因过表达和RNAi的表型分析等。pAP1-TA-Luc(碧云天公司-D2109)pP53-TA-Luc(碧云天公司-D2223)pp53-TA-luc质粒的主要信息如下：

Basepairs

5659

p53responseelement

20-73

MinimalTApromoter(pTA)

96-118

luc2reportergene

160-1812

SV40latepoly(A)signal

1847-2068

SV40earlyenhancer/promoter

2116-2534

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2559-3353

Syntheticpoly(A)signal

3378-3426

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3493-3512

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3750

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4541-5401

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5506-5659

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5608-5627pp53-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个p53结合位点，可以高灵敏度地检测p53的激活水平。p53是一个重要的抗癌基因使癌细胞自杀，防止癌变；还具有帮助细胞基因修复缺陷的功能。

p53报告基因主要应用于细胞中p53/DNADamage信号通路、p53为靶点的新型抗肿瘤化合物的筛选以及基因过表达和RNAi的表型分析等。

检测基于顺式作用元件antioxidant

response

element(ARE，抗氧化响应元件)的转录活性水平的报告基因质粒。pARE-luc是以碧云天的pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了2个ARE结合位点，可以高灵敏度地检测顺式作用元件ARE的激活水平，可以用于检测细胞的抗氧化水平或氧化应激状态。

pARE-luc质粒的主要信息如下：

Basepairs

5622

AREresponseelement(ARERE)

32-77

luc2reportergene

123-1775

SV40latepoly(A)signal

1810-2031

SV40earlyenhancer/promoter

2079-2497

Syntheticneomycinphosphotransferase

(Neor)codingregion

2522-3316

Syntheticpoly(A)signal

3341-3389

ReporterVectorprimer4(RVprimer4)bindingregion

3456-3475

ColE1-derivedplasmidreplicationorigin

3713

SyntheticBeta-lactamase(Ampr)codingregion

4504-5364

Syntheticpoly(A)signal/transcriptionalpausesite

5469-5622

ReporterVectorprimer3(RVprimer3)bindingregion

5571-5590pARE-Luc(碧云天公司-D2112)pARE-luc的多克隆位点及AREresponseelement

BglI

KpnI

NheI

XhoI

AREresponseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGAGACTGAGGGTGACTCAGCAA

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGGAGCTCTGACTCCCACTGAGTCGTT

BglII

HindIII

51

AATCACTGAGGGTGACTCAGCAAAATCAGATCTGCAGAAGCTTGGCAATC

TTAGTGACTCCCACTGAGTCGTTTTAGTCTAGACGTCTTCGAACCGTTAG用于检测糖皮质激素响应元件(glucocorticoidresponseelement,GRE)

转录激活水平的报告基因质粒。pGRE-luc是以碧云天的pGL6质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个GRE位点，可以高灵敏度地检测GRE的激活水平，检测糖皮质激素介导的信号途径(glucocorticoid-mediatedsignalingpathway)的激活水平。

pGRE-luc的多克隆位点及GREresponseelement的详细图谱如下

BglI

KpnI

NheI

GRE

1GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGGTACATTTTGTTCTAGAACAAAAT

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCCATGTAAAACAAGATCTTGTTTTA

BglII

HindIII

51

GTACCGGTACATTTTGTTCT

AGATCTGCAGAAGCTTGGCAATCCGGTACT

CATGGCCATGTAAAACAAGA

TCTAGACGTCTTCGAACCGTTAGGCCATGApGRE-Luc(碧云天公司-D2152)检测ISRE转录活性水平的报告基因质粒。

pISRE-TA-luc是以碧云天的pGL6-TA质粒为模板，在其多克隆位点插入了多个ISRE结合位点，可以高灵敏度地检测ISRE的激活水平。

pISRE-TA-luc的多克隆位点及ISREresponseelement的详细图谱如下：

BglI

KpnI

NheI

ISREresponseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTG

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCTTTGACTTTGACTTTGACTTTGAC

BglII

HindIII

51

AAACTGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTGAAACTAGATCTGCAGAAGCT

TTTGACTTTGACTTTGACTTTGACTTTGACTTTGATCTAGACGTCTTCGA

MinimalTApromoter

101TAGACACTAGAGGGTATA

ATCTGTGATCTCCCATATISRE报告基因是吉满生物自主研发的用于检测STAT1/STAT2转录活性水平为目的的报告基因。STATs是一类重要的核转录因子，共包括STAT1~STAT4，STAT5a，STAT5b及STAT67个成员，它们与细胞增殖、分化和凋亡密切相关，其中STAT1和STAT2参与了细胞的凋亡控制。ISRE报告基因主要检测细胞TypeIInterferon信号通路中STAT1/STAT2的转录活性ISRE-Luc(碧云天公司-D2152)激活STAT3后形成STAT3二聚体和STAT1/STAT3异质二聚体，它们与SIS-inducibleelement（SIE）反应元件进行相互作用调控细胞的生长和凋亡。STAT3(signaltransducersandactivatorsoftransduction-3)报告基因与多种恶性肿瘤的发生、发展和侵袭转移关系密切。pSTAT3-TA-luc的多克隆位点及STAT3responseelement的详细图谱如下：

BglI

KpnI

NheI

XhoI

STAT3responseelement

1

GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCCTCGAGTGCTTCCCGAACGTTGCTT

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGGAGCTCACGAAGGGCTTGCAACGAA

BglII

HindIII

51

CCCGAACGTTGCTTCCCGAACGTTGCTTCCGAACGTAGATCTGCAGAAGC

GGGCTTGCAACGAAGGGCTTGCAACGAAGGCTTGCATCTAGACGTCTTCG

MinimalTApromoter

101TTAGACACTAGAGGGTATA

AATCTGTGATCTCCCATATpSIE-Luc(秦樾实验室)pNFkB-Luc（上海健康所）

BglI

KpnI

NheI

NFkBresponseelememt

1GGCCTAACTGGCCGGTACCGCTAGCGGGAATTTCCGGGAATTTCCGGGAA

CCGGATTGACCGGCCATGGCGATCGCCCTTAAAGGCCCTTAAAGGCCCTT

BglII

HindIII

MinimalTApromoter

51

TTTCCGGGAATTTCCAGATCTGCAGAAGCTTAGACACTAGAGGGTATATA

AAAGGCCCTTAAAGGTCTAGACGTCTTCGAATCTGTGATCTCCCATATATNF-κB基因在炎症反应、免疫应答和抑制细胞凋亡等方面有着重要的作用。pSTAT4-Luc(吉满公司GM-021081)REPOTMSTAT4报告基因是吉满生物自主研发的用于检测STAT4转录活性水平为目的的报告基因。STAT4主要是被IL-12激活，它在Th1/Th2的分化调控及因此失调引发的各种炎症性疾病中发挥着重要的作用。REPOTMSTAT4报告基因主要应用于Inflammation信号通路、药物研究、相关基因的调控和功能的研究。pSTAT5-Luc(吉满公司GM-021054)REPOTMSTAT5报告基因是吉满生物自主研发的用于检测STAT5转录活性水平为目的的报告基因。Stat5是信号转导和转录活化蛋白(signaltransductionandactivatoroftranscription,Stat)家族的重要成员，参与了Jak/Stat信号通路调控。Stat5能够影响细胞的增殖、分化、存活与凋亡,并且在乳腺发育、免疫应答、干细胞自我更新调控、造血作用以及肿瘤的发生发展等中具有重要作用。REPOTMSTAT5报告基因主要用于检测Jak/Stat信号通路、药物研究、pSTAT6-Luc(吉满公司GM-021084)REPOTMSTAT6报告基因是吉满生物自主研发的用于检测STAT6转录活性水平为目的的报告基因。信号转导及转录激活蛋白6(Signaltransducerandactivatoroftranscription6，STAT6)是具有重要意义的一类转录因子，它对白细胞介素4（Interleukin4,IL-4）和白细胞介素13（Interleukin13,IL-13）有应答反应，并且与传导通路的异常活跃与过敏性疾病的发生密切相关。REPOTMSTAT6报告基因主要检测细胞STAT6信号通路中STAT6的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。REPOTMSRE报告基因是吉满生物自主研发的用于检测SBE转录活性水平为目的的报告基因。Smads家族蛋白在TGF-β信号从细胞表面受体传导至细胞核的过程中起关键作用，且不同的Smads介导不同的TGF-β家族成员的信号转导。TGF-β作为配体形成的受体复合物，激活Smads进入核内，共同激活或抑制它们调节的靶基因的转录。。REPOTMSRE报告基因主要检测细胞TGF-β信号通路中Smads的转录活性、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。pGMSRE-Lu是吉满生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入了多个SRE结合位点，可以高灵敏度地检测SRE的激活水平pSRE-Luc(吉满公司GM-021086)REPOTMIRF1报告基因是吉满生物自主研发的用于检测IRF1转录活性水平为目的的报告基因。IRF1(InterferonRegulatoryFactor1)是IRF家族中最早被发现的核转录因子，具有广泛的生物学功能，它调节干扰素系统，抑制细胞生长，抑制肿瘤形成。REPOTMIRF1报告基因主要用于检测细胞中的InterferonRegulation信号通路、药物研究以及基因过表达和RNAi的表型分析等。pGMIRF1-Lu是吉满生物改造后的哺乳动物真核表达载体，在其多克隆位点插入